苯扎氯铵贴薄膜过滤无菌检查方法的建立及验证

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摘要：目的：建立苯扎氯铵贴薄膜过滤无菌检查方法。并验证其准确性和可靠性。方法：按照《中国药典》2010年版二部附录XI H无菌检查法项下薄膜过滤法，取10片苯扎氯铵贴做无菌检查。结果：48h内6种阳性菌生长良好。结论：经验证，该方法准确可靠，在本文检验条件下，苯扎氯铵贴可用薄膜过滤法进行无菌检查。

关键词：苯扎氯铵贴 薄膜过滤法 无菌检查 方法验证

中图分类号：R614 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）02-0019-01

苯扎氯铵贴，是皮肤用药类非处方药品，为家庭常备药物。是由一块吸收垫和一层隔离渗透膜组成的保护性复合垫，吸收垫里含有苯扎氯铵，苯扎氯铵为阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂，对革兰氏阳性菌作用较强。目前，苯扎氯铵贴无菌检查标准与现行《中国药典》2010年版不符。本文按照《中国药典》2010年版二部的规定，对其进行薄膜过滤法无菌检查方法的建立及验证。

1 试验材料与仪器

（1）供试品：苯扎氯铵贴，批号141027M 1231，上海强生有限公司。

（2）培养基：营养肉汤培养基（130312）、改良马丁培养基（1306032）、改良马丁琼脂培养基（130911）、硫乙醇酸盐流体培养基（3102622），均购自北京三药科技开发公司；pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（022116），购自广东环凯微生物科技有限公司；0.9%无菌氯化钠溶液按《中国药典》2010年版附录中有关规定进行配置、分装和灭菌。

（3）验证实验用菌种：大肠埃希菌（Escherichia coli） [CMCC（B）44102]、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）[CMCC（B）260003]、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）[CMCC（B）63 501]、生孢梭菌（Clostridium sporogenes） [CMCC（B）64 941]、白色念珠菌（canidia Albicans） [CMCC（F）98001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98 003]，均购自中国食品药品检定研究院。

（4）仪器：生物安全柜，无菌检测隔离器，高压蒸汽灭菌器，电热恒温培养箱，电子天平，集菌培养器。

2 方法

2.1 菌液的制备

取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、大肠埃希菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，26℃培养24小时。上述培养物用0.9%的无菌氯化钠溶液制成小于100cfu/ml的菌悬液，备用；另将黑曲霉孢子悬液用0.9%无菌氯化钠溶液制成小于100cfu/ml，备用。

2.2 方法验证实验组

取苯扎氯铵贴10贴，加至装有200ml无菌pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液的三角瓶中，用力振摇30min，取浸提液按薄膜过滤法过滤至集菌培养器中，每个滤筒用600ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分三次冲洗滤膜，在最后一次的冲洗液中，分别加入小于100cfu/ml的相应菌液，过滤，然后加相应培养基100ml，置适宜培养条件下（硫乙醇酸盐流体培养基为34℃，改良马丁培养基为26℃）培养，并逐日观察其结果。

2.3 方法验证阳性对照组

不加供试品，直接用pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液，冲洗程序和冲洗量、加入阳性菌、加入培养基均与“2.2方法验证实验组”项下方法相同。与实验组在相同条件下培养，并逐日观察其结果。

2.4 供试品的无菌检查

取苯扎氯铵贴10贴，加至装有200ml无菌pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液的三角瓶中，用力振摇30min，取浸提液至集菌培养器中，过滤，然后用600ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液分三次冲洗滤膜。冲洗后每个滤筒中加入相应培养基100ml，阳性组加入金黄色葡萄球菌作为对照，在相应培养条件下培养，逐日观察其结果。

2.5 阴性对照组

取冲洗液按薄膜过滤法过滤，冲洗后每个滤筒中加入相应培养基100ml，在相应培养条件下培养，逐日观察其结果。

3 结果与分析

3.1 无菌检查方法的验证

按照文中验证的冲洗量和冲洗方法操作，其结果显示阳性对照组和实验组培养基均在48h内变浑浊，且2组之间在培养时间方面无显著差异，表明苯扎氯铵贴在该条件下无抑菌活性或抑菌活性可以忽略不计。无菌检查方法验证情况，见表1。

3.2 供试品的无菌检查

按“3.1无菌检查方法的验证”项下的验证方法，用薄膜过滤法对样品做无菌检查发现：阳性对照组培养基在24h内变浑浊，培养14d后，阴性对照组和供试品组均无菌生长，培养基澄清。供试品无菌检查经培养14d后的情况，见表2。

4 讨论

苯扎氯铵贴无菌检查标准为《国家药品标准》新药转正标准第30册，其对于无菌检查取样量为7片，与现行《中国药典》2010年版标准不同，本文取样量为10贴，经验证在本文检验条件下苯扎氯铵贴可用薄膜过滤法进行无菌检查。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].中国医药科技出版社，2010，附录XIH：103-107.

[2]国家药典委员会.国家药品标准新药转正标准第30册.2003.7： 103-104.

[3]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M].中国医药科技出版社，2010：337-351.