正交法优选板蓝根总有机酸的提取工艺条件

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[摘要]目的：优选并确立板蓝根中总有机酸的最佳提取工艺。方法：以总有机酸的溶出率为指标，采用正交设计试验法对提取过程中的板蓝根提取溶剂浓度、溶剂用量、提取次数、提取时间等4个因素进行优选研究，应用直接电位法测定提取物中总有机酸的含量。结果：最佳提取条件为乙醇浓度70%，用量为药材7倍量，提取3次，每次1.5 h，在此条件下总有机酸提取率为5.32%。结论：采用此种提取方法不仅能够充分提取板蓝根中总有机酸成分，而且经济可靠，对板蓝根制剂的提取工艺改进有重要意义。

[关键词]板蓝根；提取工艺；总有机酸；正交试验

[中图分类号]R284.2 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）10（a）-093-02

The optimization of extraction process on total organic acids from Radix Isatidis

LEI Li-ming1，JIANG Yun-kai1，LI Li-rong2

(1.Department of pharmacy, Hunan Environment-Biological Polytechnic, Hengyang421001,China;2.Hunan Institute for Drug Control, Changsha410001,China)

[Abstract]Objective: To establish the optimal extraction process for the extraction of total organic acids from Radix Isatidis. Methods: The orthogonal test method was used to arrange experiments to test the effect of four main factors including density and volume of the solvent, frequency and time of extraction. The total organic acids were determined by direct potentiometric titration. Results: The optimal extraction process was refluxed three times with 7 times of 70% EtOH, 1.5 h for each time. The extraction rate was 5.32%. Conclusion: The optimal process is rational and economical, with high yield of total organic acids from Radix Isatidis, and instrumental to improve the extraction process．

[Key words]Radix Isatidis;Method extraction;Total organic acids;Orthogonal test method

板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根，能清热解毒，凉血利咽；用于温病发斑、喉痹、丹毒、痈肿；可防治流行性乙型肝炎、急慢性肝炎、流行性腮腺炎、骨髓炎等。板蓝根含有多糖、有机酸等多种化学成分[1]，现代研究表明，有机酸是板蓝根中抗内毒素的有效成分[2]，因此，有机酸类应成为板蓝根的有效成分应予重视。目前，有关板蓝根提取方法的研究多集中在水溶性成分多糖及脂溶性成分靛玉红方面[3]，但以总有机酸为指标进行研究尚未见报道，本研究以总有机酸的提取量为考察指标，采用正交设计试验方法筛选板蓝根中有效成分总有机酸的最佳提取工艺。

1 仪器与试药

PHS-25型酸度计（上海第二分析仪器厂），231型玻璃电极，232型甘汞电极，CJJ-2型电磁搅拌器，25 ml碱式滴定管；水杨酸对照品（中国药品生物制品检定所批号，100106-200303），板蓝根药材（购自衡阳市药材公司）；无水乙醇（分析纯，湖南师大试剂厂），氢氧化钠，酚酞指示剂，蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 板蓝根总有机酸提取的正交试验设计

为优化提取板蓝根的工艺条件，取20 g板蓝根饮片，采用正交试验法，考察板蓝根提取溶剂浓度、溶剂用量、提取次数、提取时间4个因素（表1）。以总有机酸含量为参考指标，选用L9(34)正交设计试验表安排试验（表2）。

2.2 提取样品的制备

精密称取板蓝根饮片20 g，共9份，置1 000 ml圆底烧瓶中，加适量乙醇置水浴上回流提取，滤过，滤液浓缩至相对密度1.05（60℃），浓盐酸调pH至2~3，用乙酸乙酯萃取3次，减压回收乙酸乙酯，浓缩到稠膏，加适量乙醇溶解，滤过，得总有机酸提取样品[4]。

2.3 样品中总有机酸含量的测定

总有机酸以水杨酸计，按文献[5]采用直接电位滴定法测定其总有机酸的含量。取供试液20 ml于三角瓶中，在供试液中加入酚酞指示剂2滴，用标定好的氢氧化钠滴定液（0.091 2 mol/L）滴定，滴定至电位产生突跃同时溶液显粉红色时为终点，每1 ml氢氧化钠滴定液相当于12.595 mg水杨酸。见表2。

结果显示，在正交试验的4个因素中对提取率的影响程度为：A＞C＞D＞B，板蓝根饮片中总有机酸提取的最佳工艺组合为A2B2C3D3，即工艺参数为：乙醇浓度70%，用量为药材7倍量，提取3次，每次1.5 h。试验结果经方差分析（表3），各因素对提取的影响无显著性差异。采用此最优工艺条件对板蓝根中总有机酸进行3次提取试验，总有机酸提取率平均为5.32%。

2.4 加样回收试验

在供试液中分别精密加入水杨酸对照品溶液（0.13 mg/ml）5 ml，按2.3步骤进行滴定操作3次，平均回收率97.3%，RSD=1.87%。

3 讨论

板蓝根含有多糖、有机酸等多种化学成分，有关板蓝根提取方法的研究多集中在水溶性成分多糖及脂溶性成分靛玉红方面，近期有研究表明，板蓝根中抗内毒素的有效成分为有机酸而非水溶性成分多糖或脂溶性成分靛玉红，因此，有机酸类应成为板蓝根的有效成分应予重视。目前，中国药典收载的提取工艺及传统的提取工艺均为水提取，我们曾通过对水提取液与50%乙醇提取液作对比试验，证实醇提取液总有机酸的提取量要更高，因此本实验以不同浓度的乙醇为溶剂，对总有机酸的提取量进行考察，采用L9(34)正交设计试验方法进行实验，结果是乙醇浓度70%，用量为药材7倍量，提取3次，每次1.5 h为板蓝根中总有机酸的最佳提取工艺。同时证实了水并不是提取有机酸成分的最佳溶剂，而应选用70%的乙醇为好，这为板蓝根提取工艺改革提供一定的参考。本研究仅从总有机酸提取量方面对提取工艺进行了初步探讨，提取物的活性是否比水提取液更强，有待更进一步研究。

[参考文献]

[1]肖珊珊,金郁,孙毓庆.板蓝根化学成分、药理及质量控制研究进展[J].沈阳药科大学学报,2003,20(6):455-459.

[2]刘云海,秦国伟,方建国,等.板蓝根抗内毒素活性化学成分的筛选[J].医药导报,2002,21(2):74-76.

[3]王璐璐,郑稳生.板蓝根中有效成分提取方法的研究[J].中成药,2005,27(12):1387-1390.

[4]马莉,唐健元,李祖伦,等.板蓝根提取物中总有机酸和水杨酸含量测定方法研究[J].中国中药杂志，2006,31(10):804-806.

[5]金薇,尤献民,张曦弘.电位滴定法测定复方板蓝根冲剂中总有机酸的含量研究[J].中医药学刊,2004,22(3):574.

（收稿日期：2007-07-30）

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