血管内皮生长因子在胃溃疡愈合中的内源性变化的研究

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[摘要]目的：探讨胃溃疡愈合过程中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF)）的变化及其作用。方法：采用免疫组织化学法，对正常胃黏膜（20例）、胃溃疡活动期（24例）、愈合期（26例）和瘢痕期（20例）组织的VEGF 的表达进行定位和定量观察。结果：VEGF在正常胃黏膜呈弱阳性表达，在胃溃疡急性期呈阳性表达，在愈合期呈强阳性表达，在瘢痕期呈弱阳性或阳表达。各期溃疡组织VEGF表达与正常胃黏膜相比有显著性差异（P

[关键词]血管内皮生长因子；胃溃疡；愈合

[中图分类号]R365 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）06（c）-130-02

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），又称血管通透性因子（vascular permeability factor， VPF）或促血管素，是Ferrara等首次于1989年从牛垂体滤泡星状细胞的体外培养液中分离并纯化出来的一种特异作用于血管内皮细胞，并能促进其有丝分裂的糖蛋白。VEGF能特异地作用于血管内皮细胞，促进血管生成，维持血管正常状态和完整性，提高血管通透性。因此VEGF在组织修复，血管再生方面引起广大研究者的极大关注。

胃溃疡愈合过程不仅需要黏膜缺失的填充，更需要黏膜下组织的重建，所以肉芽组织的生长和血管形成在溃疡愈合中起着重要作用。许多生长因子参与了这一过程，VEGF可能为其中较重要的一种。目前，有关人胃溃疡愈合过程中内源性VEGF变化的研究，国内尚少见报道。

1 材料和方法

1.1 标本来源

全部标本均来源于2005年9月~2006年5月湖北省恩施州中心医院对胃溃疡患者进行的胃镜取材。

1.2 选择标准

所有胃溃疡患者均经临床检查排除其它疾病。胃溃疡分期采用本学者畸田隆夫倡导的分期法，将胃溃疡分为活动期（active stage GA期）、愈合期（healing stage GH期）和瘢痕期（scarring stage GS期）。其中活动期（GA组）24例，愈合期（GH组）26例，瘢痕期（GS组）20例。各组研究对象在年龄、身高、体重等方面均无显著性差异（P>0.05）。

1.3 方法

1.3.1 标本的采集与处理标本均取自胃溃疡组织边缘，每例取三块，二块用于免疫组织化学染色检测VGEF，一块用于HE染色行病理组织学检查，排除了溃疡恶变。另取20例完整正常胃窦黏膜组织作对照。标本经10%中尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋和制备4 μm连续切片（切片先用多聚赖氨酸处理）。切片保存待测。

1.4 试剂和方法

1.4.1 试剂血管内皮生长因子（VEGF）成套免疫组织化学试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.4.2 方法采用免疫组织化学链酶亲和素－过氧化酶标记方法（SABC法）检测各期胃溃疡组织和正常胃黏膜的VEGF的表达。

1.4.3 结果判断以包膜或胞浆着棕黄色为阳性。在400倍光镜下观察，每个视野观察100个细胞，按染色强度或阳性细胞数确定表达强度。不染色，表达强度即为阴性。染色弱，每个视野阳性细胞数少于10个为弱阳性。中度染色，每个视野阳性细胞数10～30个为阳性。强染色，每个视野阳性细胞数>30个为强阳性。

1.4.4 免疫组织化学定量研究应用HPIAS-1000型全自动医学图像彩色分析系统，分别测定正常胃黏膜（GN组）、胃溃疡活动期（GA组）、胃溃疡愈合期（GH组）、胃溃疡瘢痕期（GS组）组织的VEGF平均积分光密度和面密度值，每张切片随机选取5个视野，然后取其均值。

1.5 数据分析与统计学处理

采用SAS统计软件模块处理，各组数据均用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，P

2 结果

2.1 胃溃疡病理组织学观察

胃溃疡活动期主要表现为黏膜变性、坏死，大量中性粒细胞为主的炎性细胞浸润；胃溃疡愈合期：各种炎性细胞减少，可见再生的腺体组织、毛细血管、纤维结缔组织；溃疡瘢痕期：肉芽组织逐渐纤维化和胶原形成，腺体重构。

2.2 VEGF在正常胃黏膜、胃溃疡活动期、愈合期和瘢痕期的表达定位及强度

在正常胃黏膜，VEGF表达为弱阳性，在胃溃疡活动期，VEGF呈阳性表达。在胃溃疡愈合期，呈强阳性表达。在胃溃疡瘢痕期，VEGF呈弱阳性或阳性表达。VEGF图像半定量分析结果见表1。

由上表可见胃溃疡各期VEGF平均积分光密度值和面密度值与正常胃黏膜组有显著性差异（P

3 讨论

消化性溃疡是侵犯黏膜全层并深达肌层或更深的坏死性病灶，其愈合是一个极其复杂的过程。国内外大量动物实验证实，溃疡愈合与身体其它部位外伤时组织修复过程相似。上皮的修复和内芽组织生成和新生血管形成在溃疡愈合中起关键作用。先前人们已注意到在人类其它组织溃疡愈合过程中，观察到溃疡边缘血流增加，且先有血流增加，然后才有溃疡愈合。

血管内皮生长因子（VEGF）是由两个分子量为17~22 kD的相同亚基通过二硫键形成的同源二聚体碱性糖蛋白，分子量为34～45 kD。VEGF的受体是含激酶插入区受体（KDR）与fms样酪氨酸激酶-1（K1t-1），这两种受体基本只存在于血管内皮细胞中。虽然VEGF最先从肿瘤细胞中分离出来，但现已证实VGEF不单在肿瘤血管生成，在其它病理和生理性的血管生成中都是必不可少的诱导因子[1]。VEGF在很多正常人和动物组织中表达，但一般表达水平低。一些代谢旺盛、血供丰富丰富的组织的VEGF表达常较高，如胎盘组织、子宫内膜等。由于生长发育和血管生成的需要，VEGF的表达往往呈较高水平。因胃溃疡愈合过程需要微血管形成以输送氧和营养物质，推测VEGF在胃溃疡愈合中亦起重要作用。

我们采用免疫组织化学方法检测VEGF在胃溃疡愈合中的表达情况，结果显示：在正常胃黏膜VEGF表达为弱阳性，在胃溃疡活动期呈阳性表达，在愈合期呈强阳性表达，在胃溃疡瘢痕期呈弱阳性或阳性表达。VEGF平均积分光密度值和面密度值在胃溃疡各期与正常胃黏膜组相比有显著性差异（P

在胃溃疡愈合期，涉及到细胞增殖和血管形成，VEGF是一种血管内皮细胞特异性有丝分裂原，在体内可诱导血管发生[2]。同时可刺激内皮细胞产生NO，并使其浓度呈剂量依赖性升高，从而起到血管维持作用[3]。Morio等应用RT-PCR技术证实胃溃疡病人溃疡组织中VEGF mRNA含量显著高于正常胃黏膜。Masum等[4]曾用Elasia法发现胃溃疡患者VEGF含量在胃溃疡GH期>GA>GS期。Jones等[5]应用VEGF和ang1治疗可加速实验性小鼠胃溃疡愈合。

我们研究发现VEGF在人在胃溃疡活动期、瘢痕期成呈阳性表达，胃溃疡愈合期呈强阳性表达，表达强度又显著高于活动期、瘢痕期，说明VEGF确实参与了胃溃疡的愈合过程。因为VEGF特别对血管内皮生长有效，内皮细胞自然地生长和迁徙在稠密的肉芽组织表面，可完成溃疡愈合过程。同时，由于VEGF可提高血管通透性，因此VEGF可能在胃黏膜保护和胃溃疡愈合中起双重作用，早期即通过增加微血管通透性稀释胃内毒性物质，保护胃黏膜，而后又通过刺激腺体和血管生成促进溃疡愈合[6]。一些药物，如非甾体类抗炎药消炎痛等可能通过影响VEGF等细胞因子的表达而使溃疡愈合延迟[7,8]。在溃疡愈合不良或一些难治性溃疡中是否也存在的VEGF或其受体的减少或缺乏，值得我们进一步研究。开发生长因子类药物治疗消化性溃疡可能成为今后研究的热点。

[参考文献]

[1]Carmeliet P, Ferreira V, Breier G, et al. Abnormal blood vessel developrent and lethality in embryos lacking a single VEGF allele[J]. Nature, 1996, 380(6573):435-439.

[2]Seger DR, Brown LF,Claffty KP, et al. Vascular permeability factor, tumor angiogenesis and stroma generation[J].Invasion Metastasis,1994-1995,14(1-6):385.

[3]Von der Zee R, Murohara T, Lou Z,et al. VEGF/VPF augments NO release from quiescent rabbit and human vascular endothelium[J]. Circulation, 1997, 95(4):1030.

[4]Akimoto M, Hashimoto H, Shigemoto M,et al.Change of nitric oxide and growth factors during grastric ulcer healing[J]. J Cardiovasc pharmacol, 2000, 36 (5 Suppl 1) :S282-S285.

[5]Jones MK, Kawanka H, Bantar D,et al. Gene therapy for gastric ulcers with single local injection of naked DNA encoding VEGF and angiopoietin-1[J]. Gastroenterology, 2001, 121(5): 1040-1047.

[6]Szabo S, Vincze A, Sandor Z,et al.Vascular approach to gastroduodenil ulceration new studies with endothelins and VEGF[J].Dig Dis Sci, 1998, 43 (Suppl 9):S40-S55.

[7]Ma L, Elliott SN, Cirino G, Buret A,et al. Platelets modulate gastric ulcer healing: role of endostatin and vascular endothelial growth factor release[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2001, 98(11): 6470-6475.

[8]Takahashi M,Maeda S,Ogura K,et al.The possible role of vascular endothelial growth factor (VEGF) in gastric ulcer healing: effect of sofalcone on VEGF release in vitro[J]. J Clin Gastroenterol, 1998, 27(3): S178-S182.

（收稿日期：2007-04-17）

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