云南省不同地区滇重楼皂苷含量的对比及影响因子分析

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[摘要] 用HPLC对采自云南省不同地区的22份滇重楼样品进行6种皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ，PA，H含量测定，用SPSS 17.0进行数据分析不同产区对皂苷含量的影响；结果表明滇重楼生长的海拔对皂苷含量的影响并不显著，而生长地区对皂苷含量影响较为显著，滇西的滇重楼明显高于其他各产区，具有明显的地区依赖性。

[关键词] 滇重楼；皂苷；含量；地理位置；海拔

[收稿日期] 2013-07-18

[基金项目] 中央公益性科研院所基本科研业务专项（YN-0902）

[通信作者] *高微微，研究员，博士生导师，E-mail：

[作者简介] 李海涛，助理研究员，主要从事药用植物资源生态学研究，Tel：13988100862，E-mail：

滇重楼Paris polyphylla var. yunnanensis为延龄草科Trilliaceae重楼属Paris多年生草本植物，主要分布于我国云南、四川和贵州一带，常生长在海拔1 400～3 100 m的常绿阔叶林、云南松林、竹林、灌丛或草坡中，是我国西南地区的重要药材[1]，具有极大的开发前景。滇重楼是《中国药典》（2010年版）重楼药材的主要的来源植物，具有抗癌、清热解毒、消肿止痛和止血等作用，治疗跌打损伤有独特疗效，是“云南白药”、“季胜德蛇药片”、“热毒清”和“宫血宁”等多种中成药的主要原料之一[2]。

重楼中的甾体皂苷是其主要的活性成分，现代药理学研究证明其具有良好的抗肿瘤活性[3-5]。近年来市场对滇重楼的需求量急剧上升，由于长期过度采挖，野生资源锐减，滇重楼的人工栽培技术研究逐渐展开，规模化种植成为制药企业的发展趋势。滇重楼的药用成分——总皂苷含量受地理环境、土壤和气候的影响而存在差异，加之滇重楼生长缓慢，种子萌发到收获利用要10多年时间，从而导致重楼质量的不稳定。本研究通过对云南省滇重楼主要分布区的样品中偏诺类皂苷（Ⅵ，Ⅶ，PA，H）和薯蓣皂苷类皂苷（Ⅰ，Ⅱ）共6种皂苷的含量进行分析，以确定不同地区滇重楼的品质差异，并分析影响皂苷含量的主要地理因子，旨在为选育优良品种和选择合适人工种植地提理论供依据，以提高滇重楼的药材的产量和质量。

1 材料

试验材料主要来自云南省滇重楼的主要产区，即以玉溪地区为代表的滇中高原区，大理、丽江、香格里拉及高黎贡山一线的滇西地区，普洱以南的滇南地区，靠近广西和越南的红河文山一带的滇东南地区。采集时间为滇重楼的花期，以准确鉴定物种，共采集到滇重楼样本25份，记录植株当地的地理、土壤和气候特征的相关数据，采集地信息见表1。标本经中国科学院昆明植物研究所纪运恒副研究员和云南白药集团赵廷周工程师鉴定。

高效液相色谱仪（Agilent 1100），自动进样器，DAD检测器。乙腈为色谱纯，水为三蒸水。重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ对照品购自中国食品药品检定研究院（批号111590-200402，111591-200402，111592-200402，111593-200402）；重楼皂苷PA，H（纯度99%）对照品购于中国科学院昆明植物研究所。

2 方法与结果

2.1 样品处理 新鲜植株采集后除去泥沙，40 ℃烘干，粉碎，备用。

2.2 色谱条件 Agilent SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱，0～10 min，5%～20% A，10～50 min，20%～42%A，50～90 min，42%～80%A，90～100 min，80%～95%A，洗脱时间为100 min；检测波长203 nm；体积流量1.0 mL·min-1；柱温30 ℃，进样量10 μL。

2.3 线性关系 分别取在40 ℃下干燥的重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ，PA，H对照品适量，精密称定，用甲醇制成0.4 g·L-1的对照品溶液，分别进样4，12，14，16，20 μL，得到回归方程为：AⅠ=561.18CⅠ+16.2，r=0.999 8；AⅡ=39.73CⅡ+14.4，r=0.999 4；AⅥ=645.07CⅥ+13.2，r=0.999 2；AⅦ=462.4，CⅦ+19.8，r=0.999 5；APA=603.16CPA+20.1，r=0.999 7；AH=617.69CH+14.6，r=0.999 3。

2.4 精密度，稳定性，重复性，回收率试验 重楼皂苷的精密度，稳定性，重复性的RSD范围分别为0.97%～1.3%，1.3%～1.7%，1.2%～1.5%，表明精密度，稳定性，重复性良好；重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ，PA，H加样回收率分别为98.73%，98.17%，98.86%，98.01%，98.92%，98.33%，加样回收率的RSD范围分别为1.0%～1.4%，0.74%～1.2%，1.1%～1.4%，1.2%～1.7%，0.9%～1.6%，1.3%～1.8%。

2.5 样品测定 对照品溶液和供试品溶液的制备按2010年版《中国药典》一部重楼药材项下含量测定的有关规定进行，每份样品平行测定3次，结果取平均值，各样品重楼皂苷Ⅰ，Ⅱ，Ⅵ，Ⅶ测定的RSD分别为1.4%～1.9%，1.5～2.0%，1.2%～1.9%，1.5%～2.2%，1.6%～1.9%，1.7%～2.1%，测定结果见图1，表1。

图1 6种重楼皂苷对照品及样品色谱图

Fig.1 6 kinds of Paris polyphylla saponin reference substance and the sample chromatograms

表1 滇重楼各采集点信息及皂苷质量分数

Table 1 Acquisition point information and the content of saponins in Paris polyphylla var. yunnanensis

3 结果分析

将皂苷总量按海拔和不同种源地区进行分组进行单因素方差分析、一般线性模型分析、协方差分析和两两比较，同时进行Pearson相关分析，数据分析均在SPSS 17.0完成。

3.1 不同海拔和种源地区滇重楼皂苷总量对比 根据滇重楼的生长特性，海拔和不同种源地区是影响其品质的一个重要因素。将滇重楼不同海拔和采集地进行划分，其中海拔分为3组：第1组海拔1 000～1 500 m，第2组海拔1 500～2 000 m，第3组海拔2 000 m；同时将滇重楼在云南的种植区域分为4个不同种源地区，即滇中，滇西，滇南和滇东南。不同海拔与种源地区皂苷总量结果见表2，3个海拔组皂苷总量之间无显著差异，在对海拔和皂苷总量的Pearson相关分析中，两者之间也无显著相关（P=0.307）；不同种源地区皂苷总量之间有显著差异（P

表2 各海拔组和地区滇重楼皂苷总量

Table 2 Each elevation group and area of Paris polyphylla saponin

注：同一列不同字母的表示差异显著，P

3.2 不同海拔与种源地区滇重楼皂苷总量的GLM分析 单因子GLM方差分析结果表明，不同种源地区间的滇重楼皂苷含量有着非常显著的差异，其皂苷单因子GLM模型的F=6.164，P=0.005，达极显著水平，结果与单因素方差一致。然而，考虑到传统认知中海拔因素对植物有效成分的影响，在皂苷单因子GLM模型中引进海拔因子作为协变量继续分析地区因子对云南滇重楼皂苷含量的影响。结果显示，在对海拔因子进行协方差矫正之后，皂苷单因子GLM模型在统计学上依然具有其显著性意义，其F=5.322，P=0.009，不同地区间皂苷含量差异依然达99%的极显著性水平。由此，利用GLM协变量分析后的滇重楼皂苷含量的估计边际均值，采用LSD方法对4个不同地区进行两两对比，4组中的滇西地区与滇中和滇东南地区的皂苷含量存在着显著性差异，差值分别为0.689，0.427，达95%的显著水平。相对于没有引进海拔协变量的模型而言，协变量分析的结果将滇西和滇南的区别排除在外，二者差异不具统计学意义。

表3 不同地区间皂苷含量成对比较

Table 3 Pairwise comparison between different areas of saponin content

注：1）在0.05水平上差异显著。

4 结论与讨论

滇西地区滇重楼皂苷含量要明显高于其他地区，云南滇重楼种植和栽培可以在云南的不同地区实现，或者在新的地区通过扩大种植面积的方法而得到产量的提高，但不同地区滇重楼的药用价值是不一样的。如以区域划分，产于云南西部滇重楼在药用质量上要明显地优于其他区域，同时可以作为今后选育优异品种的种质材料，这与陈翠等的研究结论一致[6]。

海拔因子对皂苷含量的影响不显著，陈翠等的研究结果也表明生长海拔并不影响重楼的品质优劣[6]。

野生和家种的滇重楼的皂苷成分没有明显差异，本研究所采样品中涉及到的家种重楼均为野生环境中采挖后集中栽培，但栽培时间长短不一，其本质上仍是野生种源。同时，重楼的栽培环境有仿野生林下栽培、大棚栽培和露地栽培3种（表1），各种环境中的皂苷均值表现为林下（0.637 5%）>露地（0.586 0%）>野生（0.497 6%）>大棚（0.432 8%），栽培环境越接近于野生环境，药材皂苷含量越高。

滇重楼的产量和品质受到多种因素的综合影响，受小气候的影响较大[7]。小气候影响其物候期，周浓等人[8]的研究表明，滇重楼药材皂苷含量在营养生长期最低，授粉期和果熟期整体较高，衰老期稍有下降。所采集的野生重楼小气候环境不尽一致，大多处于营养生长期或初花期，即便是同一地区的样品，皂苷含量也有较大差异。

6种皂苷成分在22份测试样品中检出率为100%的是重楼皂苷Ⅱ，Ⅶ，H，其次是Ⅰ（90.91%），检出率最低的是PA，Ⅵ，仅为45.45%。但各成分的含量和检出率并没有明显的规律。

[参考文献]

[1] 李恒. 重楼属植物[M].北京：科学出版社， 1998：36.

[2] 中国药典. 一部[S]. 2010.

[3] 王羽. 滇重楼抗肿瘤活性成分的研究[D]. 天津：天津大学， 2008.

[4] 颜璐璐， 张艳军， 高文远，等. 滇重楼皂苷成分体内外抗肺癌活性研究[J]， 中草药， 2009， 40（3）：424.

[5] 苏成业， 魏淑香. 滇重楼总皂苷及其多糖抗肿瘤作用的研究[J]. 大连医学院学报， 1983， 5（2）：1.

[6] 陈翠， 袁理春， 杨丽英，等. 不同海拔、土壤类型及肥力对云南重楼产量和质量的影响研究[J]. 西南农业学报， 2009， 22（5）：1388.

[7] 周浓， 夏从龙， 邹亮. 影响滇重楼产量和品质诸因素的研究进展[J]. 亚太传统医药， 2009， 5（9）：167.

[8] 周浓， 段宝忠， 夏从龙，等. 滇重楼不同生长发育期化学成分的变化规律[J]. 中国实验方剂学杂志， 2011， 17（5）：703.

Comparison between content of saponins of Paris polyphylla var.

yunnanensis in different areas of Yunnan province

LI Hai-tao， LUO Xian-wen， GUAN Yan-hong， ZHANG Li-xia， GAO Wei-wei

（1.Key Laboratory of Dai and Southern Medicine of Xishuangbanna Dai Autonomous Prefecture，

Institute of Medicinal Plant Development Yunnan Branch， Jinghong 666100， China；

2 Yuxi Normal University， Yuxi 653100， China；

3.Institute of Medicinal Plant Development， Beijing 100193， China）

[Abstract] Six kinds of saponins （Ⅰ， Ⅱ， Ⅶ， PA， H ） content of 22 samples of Paris polyphylla var. yunnanensis collected from different regions of Yunnan province were determined by HPLC， data was analyzed by SPSS 17. The results showed that the effect of altitude on saponin content was not significant， and the effect of growth area of saponins in P. polyphylla var. yunnanensis was significant， saponin content in sample from west Yunnan was significantly higher than that of samples from other regions.

[Key words] Paris polyphylla var. yunnanensis； steroidal saponins； content； region； elevation

doi：10.4268/cjcmm20140509