实验室培养果蝇的方法和注意事项
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摘要 本文介绍了遗传学实验培养果蝇的方法以及果蝇长期培养过程中容易出现的问题并给出相应的处理方法。
中图分类号Q969.44 文献标识码A 文章编号 1674-6708(2010)22-0153-02
果蝇属于昆虫纲,双翅目,与家蝇是不同的种。它的生活史包括卵幼虫蛹成虫。果蝇具有生活史短、繁殖率高、饲养简便等特点,是研究遗传学的好材料,尤其在基因分离、连锁、交换等方面,对果蝇的研究更是广泛而充分[1]。因此,做好果蝇培养对遗传学实验有着重要的作用。
1 果蝇的培养
1.1 培养基的配方
培养基是饲养果蝇的基础,不同材料的配制方法不尽相同。结合几年的培养经验,目前西安文理学院生命科学系采用的效果较好的配方为:玉米粉100g,糖130g,琼脂10g,酵母片20g,苯甲酸0.75g,丙酸1.25 ml,加蒸馏水1 200ml。
1.2 配制方法
1)取一定量的水将玉米粉拌匀,加热至糊状。期间要不断搅拌,防止糊底;
2)将糖和琼脂加入水中煮沸溶解;
3)将酵母片在研钵中加水研磨至糊状。
将1)、2)二者混合后降温至50℃左右时加入3)苯甲酸和丙酸,搅拌均匀后即可分装到培养瓶中。
1.3 培养基的分装
将干净的培养瓶在121℃下灭菌20min,倒入约2.5cm厚的未完全冷却的培养基。待培养基冷却凝固后即可将果蝇转入培养。
1.4 果蝇处理
因为果蝇对乙醚很敏感,易麻醉,可以对作种的果蝇轻度麻醉。(果蝇翅膀外展45℃角表示已死亡)。选用广口瓶作为麻醉瓶,瓶塞内部塞上适量的脱脂棉,滴加数滴乙醚。培养瓶口与麻醉瓶口对接轻拍上方的培养瓶将果蝇落到麻醉瓶里。然后迅速盖好两个瓶塞,半分钟左右,果蝇被麻醉,活动缓慢,注意麻醉不得过度,如果果蝇两翅展开且肢体僵硬,说明已致死。因此,必须抓紧时间移人新培养瓶中,可将培养瓶横卧, 用干净毛笔把果蝇挑人,待果蝇清醒后,再竖立加塞,防止果蝇粘在培养基上[2]。
1.5 原种培养
留种培养时,事先检查一下果蝇有没有混杂,以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶5~10对[1]。原种一般可在18℃下培养。原种大约4周左右换一次培养基,要多注意观察,具体根据培养温度的不同,视培养基的消耗程度而定。每一原种培养至少保留两套,并注明名称和日期,培养时避免日光直射。
2 注意事项
果蝇培养过程中有几个关键性的环节,如若掌握不好,将不能使果蝇正常生长,甚至导致部分或全部死亡。因此,应特别注意[3]。
2.1 玉米粉的溶解
玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热,不能直接倒入加热的培养基中,否则容易聚集成团,不易溶解。配制的培养基容易出现块状,不易于果蝇的利用。
2.2 添加酵母的时间
酵母为活性物质,高温易失活。因此应当在培养基冷却到50℃左右时加入到培养基中,切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。
2.3 培养温度
果蝇的培养温度要以具体使用情况而定,在遗传学教学实验中,由于实验时间相对较短,要求果蝇的繁殖速度相对就较快,因此可以在23~25℃的条件下培养,而保种则应在18℃左右下培养,以免培养基消耗过快,减少转接次数。
3 常见问题处理
3.1 培养瓶内发霉
因为酵母菌与霉菌的生活环境相似,且由于培养过程几乎都在培养箱中进行,通风不良,时间久了容易滋生霉菌。因此,要使用的培养瓶要严格灭菌,当室温与培养温度相似时可以在实验室中培养,加强通风。对已经发霉的培养基,在具有备用种时可以将其淘汰,若仅此一瓶,就要杀死果蝇身上携带的霉菌。方法是将带有霉菌孢子的成蝇倒入空培养瓶中,棉塞上倒适量的75%酒精,再将瓶口塞紧,利用酒精具有挥发性,挥发后的酒精充满整个瓶内,从而将果蝇身上的霉孢子杀死。在操作上应注意两点:一是倒在棉塞上的酒精量要合适,过多果蝇易醉昏,过少杀死不了霉菌孢子;二是果蝇呆在空瓶内的时间要恰当,以2d为好[4]。转入新培养基的第二天再次把果蝇转到另一新培养基中,反复5~6次。
3.2 培养瓶内壁凝结水珠
培养基分装到培养瓶时热蒸汽会凝结在瓶壁,如果过早使用,果蝇会溺死。因此,在分装后要自然冷却一段时间,待瓶壁的水珠蒸发后使用。如若放置在冰箱内保存,使用前若发现瓶壁沾有水珠,则需用灭过菌的滤纸条吸干后使用。
3.3 培养基干结成块
一般配制的培养基放置时间过久或培养温度较高时,培养基因为失水而与瓶壁分离,干结成块,此种情况下果蝇无法正常生存,更无法产卵。因此,要及时更换培养基。
3.4 培养基过湿
果蝇代谢过程中会产生一定的废物,时间长了容易使培养基变成稀糊状,果蝇容易粘附在培养基表面,由于无法飞行和觅食而死亡。因此,要及时根据培养基的情况转接果蝇。
3.5 果蝇生活力降低
由于果蝇长期在偏低的温度下保种,低温使其生活力下降,许多性状出现退化,甚至变异,影响实验结果。因此,每隔一定时期必须进行复壮。复壮方法为用乙醚把果蝇麻昏,选择个体较大的、性状具有本品种特点的雌雄果蝇进行混合培养。再在产出的一代中又选择个体较大的、性状具有本品种特点的雌雄果蝇进行混合培养。如此进行一次,后代就能保持个体较大,又遗传了本品系性状的原种[5]。
参考文献
[1]刘祖洞,江绍慧.遗传学实验[M].北京:高等教育出版 社,1987:63.
[2]陈晓芸.果蝇的饲养[J].生物学通报,2006(2):51.
[3]王转斌.果蝇的保种技巧及唾液腺染色体的制备[J].实验 技术与管理,2002(3):38.
[4]龚慧明.果蝇培养基长霉的处理措施[J].生物学教学, 2007(4):52.
[5]龚慧明.果蝇饲养管理的几个问题[J].生物学通报, 2005(4):5.