复方三白草胶囊的质量研究

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[中图分类号]R284.2

[文献标识码]B

[文章编号]1005-0019(2009)7-0192-02

[摘要]目的:建立复方三白草胶囊的质量标准。方法:采用HPLC法对制剂主要成分三白草中斛皮素进行定量分析。对处方中其他成分虎杖、茵陈进行薄层色谱检测。结果:槲皮素在9.9-79.2μg/ml范围内呈线性。平均回收率均为101.1%,RSD为0.64%(n=5)。薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:本方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重现性好,可有效控制制剂质量。

[关键词]复方三白草胶囊;三白草;TLC;HPLC;质量标准

复方三白草胶囊为我公司研制的治疗肝炎的中药6类新药,由三白草、虎杖、茵陈等药材组成,具有清热解毒,利湿退黄的作用。药效学研究表明:(1)复方三白草胶囊三个不同剂量组对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)均有不同程度的抑制作用,有一定的量效关系;(2)复方三白草胶囊可以降低CCl4肝损伤小鼠血清SGPT值并减轻肝细胞损伤。

方中主药三白草为三白草科植物三白草Saururuschinensis(Lour.)Baill.的全草,性寒,味甘、辛。功能主治为清热利尿,解毒消肿,可用于尿路感染、肾炎水肿、肝炎等症。三白草主要含挥发油和黄酮成分。黄酮有槲皮素(quercetin)、槲皮甙(quercitrin)、异槲皮甙(Iso-quercitrin)、金丝桃甙(hyperoside)、芦丁(Rutin)、芸香甙等。现代药理研究表明三白草具有抗炎,保肝,抗氧化,降血糖,抗肿瘤的作用[1]。

为了有效的控制该药品的质量,本文采用薄层色谱法鉴别了虎杖、茵陈,HPLC法测定了主药三白草中斛皮素的含量。结果表明方法简便、特征性强、重现性好,可作为该药质量控制的依据。

1仪器和材料

1.1仪器:美国Waters系列高效液相色谱仪,KromasilODS柱(5μm,4.6×250mm),KromasilODS保护柱(5μm,4.6×10mm)。

1.2试药:槲皮素对照品购于中国药品生物制品检定所,甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,三白草、虎杖、茵陈采购于江苏省药材公司,复方三白草胶囊为我公司自制。

2方法和结果

2.1定性鉴别:虎杖[2]取本品(复方三白草胶囊)粉末01g,加甲醇10ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加25mol/L硫酸溶液5ml,加热水解30分钟,放冷,用氯仿提取2次,每次5ml,合并氯仿液,蒸干,残渣加氯仿1ml使溶解,作为供试品溶液。取缺味(茵陈)的本品同法制得阴性样品液。另取大黄素和大黄素甲醚对照品,分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取供试品溶液4μl、阴性样品液4μl、对照品溶液各1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点;置氨蒸气中熏后,日光下检视,斑点变为红色。而阴性样品液无此斑点。

茵陈[3]取本品2.0g研细,加50ml乙醚,加热回溜4h,过滤,浓缩至5ml,作为样品供试品液。取缺味(茵陈)的本品同法制得阴性样品液。另取对照药材茵陈粉末5.0g,同法制得对照药材液。吸取样品供试品液、阴性样品液和对照药材液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开、取出、晾干,置紫外灯365nm下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光主斑点,而阴性样品液无干扰。

2.2含量测定

2.2.1色谱条件[4,5]KromasilODS柱(5μm,4.6×250mm),KromasilODS保护柱(5μm,4.6×10mm),以甲醇-0.6%磷酸溶液(52∶48)为流动相,检测波长为360nm,柱温为25℃。进样量10μl,流速为1.0ml/min。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

2.2.2标准曲线制备:分别精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品适量,加甲醇制成每1ml含对照品为0495mg的溶液,作为对照品储备溶液。

分别吸取对照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.2,1.6ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。分别进样10μl,测定峰面积,以峰面积(A)为纵坐标、浓度(C,μg/ml)为横坐标,进行线性回归,得到槲皮素的回归方程和线性关系。

槲皮素A=561280C-12206.1(r=0.9996),线性范围为9.9-79.2μg/ml

2.2.3供试品溶液的制备:精密称取本品10mg,加甲醇-25%盐酸(4∶1)的混合溶液25ml,水浴加热回流30分钟,迅速冷却至室温,转移至50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.2.4精密度试验:取20080103批号样品,按供试品溶液的制备项下方法操作,重复5次进样,测定峰面积,结果槲皮素的RSD为0.42%。

2.2.5重复性试验:取20080103批号样品,共5份,精密称定,按供试品溶液的制备项下方法操作,测定峰面积,计算含量,结果槲皮素的RSD为1.24%。

2.2.6稳定性试验:取20080103批号样品,按供试品溶液制备及上述色谱条件,每隔2h进样1次,连续测定5次,记录峰面积,结果表明,供试品溶液在8h内稳定。

2.2.7加样回收率试验:取20080103批号样品5mg,共5份,分别加入槲皮素对照品溶液一定量,按含量测定方法操作,计算回收率。结果槲皮素的平均回收率分别是101.1%,RSD为0.64%,结果见表1。

2.2.8含量测定:

精密称取不同批号复方三白草胶囊样品各10mg,加甲醇-25%盐酸(4∶1)的混合溶液25ml,水浴加热回流30分钟,迅速冷却至室温,转移至50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,测定,即得。结果见表2。

3讨论

现代研究表明三白草有明显的抗炎、保肝和抗氧化作用。利用三白草的有效部位进行新药开发的研究也开展的很多。本方来源于临床医生,疗效可靠。本品以三白草为主药,配伍虎杖、茵陈等清热解毒,利湿退黄的中药,具有很好的抗乙型病毒性肝炎的效果。

由于中药材种植产地及其种植条件的差异,药材原料中指标成分含量有较大差异,导致了最终产品的指标成分(本品中为斛皮素)含量有较大波动,不利于质量的控制。因此,对于中药材进行GAP种植,以及规定产地采购和原料的质量控制对于保证最终产品的疗效尤其重要。