橡皮树组织培养研究
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇橡皮树组织培养研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘要：以橡皮树“黑金刚”茎尖为试材，研究了不同激素水平对橡皮树愈伤组织诱导、丛生芽诱导、增殖和生根的影响，并对橡皮树试管苗的温室移栽技术进行了总结。
关键词：橡皮树；组织培养；试管苗；移栽技术
1材料与方法
1.1材料
材料采自乌鲁木齐市燕儿窝风景管理站温室，挑选健壮、无病害的橡皮树母株，取其嫩枝顶芽和茎段为材料。
1.2试验方法
表面消毒：从橡皮树植株上剪取茎段，剪掉叶片，先用自来水冲洗10min，再用洗洁剂溶液洗涤1～2次。在无菌条件下，用75%的酒精浸泡50s，再用0.95%的次升汞溶液消毒18min，剪去材料的创伤面，留取0.5～1.00n长接种于培养基上。
1.3培养基
以MS为基本培养基，附加3%蔗糖及0.6%琼脂，灭菌前pH值调至5.8，按不同的培养目标添加相应的激素，配制成诱导分化、继代增殖、生根成苗培养基，常规方法灭菌。
1.4培养条件
培养温度为（25±3）℃，光照度为2000～2500Lx，每天光照12h。观察记录愈伤组织或芽的诱导增殖情况。将丛生芽分株转入生根培养基中，培养环境同诱导愈伤组织条件相同，观察生根情况。生根后移栽在泥炭：珍珠岩=3：2的混合基质中。
2培养基的配制
2.1启动培养基
①MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.1mg/L（单位下同）。
②MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L。
③MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
2.2增殖培养基
①MS+6-BA1.5+NAA0.1mg/L。
②MS+6-BA1.5+NAA0.05mg/L。
③MS+6-BA1.0+NAA0.1mg/L
④MS+6-BA1.0+NAA0.05mg/L。
2.3生根培养基
①1/2MS+IBA0.3mg/L。
②1/2MS+IBA0.6mg/L。
③1/2MS+IBA0.9 mg/L。
④1/2MS+IBA1.2 mg/L。
3结果与分析
3.1光照温度控制
经试验橡皮树组织培养对温度、光照条件的要求不太严，一般在自然散射光照射下，幼苗在玻璃瓶内生长很好，最适宜的温度范围在18～28℃。
3.2芽的启动及增殖培养
将橡皮树的外植体接种于启动培养基中，20天后观察芽丛分化情况。试验结果表明，激素浓度的不同，对橡皮树启动培养基有明显的影响。在NAA浓度为一定值的情况下，6-BA设置0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L各3种浓度，处理③的诱导率最高，为95%；处理①的诱导率最低，为80.33%。通过对平均芽数的统计分析可知，处理③与①间有显著差异，激素浓度的增高有利于芽的生长速度和健壮程度。由此可见，诱导橡皮树不定芽的启动培养基③MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L是最佳培养基组合，培养效果见表1。
25天后，切去长约0.5cm、饱满、带有腋芽的茎段，接种到4种培养基上，18d液芽开始萌动，同时在茎段的基部四周出现黄白色较致密的愈伤组织，茎段上端切口处（没与培养基接触）也出现少量黄白色愈伤组织。接种38d观察，茎段基部及上端切口处愈伤组织增多，液芽变长变绿。接种48d观察，液芽处有一对新叶出现，同时在基部增大的较致密的愈伤组织上可看到绿色芽点。这时将外植体取出，将液芽及时转到增殖培养基。接种后第28天观察芽丛分化情况。试验结果表明：6-BA浓度在1.0～1.5 mg/L和NNA浓度在0.05～0.1 mg/L范围内，不定芽都能增殖，而在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L的培养基上效果最好，增殖系数可达4.9，增殖培养结果见表2。
3.3不同浓度激素对橡皮树组培苗生根的影响
从橡皮树组培苗上截取长约2cm、粗壮而又生长良好的茎段，接种到4种培养基上，10～15d，接种茎段的基部、节间上开始出现不定根。随着时间的推移，根不断加粗增多，长成完整的再生植株，18d后观察生根情况。生根结果见表3。
试验结果表明：在4种生根培养基中均能长出根，即对培养基的要求不严格。但在1/2MS+IBA0.5mg/L中，组培苗的长势、生长量、生根的质量为最佳，可长出2.5～4.0cm长的粗壮根，生根率也达到最高。
3.4橡皮树组培苗的生根
将继代培养基上的无根幼苗，在无菌条件下，转移到生根培养基上培养，约7～10天即成幼植株。一般在根长0.1～0.5cm时，将幼苗移到瓶外，把沾带的培养液冲洗干净，然后移栽到经高温消毒的河沙与珍珠岩混合的基质上培养。
3.5生根组培苗的移栽
组培苗生根后先打开瓶口晾2～3天，洗净琼脂，防止滋生微生物。然后将生根组培苗移栽到含有基质、配比为泥炭土：珍珠岩=3：2的苗床中。组培苗出瓶2个星期后，叶子明显变绿，新根产生，成活率在97.7%（见表4）
4移栽
4.1移栽技术
移植盆外是组织培养的最后一道工序，由瓶内移出瓶外，幼苗所处的环境有很大的变化：由异常到自养；由弱光到光到强光；由无菌到有菌。因此，在移栽时要十分小心，以提高移栽成活率。
培育壮苗。在生根前1次的继代培养过程中，应在配制培养基时适当降低6-BA的浓度，同时掌握继代时间，在幼苗最壮时转移到生根培养基上生根。加强锻炼。打开瓶口的覆盖物，使之逐步适应由无菌到有菌，从高温到低温的变化。过渡培养。如果将生根培养基上的幼苗直接移栽到土壤中，成活率很低，经过在基质上过渡培养后，移栽成活率则提高。通风防病。橡皮树苗期生长缓慢，移栽到营养袋后，要加强管理，特别是在温室中注意通风以防病虫害的发生。
4.2炼苗及移栽
当苗基部诱导出4～5条不定根且根长2cm左右时，培养瓶移至室温条件下，适应3d后，将培养瓶的薄膜盖掀开。在常温和撒射光下炼苗3～4d，再从培养瓶中取出培养苗，并洗净根上附着的培养基，移栽于消毒过的基质（1份珍珠岩+1份泥炭）中。塑料大棚上覆盖遮阳网，使苗处于半阴环境。刚移入大棚前2d每天喷雾3～4次，保持较高的环境温度（≥85%），大棚温度控制在20～25℃。在大棚中炼苗100d后苗长至20cm高时即可上盆移栽。
5结语
通过橡皮树培养基不同浓度激素的组织培养试验，筛选出适合橡皮树的培养基。结果表明：橡皮树丛生芽诱导的最适培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；丛生芽增殖的最适培养基为MS+6-BA1.0+NAA0.1 mg/L，增殖倍数可达4.9倍；生根培养的最适培养基为1/2MS+IBA0.9 mg/L。