盐酸多巴胺注射液有关物质测定

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【摘要】目的筛选合适的高效液相色谱条件，测定盐酸多巴胺注射液的有关物质。方法采用不加校正因子的主成分自身对照法，采用RPHPLC；色谱柱为DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相为［0.005mol/mL十二烷基硫酸钠冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二钠(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；柱温：40℃；流速：1.20mL/min；检测波长280nm。结果在1～12μg/mL范围内线性良好，测定标准曲线为Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）；最低检测限为0.9997ng。结论该法专属性强，准确，灵敏，可用于盐酸多巴胺注射液有关物质的检查。

【关键词】RPHPLC法；盐酸多巴胺注射液；有关物质

盐酸多巴胺（dopaminehydrochloride）注射液的有关物质检查，中国药典［1］中并没有收载。英国药典中收载的灭菌多巴胺浓溶液和注射用盐酸多巴胺采用薄层色谱法，需用盐酸甲基多巴胺对照品（4Omethyldopaminehydrochloride和3Omethyldopaminehydrochloride）测定系统适用性［2］。本文采用HPLC法进行有关物质检查，方法准确，重现性好，灵敏度高，可作为本品的有关物质检查方法，更有效的对其进行质量监控。

1仪器与试药

TU1901型紫外可见分光光度计，美国Waters1525高效液相色谱仪，日本ShimadzuLC10Avp高效液相色谱仪。甲醇、冰醋酸、十二烷基硫酸钠和乙二胺四醋酸二钠均为分析纯试剂。盐酸多巴胺注射液由广州白云山明兴制药有限公司提供，批号为050107，050501，060703。

2色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：［0.005mol/mL十二烷基硫酸钠冰醋酸0.1mol/mL乙二胺四醋酸二钠(700∶10∶2)］乙腈(6∶4)；流速：1.2mL/min；检测波长280nm；理论板数按盐酸多巴胺峰计算为3600。在以上色谱条件下，盐酸多巴胺保留时间约为5min，见图1。

A.酸性破坏试验B.碱性破坏试验C.加热破坏试验D.氧化破坏试验E.光照破坏试验F.溶解介质氧化破坏试验G.溶解介质碱性破坏试验

图1盐酸多巴胺降解产物色谱图（略）

Fig.1HPLCchromatogramsofdecompositionproductsofdopaminehydrochloride

3方法与结果

3.1方法的专属性考察

取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相制成每1mL中含300μg的溶液，取5mL置试管中，加热30min进行加热破坏试验；取5mL置试管中，加质量分数为10%的盐酸溶液2滴，加热30min后用质量分数为10%的NaOH溶液调为中性作为酸性破坏试验；取5mL置试管中，加质量分数为10%的NaOH溶液2滴，加热30min后加质量分数为10%盐酸溶液调为中性作为碱性破坏试验；取5mL置试管中，加质量分数为30%的过氧化氢2滴，加热30min作为氧化破坏试验；取5mL置试管中，在紫外灯366nm下光照1h作为光照破坏试验；同时做溶解介质的破坏性试验。各取上述溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果酸性和碱性对盐酸多巴胺有明显的破坏，溶解介质约在1.1min和1.4min有杂质峰，拟定的色谱条件对分解产物与主峰有良好的分离，表明方法的专属性强，见图1。

3.2方法的耐用性考察

选用DiamonsilC18（4.6mm×150mm，5μm）、江苏汉邦C18（4.6mm×250mm，5μm）、AlltechC18（4.6mm×150mm，5μm）色谱柱等3种不同品牌不同填料的C18色谱柱，取破坏性溶液进样，结果3种色谱柱对分解产物与主峰均能达到有效分离。

3.3线性范围

精密称取盐酸多巴胺对照品适量，用流动相溶解并稀释成每1mL含1～12μg的11个溶液，依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，求得回归方程：Y=36493X-629.88（r=0.9996，n=11）。盐酸盐多巴胺在1～12μg/mL范围内呈良好线性关系。

3.4检测限

按上述色谱条件，以信噪比为3∶1对检出限进行测定，测得盐酸多巴胺在此条件下的检出限为0.9997ng。

3.5供试品的测定

精密量取本品适量，加流动相稀释成每1mL中含300μg的溶液作为供试品溶液；精密量取1mL，置50mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作为对照溶液。量取对照溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸多巴胺峰的保留时间约在5min，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为记录仪满量程的20％～25％。再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸多巴胺保留时间的3倍。供试品溶色谱图见图2，检验结果见表1。

A.空白溶剂B.1%对照溶液C.样品

图2盐酸多巴胺注射液有关物质检查色谱图（略）

Fig.2HPLCchromatogramsofdopaminehydrochlorideinjection

表1样品测定结果（略）

Tab.1Determinationresultsofsample

4讨论

4.1取破坏性实验项下盐酸多巴胺原溶液（未经破坏），照分光光度法在200～360nm范围内扫描，供试品溶液在280nm处有最大吸收，且无其他干扰，所以将检测波长定为280nm。

4.2按拟定的方法和色谱条件，盐酸多巴胺经酸、碱、氧化、光照、加热等条件破坏产生的杂质有良好的分离，方法可行。主峰保留时间在5min时，保留时间约在3、4、8min处有杂质峰。

4.3方法耐用性的考察中选用的3种色谱柱对分解产物与主峰均能达到有效分离，表明该法对色谱柱的选择无特殊要求。

4.4经测定3批样品，单个杂质峰面积均不大于对照溶液中盐酸多巴胺峰面积的1.25倍（2.5%）,且没有多于一个杂质峰的峰面积大于对照溶液中盐酸多巴胺峰的峰面积（2%）。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中华人民共和国国药典:2005版二部［Z］.北京:化学工业出版社,2005:500.

［2］BP［Z］.2007.2531