淮安市微生物实验室间质控结果分析
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[摘要] 目的：2009年11月参加淮安市疾控机构微生物实验室间质控活动，通过此次活动，发现存在问题，及时纠正错误，以便提高实验室微生物检测的能力和水平。方法：以《食品卫生微生物学检验》GB/T4789―2003（2008）为标准。结果：淮安市疾控中心2009年实验室间质控考核结果通报，本中心微生物质控结果为合格。结论：通过此次质控结果显示，本中心的微生物检测能力和水平有较显著的提高。
[关键词] 微生物检验；质量控制；实验室间比对试验
[中图分类号] R117[文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2010）11（a）-072-02
微生物检测实验室是疾病预防控制和卫生监督工作十分重要的技术支撑之一，主要承担着传染病监测与检测、卫生细菌学检测、医院消毒质量监测及消毒产品检测等方面的任务，技术手段涵盖微生物学、免疫学、分子生物学、细胞生物学等学科，其检测过程的质量控制尤为重要。开展微生物检测质量控制，参与实验室间比对和能力验证活动，对所接受盲样的分离鉴定工作能提高微生物检测人员的检测能力，同时也能提高微生物实验室检测各种样品的技术水平。因此，每年我们都要定期参加淮安市CDC的质控考核活动。现将2009年微生物实验室间的质控考核及检验结果报道如下：
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 质控样品：淮安市CDC下发的5 ml螺口塑料试和装半固体菌种一份，编号1号。
1.1.2 培养基：本次质控所用培养基为江苏博达微生物试剂有限公司及抗州天和微生物试剂有限公司提供，均在有效期内使用。自配试剂按GB/ T4789―2003配制。
1.1.3 诊断血清：沙门菌属诊断血清及O1群和O139霍乱弧菌诊断血清由兰州生物制品研究所生产，在有效期内使用。
1.1.4 质控标准菌株：乙型副伤寒沙门菌标准菌株，菌株号为50004、非O1群霍乱弧菌标准菌株，标准号为N92001。均购自江苏省博达微生物试剂有限公司。
1.2 方法
《食品卫生微生物学检验》GB/T4789―2003[1]、《霍乱诊断标准》WS-2008[2]、《食品卫生微生物学检验 沙门菌检验》GB/T4789.4―2008[3]。
2 检验步骤
2.1增菌培养
无菌操作下开启试管装半固体，挑取混匀后的半固体分别接种到下列增菌液，观察各增菌液生长情况。见表1。
取生长情况浑浊的SC、GN增菌液各1环，分别接种到麦康凯平板、SS平板上，取葡萄糖肉浸液肉汤、营养肉汤各1环分别接种血琼脂平板和普通平板，取碱性蛋白胨水划线接种TCBS平板、碱性琼脂平板，37℃ 24 h培养，观察各平板上的菌落特征。
2.2分离培养情况
SS平板和麦康凯平板上可见圆形、湿润、透明光滑中等大小菌落，在SS平板上呈中心褐色；普通平板上有两种菌落，一种为无色半透明圆形较小菌落，另一种为无色透明扁平光滑湿润较大菌落；血平板上也有两种菌落，一种为乳白色圆形不透明小菌落，无溶血环，一种为无色透明扁平较大菌落，有溶血环；TCBS平板上有黄色较小菌落；碱性琼脂平板上有扁平光滑湿润透明的较大菌落，无拉丝现象。
2.3 麦康凯及SS平板上挑取可疑菌落以及普通平板和血琼脂平板上较小菌落
分别从麦康凯及SS平板上挑取可疑菌落以及普通平板和血琼脂平板上较小菌落进行氧化酶试验和染色镜检。结果：氧化酶-，G-无芽胞短小杆菌。
2.3.1 接种双糖铁琼脂斜面，37℃ 24 h培养。结果均为：斜面-、底层产酸产气、硫化氢+、动力+。
2.3.2生化试验及血清学鉴定。
2.3.4挑取斜面上菌苔做下列生化试验[4-5]，37℃，24~48 h培养，生化结果见表2。
2.3.5血清学鉴定：沙门菌属A-F群多价O：++++；O4：++++；O12：++；O1：－；O5：－；Hb：++；H5：－；H2：－；Henx：－；Hw：－；盐水：－。
2.3.6同时用标准菌株50004乙型副伤寒沙门菌作对照，生化试验、血清学结果基本同上。
2.3.7结果报告：报检出乙型副伤寒沙门菌（抗原模式为4，12：b）。
2.4 TCBS上黄色菌落、碱性琼脂平板上菌落、血平板和普通平板上较大菌落
挑取TCBS上黄色菌落、碱性琼脂平板上菌落、血平板和普通平板上较大菌落做氧化酶试验和镜检。结果：氧化酶+，G-弯曲菌。
2.4.1挑取典型菌落作纯培养，再进行血清学凝集试验。霍乱弧菌O1群多价：－；霍乱弧菌O139：－；盐水对照：－。
2.4.2 生化试验。
2.4.3 挑取纯培养物做下列生化试验[4-5]，37℃，24~48 h培养，生化结果见表3。
2.4.4同时用标准菌珠N92001非O1群霍乱弧菌作阳性对照，生化试验、血清凝集试验结果基本一致。
2.4.5结果报告：报检出非O1群霍乱弧菌。
3 结果
依据菌落特征、菌体形态、生化反应结果及血清学凝集试验，1号质控样中检出乙型副伤寒沙门菌和非O1群霍乱弧菌。
将质控样品检测结果上报淮安市CDC，结果全部正确。
4 讨论
面对当前突发公共卫生事件发生，因涉及范围广，危害性大，在社会上日益被重视，这对检验技术、速度提出了更高要求[6]。实验室间比对以及水平测试、能力验证是体现实验室质量水平和技术能力最具有说服力的手段，实验室应尽可能参加与其检测范围相关的外部质量评估计划（如能力验证）和实验室间比对试验。实验室使用外部质量评估计划不仅可评定检测结果的偏差，还可以检查整个质量管理体系的有效性[7]。微生物检测实验室与其他类型实验室一样，质量体系的建立与质量控制工作是维系实验室运作的生命之源，其检测结果的准确性和可靠性，反映了该疾控中心的技术能力和技术水平。
参加上级卫生部门组织的实验室间比对试验，并做好这项工作，是建立在一个较好的室内质控的基础上，所以做好微生物实验室质量控制直接关系到日常检测工作的质量[8]，实验室室内质量控制是产生精确和可靠结果的基础和核心[9]。这就要求我们要把室内质量控制工作认真、具体地落实到日常工作的每一个环节中，做试验时要严格遵守微生物检验操作规程，配制培养基时要严格按照国标中的配方要求制备，并做好配制记录、效能试验和无菌试验，生化反应试剂以及诊断血清要在有效期内使用，定期对培养基、生化反应试剂及诊断血清用标准菌株进行质量控制，所在检测设备均要进行定期检定或自校准。同时本次实验操作过程中，我们将生物安全要求体现在每一个环节中，实验室的结构和布局按2级生物安全防护实验室要求，严格地注意个人防护，戴口罩、手套，穿工作服，在生物安全柜中操作，将废弃物放置特定容器，经高压处理后集中处理。只有做好室内质量控制工作，才能增强室间质量控制结果的准确性和可靠性。
随着全球经济一体化进程的日益加快，我国的检验市场将全面开放，实验室将面临市场经济的严峻挑战，委托人有自主选择可信赖、有资质的实验室做样品检测，这就要求实验室必须转变观念，以市场需求为导向，以客户满意为中心，以提高质量求生存，以技术能力为依托，坚持科学发展观，严格规范各类检测行为，坚持不懈地不断提高检验人员的检测技术水平，确保提供给委托人的检验结果科学、准确、公正。
[参考文献]
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[3]卫生部,国标委．GB/T4789.4―2008食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验[S].北京:中国标准出版社,2008:1-10．
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(收稿日期：2010-08-05)