理肺通络合剂对肺炎支原体肺炎模型肺组织损伤的影响

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作者：鲁艳芳，向希雄，刘红艳，陈陶后

【摘要】 目的：用现代检测指标，客观评价理肺通络合剂治疗大鼠肺炎支原体肺炎的疗效。方法：6周龄SPF级雄性Wistar大鼠40只，随机分为4组：正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。经3 d适应性饲养后用乙醚麻醉动物，模型组、中药组、西药组1次性滴鼻感染肺炎支原体国际标准株MPFH菌液0．3 mL／只造模，正常组予生理盐水0．3 mL／只滴鼻。感染第11 d起，分别灌胃生理盐水、理肺通络合剂水煎剂、阿奇霉素溶液2 mL／只。在治疗的第11 d处死动物，摘眼球取血。观察大鼠一般情况及光镜下各组大鼠右肺下叶HE染色病理变化，采用被动凝集法检测大鼠血清MP,IgM滴度。结果：（1）经治疗10 d，中药组、西药组大鼠皮毛较有光泽，鼻周干净、呼吸平稳、活动正常、进食增加，而模型组一般情况改善不甚明显。光镜HE染色显示模型组肺组织炎细胞浸润和组织损伤重于各治疗组，中药组病理损伤较西药组轻微。（2）血清MP,IgM滴度显示模型组和各治疗组血清MP,IgM均为阳性（＞ 1：80），模型组MP,IgM滴度较中药组、西药组显著增高（P ＜ 0．01）。中药组、西药组比较无显著差异。结论：理肺通络合剂能降低肺炎支原体肺炎大鼠血清MP,IgM水平，减轻肺组织的病理损伤，改善一般情况，对大鼠肺炎支原体肺炎有确切的治疗作用。

【关键词】 肺炎支原体肺炎；理肺通络合剂；MP,IgM；肺组织损伤

肺炎支原体肺炎（mycoplasma pneumonia of pneumonia，MPP）是由肺炎支原体（MP）引起的肺部急性炎症，其主要病理变化为气管、支气管、毛细支气管等黏膜充血，管腔内黏液与脓性泌出物充盈。镜检可见支气管、细支气管周围与肺泡间隔中有水肿和单核细胞浸润，支气管黏膜可有坏死和脱落并有中性粒细胞浸润。肺部病变中，有片状或融合性支气管肺炎、间质性肺炎或大叶性肺炎，以肺门周围及下叶单侧较多见。MP,IgM是机体受MP感染时最早出现的特异性抗体,大多数文献报道，MP,IgM在感染后1周内产生［1－2］， 1月左右达到高峰，持续3月或更长的时间才能转阴。也有报道称该抗体于发病后1～2 d即可检出［3］。

本实验观察了理肺通络合剂对肺炎支原体肺炎模型大鼠一般情况、血清MP,IgM滴度和肺组织病理损伤的影响，探讨理肺通络合剂对于减轻呼吸道症状、 降低血清MP,IgM滴度、改善肺组织病理损伤方面的作用。

1 实验材料

1．1 动物

选择6周龄SPF级雄性Wistar大鼠40只，质量（150 ± 10）g，由湖北省疾病控制中心提供，许可证号：SCXK（鄂）2003－0005。 Wistar大鼠以颗粒饲料喂养。

1．2 药物

理肺通络合剂组方：黄芪30 g、沙参10 g、紫菀10 g、枳实10 g、百部10 g、麻黄7 g、杏仁10 g、蜈蚣1条、甘草6 g。购自湖北中医学院中药房，煎煮成3 g／mL水煎剂，高压灭菌后置冰箱中备用。阿奇霉素临用前配成5．5 mg／mL溶液（按50 mg／kg·d计算）。

1．3 试剂及仪器

肺炎支原体抗体被动凝集诊断试剂盒，购自富士瑞必欧株式会社。GL－20G－Ⅱ冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂生产）；WKYⅢ型微量移液器（上海荣泰生化工程有限公司生产）；“U”型微量反应板（武汉科惠生物公司生产）。

2 实验方法

2．1 动物实验及样本处理

大鼠随机分为4组：正常组、模型组、中药组、西药组，每组10只。经3 d适应性饲养后,模型组、中药组、西药组用乙醚麻醉动物，一次性滴鼻感染肺炎支原体（MPFH）菌液（含肺炎支原体107变色单位／mL）0．3 mL／只。正常组予生理盐水0．3 mL／只滴鼻。感染第11 d起，模型组、中药组、西药组分别灌胃，灌服生理盐水、理肺通络合剂水煎剂、阿奇霉素溶液2 mL／只。中药组连续灌服10 d；西药组前、后3 d灌服药液，中间4 d灌服生理盐水。在治疗的第11 d处死动物，摘眼球取血。取右肺组织相同部位，10 ％福尔马林固定，切片在光学显微镜下观察。

2．2 实验大鼠血清MP,IgM检测

2．2．1 检测原理

肺炎支原体抗体诊断试剂是用肺炎支原体细胞膜成分致敏人工明胶粒子制造而成，其原理是致敏粒子与血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。

2．2．2 检测操作步骤

不抗凝血置3000 r ／min的离心机离心10 min分离血清。试验前30 min用规定量的血清稀释液复溶致敏粒子和未致敏粒子，用一支经校正准确的滴管向第1孔中滴加100 μL、向第2至第7孔中各滴加25 μL血清稀释液。用微量移液器向第1孔中滴加25 μL样品，然后用微量移液器从第1孔至第7孔进行对倍稀释。用试剂盒中提供的一只滴管向第2孔中滴加25 μL未致敏粒子、用试剂盒中提供的另一只滴管向第3孔至第7孔各滴加25 μL致敏粒子。充分混匀各孔中内容物，加盖，室温下静置3 h，然后读取凝集图象。

2．3 统计学处理

采用多个样本间两两比较的秩和检验，P ＜ 0．05表示有统计学意义。

3 实验结果

3．1 一般情况

自造模第7 d开始，大鼠皮毛渐欠光泽，鼻周见分泌物，呼吸稍急促，活动及进食减少。造模第11 d，大鼠鼻周见血性、脓性分泌物，舌质暗，呼吸急促，鼻唇周围发绀，活动及进食明显减少，饮水增多，大便干且颗粒小。经治疗10 d后观察，中药组大鼠皮毛有光泽，鼻周干净，舌质淡红，呼吸平稳，进食、活动正常；西药组大鼠皮毛较有光泽，鼻周干净，舌质淡紫，呼吸平稳，活动正常，进食较前增加，大便质稀；造模组大鼠鼻周见少许脓性分泌物，舌质及舌下静脉紫暗，呼吸稍急促，活动、进食减少，大便干结。

3．2 实验大鼠血清MP,IgM检测情况

见表1。

从表1可见，正常组血清MP,IgM检测均为阴性，余各组均为阳性≥1：80，故仅进行模型组、中药组、西药组间的比较。结果见表2。表2实验结果显示，模型组血清MP,IgM 滴度显著增高，与中药组、西药组比较有非常显著性差异（P ＜ 0．01）。中药组、西药组MP,IgM均为阳性（≥1：80），两者比较无显著差异。

3．3 肺组织肉眼观察及病理检查

肉眼观察：暴露胸腔后，见正常组肺组织淡粉色，形态完整，表面光滑，切开后无病理性分泌物。其余各组肺组织大部分有充血，表面欠光滑，均有不同程度的暗红色改变，以肺门周围和下叶多见，切开后可见脓性分泌物。其中造模组病变范围较治疗两组面积大，脓性分泌物量多。

病理检查显示：正常组的肺组织无间质性肺炎改变，仅个别大鼠小支气管有少数淋巴样细胞浸润；模型组可见肺泡间隔增宽，支气管、细支气管周围与肺泡间隔内毛细血管明显充盈，有程度不等的淋巴样细胞、个别单核细胞及分叶核白细胞浸润，间质呈明显的炎性改变；中药组、西药组病变严重程度轻于模型组，间质小血管周围散在少数淋巴样细胞及个别单核细胞浸润。邻近的肺泡间隔稍增宽，毛细血管充盈。中药组病变部位较西药组少，无肺泡壁增厚及破坏，炎性细胞浸润较西药组轻。

实验结果表明，肺炎支原体肺炎大鼠有鼻周血性、脓性分泌物，呼吸急促，鼻唇周围发绀，活动、进食明显减少，饮水增多，大便干，舌质暗等表现，说明模型组大鼠有肺气郁闭，邪阻肺络，肺之气阴受损的特点。血清MP,IgM阳性和肺组织病理检查证实本实验造模成功。理肺通络合剂和阿奇霉素均可不同程度地减轻呼吸道症状，降低血清MP,IgM滴度，改善肺组织病理损伤。在本实验周期内两者降低血清MP,IgM滴度作用相当，理肺通络合剂对于减轻呼吸道症状、改善肺组织病理损伤方面作用优于阿奇霉素。

4 讨论

中医典籍无“支原体”之说，多数医家认为本病是由外邪犯肺、肺失宣降、肺热熏蒸、炼液成痰、痰阻气道、肺气因之郁闭所致，属于“肺炎喘嗽”范畴。我们认为小儿呼吸道肺炎支原体感染有传染性，具有温病热易伤津耗气的特点，加之小儿“稚阳未充，稚阴未长”，故肺之气阴损伤较易出现。本实验支原体肺炎大鼠模型有鼻周血性、脓性分泌物，呼吸急促，活动减少，饮水增多，大便干、颗粒小等表现，符合中医肺气闭郁、肺气虚、肺阴伤的特点。这与王雪峰等［4］报道的MP肺炎较其他病原体感染更易、更早出现阴伤相符。临床上医者诊断患儿支原体感染时病程多已1周，此时邪气未去，而正气已损，故我们主张治疗宜扶正祛邪并举。肺炎支原体感染中医辨证不能照搬肺炎喘嗽。肺炎喘嗽以肺气郁闭为病机要点，肺炎支原体感染以肺气宣肃失常为要，不仅要宣肺还要降气。理肺通络合剂中以黄芪补肺气， 沙参养肺阴，紫菀下气止咳，枳实行气化痰，麻黄、杏仁宣肺平喘，百部杀虫润肺止咳，蜈蚣活血搜风止痉。诸药合用，共奏理肺通络、扶正祛邪之功效。

现代药理学证明，黄芪具有免疫双向调节作用，这也是黄芪补气固本之根本［5］；沙参有祛痰、强心和抗真菌作用；紫菀有显著的祛痰作用；枳实有较强的抗过敏活性［6］；麻黄药理作用广泛?熏已经报道的有发汗、利尿、镇咳、平喘、抗过敏等［7］；杏仁能抑制呼吸中枢而起到镇咳平喘作用；百部能降低呼吸中枢兴奋性，抑制咳嗽反射，对支气管痉挛能起到松弛作用［8］；蜈蚣具有抗炎、镇痛、抑菌作用?眼9?演。综上所述，理肺通络合剂不但具有抗炎抑菌、祛痰镇咳平喘等功效，还有免疫调节作用。

肺炎支原体感染后可产生多种免疫应答，如支原体具有耐热或不耐热的丝裂原，可多克隆激活B细胞增殖，产生特异性和非特异性抗体。人体感染MP后体内可先后产生IgM、IgG、IgA。现有研究表明，MPP急性期和恢复期血清IgG、IgM、IgA免疫复合物和补体C1q、C4、C3、B因子等含量明显增高，重症者尤为明显，提示各种免疫球蛋白及补体在支原体感染中均发挥作用。

IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大者，又称巨球蛋白，是初次体液免疫应答早期阶段产生的主要Ig［10］。在感染早期，IgM抗体分泌细胞多于IgA及IgG抗体分泌细胞（其中有较多数量的MP非特异性IgM细胞）。随着病程延长，后两种抗体细胞数量逐渐增加，但分泌IgA细胞功能维持时间短，且特异性小，常不作为临床诊断MP的检测指标，反之特异性IgM可作为检测MP指标［11］。

本实验中，模型组较正常组血清MP,IgM滴度升高，经理肺通络合剂治疗，血清MP,IgM滴度降低，表明理肺通络合剂能降低实验大鼠血清MP,IgM滴度，反映出其可能有抑制支原体在体内生长的作用。支原体感染诱发机体的免疫应答可能加重病理过程，肺组织病理检查反映理肺通络合剂在改善病理损伤方面作用优于阿奇霉素，其机理有待进一步研究。

【参考文献】

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［3］Dorigo,Zetsma JW， Zaat SAT， Dillen PMEW，et al．Comp , arison of PCR，culture and serological tests for diagnosis ofmycoplasma pneumoniaerespiratory tract infection inchildren ［J］． JClinMicrobol，1999，371：14．

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［9］韩双红． 蜈蚣的研究进展［J］．天津药学，2002，14（5）：13－15．

［10］龚非力． 医学免疫学［M］．北京：科学技术出版社， 2000：38．