正交试验优选反枝苋总黄酮的提取工艺

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摘要：为优选反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）中总黄酮的最佳提取工艺，试验以芦丁为标准品计算反枝苋中总黄酮的含量，通过正交试验考察不同因素和水平对提取工艺的影响。结果表明，反枝苋中总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度50%，料液比1∶15，水溶回流法提取3次，每次提取1.5 h。该工艺合理、简单，适用于反枝苋总黄酮的提取，可为该资源的利用提供参考。

关键词：反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）；总黄酮；正交试验；提取工艺

中图分类号：TQ28 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4748-03

反枝苋是苋科一年生植物反枝苋（Amaranthus retroflexus L.）的茎叶。现代医学证实，反枝苋含有丰富的铁、钙、胡萝卜素和维生素C，对青少年的生长发育和成人的身体健康都有帮助。反枝苋中没有草酸，所含的钙质很容易被人体吸收，而丰富的铁可以合成细胞中的血红蛋白，有造血和携带氧气的作用，被誉为“补血菜”。反枝苋中含有多种氨基酸，尤其是含有人体所必需的赖氨酸，而玉米、小麦、大米等谷物中含量则较少，因此常吃嫩反枝苋对人体健康是很有益的。

中医认为，反枝苋性凉，味甘，具有清热明目、通利二便、收敛消肿、解毒止痢、抗炎止血等功效，可治疗尿血、内痔出血、扁桃腺炎、急性肠炎等症。

黄酮类化合物是存在于自然界中的一大类化合物，在食品和医药工业上有着广泛的应用。本研究考察了乙醇浓度、提取时间、提取次数、料液比等因素对反枝苋中总黄酮提取率的影响，并以此4因素为指标设计正交试验，优选反枝苋中总黄酮最佳提取工艺条件，为反枝苋的进一步深入开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材与试剂 试验用反枝苋于2011年10月采自重庆医科大学药物园（经鉴定为苋科反枝苋），粉碎，过筛，低温密封干燥保存；芦丁标准品：批号153184-201006（购自北京世纪奥科生物技术有限公司）；95%乙醇、无水甲醇、丙酮等均为分析纯；蒸馏水为实验室自制。

1.1.2 仪器与设备 UV765CRT型紫外可见分光光度计（上海圣科仪器设备有限公司）；AL204型分析天平（万分之一）[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；HH-6型恒温数显水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；SB-3200DTD型超声波清洗机（上海茸研仪器设备有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 标准曲线的绘制 精密称取芦丁对照品20.0 mg，以95%乙醇溶解，摇匀，定容至100 mL容量瓶中使之浓度为0.2 mg/mL。准确移取芦丁对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 置于25 mL容量瓶中，分别加水至6 mL，然后加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀放置6 min，再加入10%硝酸铝1 mL，摇匀放置6 min，最后加入4%氢氧化钠溶液10 mL，加95%乙醇定容至刻度，摇匀放置15 min。用紫外分光光度计在510 nm处测其吸光度（A），以吸光度（A）为纵坐标、芦丁溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，得到标准曲线方程为：y=1.893x+0.002 5，r=0.999 5。

1.2.2 提取方法对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15（m/V，g/mL，下同），提取时间1.5 h，考察不同的提取方法（水浴回流法、水煮法、超声波法）对反枝苋总黄酮提取率的影响。

1.2.3 提取时间对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15，水浴回流法提取3次，考察不同的提取时间（0.5、1.0、1.5、2.0 h）对反枝苋总黄酮提取率的影响。

1.2.4 提取溶剂对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，分别用50%、70%乙醇、无水甲醇及丙酮水浴回流法提取3次，料液比均为1∶15，提取时间1.5 h，考察不同提取溶剂对反枝苋总黄酮提取率的影响。

1.2.5 提取次数对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，料液比为1∶15，水浴回流法提取1.5 h，考察不同的提取次数（1、2、3、4次）对反枝苋总黄酮提取率的影响。

1.2.6 料液比对反枝苋总黄酮提取率的影响 精密称取反枝苋粉末2.0 g，以50%乙醇为提取溶剂，回流法提取2次，提取时间1.5 h，考察不同的料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20）对反枝苋总黄酮提取率的影响。

1.2.7 正交试验设计 根据反枝苋总黄酮提取率的影响因素[1-5]，设计了4因素3水平的正交试验L9（43）。4个因素分别为提取时间（A）、乙醇浓度（B）、提取次数（C）、料液比（D）。正交试验因素与水平见表1。

2 结果与分析

2.1 单因素试验结果

2.1.1 提取方法对反枝苋总黄酮提取率的影响 3种提取方法下反枝苋总黄酮的提取率见表2。由表2可见，以水浴回流法提取时反枝苋总黄酮的提取率最高，达0.834%，超声波法提取效果次之，水煮法提取效果最差。因此选择水浴回流法为反枝苋总黄酮的提取方法。

2.1.2 提取时间对反枝苋总黄酮提取率的影响 由图1可见，反枝苋总黄酮的提取率随提取时间的增加而增加，但提取时间增加到1.5 h后其提取率变化不大，故选择提取时间为1.5 h。

2.1.3 提取溶剂对反枝苋总黄酮提取率的影响 由图2可见，不同浓度的乙醇溶液作提取溶剂时，反枝苋总黄酮的提取率均较高，所以最后选择乙醇溶液为反枝苋总黄酮的提取溶剂。

2.1.4 提取次数对反枝苋总黄酮提取率的影响 由图3可见，反枝苋总黄酮提取率随提取次数的增加而增加，但从节省溶剂和耗能角度考虑，选择提取3次为宜。

2.1.5 料液比对反枝苋总黄酮提取率的影响 由图4可见，溶剂用量对反枝苋总黄酮提取率有一定影响，增加溶剂用量有利于总黄酮的渗出，但溶剂用量过大，不仅增加溶剂消耗，而且会增加浓缩回收溶剂的耗能。综合分析，选择料液比1∶15为宜。

2.2 正交试验结果

2.3 验证试验

准确称取反枝苋粉末2.0 g，按上述最佳提取条件提取，所得反枝苋总黄酮提取率为1.349%，RSD=1.63%，表明该工艺重现性良好。

3 小结与讨论

1）本试验对芦丁和反枝苋中提取的总黄酮的最大吸收波长进行了比较考察，将反枝苋按照上述最佳条件提取总黄酮后显色，在400～600 nm下扫描，与芦丁标准品的吸收曲线对比，发现最大吸收峰均在510 nm附近，说明本试验选择510 nm为检测波长测定其吸光度并计算总黄酮含量的方法可取。

2）正交试验表明，反枝苋中总黄酮最佳提取工艺为乙醇浓度为50%，料液比为1∶15，提取时间为1.5 h，提取次数为3次。

3）试验过程中发现，在测定反枝苋中总黄酮的时候，当往样品液中加入氢氧化钠溶液时会产生一些红色结晶物，这种物质的存在是否会影响测定结果还有待进一步的研究。

4）反枝苋是一种分布广泛的杂草，如何做到除草和利用的有机结合，本研究从反枝苋总黄酮含量测定及提取工艺研究方面做了有益的探索。

参考文献：

[1] 张彩霞，董相军，胡凤祖.正交试验优选珠芽蓼果实中总黄酮提取工艺[J]. 中国药房，2008，19（3）：186-188.

[2] 曾超珍，吕清卿，赵 燕.枸骨叶总黄酮提取工艺研究[J].江苏农业科学，2009（4）：321-323.

[3] 汪婷婷，吴士筠.正交试验法优选药用的总黄酮提取工艺[J].化工技术与开发，2009，38（9）：23-25，61.

[4] 邱燕燕，牛泱平.狗舌草中总黄酮的提取工艺研究[J].浙江化工，2009，40（10）：5-7.

[5] 王 元，王学军.正交试验法优选沙棘叶总黄酮的提取条件[J].甘肃科技，2009，25（21）：159-160，210.