高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%联合检测对
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[摘要] 目的 探讨高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%联合检测对原发性肝癌的诊断价值。 方法 选取浙江省德清县第三人民医院（以下简称“我院”）2011年1月～2015年6月收治的100例原发性肝癌患者作为原发性肝癌组，选取我院同期收治的100例良性肝脏疾病患者作为内部对照组，选取我院同期健康体检者100名作为外部对照组。甲胎蛋白采用放射免疫法检测，高尔基体蛋白73、甲胎蛋白异质体3%采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测。观察三组研究对象高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%；甲胎蛋白不同水平者高尔基体蛋白73阳性率；高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性情况。 结果 原发性肝癌组高尔基体蛋白73[（175.8±51.4）μg/L]、甲胎蛋白[（2125.1±566.8）μg/L]、甲胎蛋白异质体3%[（15.5±5.8）%]均明显高于内部对照组[（82.5±32.5）μg/L、（83.8±34.4）μg/L、（8.4±3.2）%]和外部对照组[（16.5±13.4）μg/L、（10.2±4.3）μg/L、（6.2±0.9）%]，内部对照组高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%均高于外部对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。原发性肝癌组、内部对照组、外部对照组研究对象在甲胎蛋白≤200 μg/L时的高尔基体蛋白73阳性率（2%、4%、0%）差异无统计学意义（P > 0.05），原发性肝癌组在甲胎蛋白>200～300 μg/L、>300～400 μg/L、>400 μg/L时高尔基体蛋白73阳性率（4%、6%、59%）均明显高于内部对照组（0、0、0）和外部对照组（0、0、0），三项指标联合检测对原发性肝癌诊断的敏感性（96%）、特异性（99%）均高于单一高尔基体蛋白73检测的81%和93%、单一甲胎蛋白检测的63%和91%、单一甲胎蛋白异质体3%检测的78%和85%，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%联合检测对原发性肝癌具有较高的敏感性和特异性，为原发性肝癌的临床诊断和治疗提供了可靠的理论依据。
[关键词] 高尔基体蛋白73；甲胎蛋白；甲胎蛋白异质体3%；原发性肝癌；诊断价值
[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）02（b）-0130-04
Diagnostic value of joint detection of golgin 73， alpha-fetoprotein， alpha-fetoprotein variants for primary hepatocellular carcinoma
ZHU Qinhong
Department of Laboratory， Deqing County Third People's Hospital， Zhejiang Province， Deqing 313201， China
[Abstract] Objective To approach the diagnostic value of joint detection of golgin 73 （GP73）， alpha-fetoprotein （AFP）， alpha-fetoprotein variants （AFP-L3%） for primary hepatocellular carcinoma. Methods One hundred cases of patients with primary hepatocellular carcinoma admitted to Deqing County Third People's Hospital （"our hospital" for short） from January 2011 to June 2015 were selected as primary hepatocellular carcinoma group， 100 cases of patients with benign liver diseases admitted to our hospital at the same period were selected as internal control group， 100 cases of persons for physical examination in our hospital at the same period were selected as external control group. The AFP was detected by radioimmunoassay， GP73， AFP-L3% were detected by enzyme-linked immuno sorbent assay （ELISA）. The GP73， AFP， AFP-L3% of three groups， the GP73 positive rate of different levels of AFP， the sensibility and specificity of GP73， AFP， AFP-L3% for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma were observed. Results The GP73 [（175.8±51.4） μg/L]， AFP [（2125.1±566.8） μg/L]， AFP-L3% [（15.5±5.8）%] of primary hepatocellular carcinoma group were higher than those of internal control group [（82.5±32.5） μg/L， （83.8±34.4） μg/L， （8.4±3.2）%] and external control group [（16.5±13.4） μg/L， （10.2±4.3） μg/L， （6.2±0.9）%]， the GP73， AFP， AFP-L3% of internal control group were higher than those of external control group， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. The GP73 positive rates of primary hepatocellular carcinoma group， internal control group， external control group （4%， 6%， 59%） in the AFP ≤200 μg/L had no statistically significant differences （P > 0.05）. The GP73 positive rates of primary hepatocellular carcinoma group （4%， 6%， 59%） in the AFP >200-300 μg/L， >300-400 μg/L， >400 μg/L were higher than those of internal control group （0， 0， 0） and external control group （0， 0， 0）， the sensibility （96%）， specificity （99%） of joint detection of three indicators for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma were higher than single GP73 detection （81% and 93%）， single AFP detection （63% and 91%）， single AFP-L3% detection （78% and 85%）， the differences were all statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The joint detection of GP73， AFP， AFP-L3% has higher sensibility and specificity for diagnosis of primary hepatocellular carcinoma， which can provide reliable theory basis for clinical diagnosis and treatment of primary hepatocellular carcinoma.
[Key words] Golgin 73； Alpha-fetoprotein； Alpha-fetoprotein variants； Primary hepatocellular carcinoma； Diagnostic value
原发性肝癌属于人体消化系统常见的恶性肿瘤，其中有95%属于肝细胞癌，病死率仅次于胃癌和食道癌，全世界每年有近70万人死于原发性肝癌，其恶性程度高，病情进展迅速，临床治疗难度大，疗效不理想，病死率高，临床上的原发性肝癌，一旦发现大部分属于中晚期[1-2]。因原发性肝癌发生、发展具有很强的隐蔽性，并且很容易发生转移、浸润，临床上对于原发性肝癌预警显得尤为重要[3-4]。本研究通过对原发性肝癌患者的临床资料进行分析，拟探讨甲胎蛋白对原发性肝癌的诊断价值，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取浙江省德清县第三人民医院（以下简称“我院”）2011年1月～2015年6月收治的100例原发性肝癌患者的临床资料进行分析，原发性肝癌患者的临床诊断参照2001年《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》[5]进行确诊，其中男72例，女28例，年龄42～77岁，平均（52.4±12.3）岁，选取我院同期收治的100例良性肝脏疾病患者作为内部对照组，男70例，女30例，年龄43～76岁，平均（53.0±13.6）岁，乙型肝炎肝衰竭80例，病毒性肝炎肝硬化20例，均参照《病毒性肝炎防治方案》[6]中的诊断标准进行确诊。同时选取我院同期健康体检者100名作为外部对照组，男73名，女27名，年龄41～77岁，平均（54.2±12.9）岁。三组研究对象的性别构成比、年龄分布比较差异均无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。
1.2 方法
三组研究对象均抽取空腹静脉血5 mL，室温静置30 min，离心机3000 r/min离心5 min，将血清分离出来。甲胎蛋白采用放射免疫法，具体操作方法均参照试剂盒进行严格操作，试剂盒和质控品均购自于北京九强朗生物制品有限公司。甲胎蛋白参考范围是0～200 μg/L，当甲胎蛋白≥200 μg/L时确定为原发性肝癌临界值。高尔基体蛋白73、甲胎蛋白异质体3%采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测，操作按照试剂盒说明书进行，试剂盒和质控品均购自于北京九强朗生物制品有限公司。高尔基体蛋白73参考范围是0～85.5 μg/L，当高尔基体蛋白73≥85.5 μg/L时确定为阳性，甲胎蛋白异质体3%>10%判定为阳性[7-8]。
1.3 观察指标
1.3.1 观察三组研究对象高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%情况。
1.3.2 观察三组研究对象甲胎蛋白不同水平者高尔基体蛋白73阳性率情况：甲胎蛋白不同水平分组：甲胎蛋白≤200 μg/L、300 μg/L≥甲胎蛋白>200 μg/L、400 μg/L≥甲胎蛋白>300 μg/L、甲胎蛋白>400 μg/L。
1.3.3 观察高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性情况[9-10]：敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性），其实际是按照该筛查实验标准被正确诊断的百分率情况，特异性=真阴性/（真阴性+假阳性），其实际是按照该诊断标准被正确地判断为无病的百分率情况。
1.4 统计学方法
采用统计学软件SPSS 19.0建立数据库，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组计量资料比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，计数资料以百分比表示，采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组研究对象高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%情况比较
原发性肝癌组高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%均明显高于内部对照组和外部对照组，内部对照组高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%均明显高于外部对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表1。
2.2 三组研究对象甲胎蛋白不同水平者高尔基体蛋白73阳性率情况
原发性肝癌组、内部对照组、外部对照组研究对象在甲胎蛋白≤200 μg/L时的高尔基体蛋白73阳性率差异无统计学意义（P > 0.05），原发性肝癌组在甲胎蛋白>200～300 μg/L、>300～400 μg/L、>400 μg/L时高尔基体蛋白73阳性率均明显高于内部对照组、外部对照组，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表2。
2.3 高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%以及联合检测对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性
三项指标联合检测对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性均高于单一高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%检测，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见表3。
表3 高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%
以及联合检测对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性[n（%）]
注：与三项指标联合检测比较，*P < 0.05
3 讨论
原发性肝癌主要可以分为肝细胞癌、肝内胆管细胞癌、肝细胞癌-肝内胆管细胞癌混合型等不同类型。资料显示[11-12]，原发性肝癌患者的甲胎蛋白水平、高尔基体蛋白73和肿瘤大小、数目、TNM分期、合并症、合并乙型肝炎病毒感染等情况关系密切。肝细胞在感染乙型肝炎病毒后很容易诱导甲胎蛋白、高尔基体蛋白73充分表达，从而激活癌形成信号，因而提示乙型肝炎病毒是诱发肝癌形成的重要因素。
本研究选取我院2011年1月～2015年6月收治的100例患者作为原发性肝癌组，选取100例良性肝脏疾病患者作为内部对照组，选取健康体检者100名作为外部对照组。甲胎蛋白采用放射免疫法检测，高尔基体蛋白73、甲胎蛋白异质体3%采用ELISA法检测。观察三组研究对象高尔基体蛋白73、甲胎蛋白水平、甲胎蛋白异质体3%；甲胎蛋白不同水平者高尔基体蛋白73阳性率；高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性情况。其中：①高尔基体蛋白73属于高尔基体的跨膜蛋白，一般整合在高尔基体顺面膜囊上，在血清中通过胆管上皮细胞表达，肝细胞表达较少，甚至不会表达，在肝癌发生时，高尔基体蛋白73可以有利于细胞内体和细胞表面，诱发高表达。有资料显示[13-14]，急性、慢性肝病、肝硬化和肝癌中的高尔基体蛋白73呈现高表达，对于肝病诊断具有很高的敏感度，但是特异性可能受到影响。高尔基体蛋白73表达和维持高尔基体结构完整性有着密切的关系，反映了肝癌细胞在基因组和微环境上的变化，从而适应癌细胞代谢需求。研究资料显示[15-16]，肝细胞中高尔基体蛋白表达增量调节是肝癌血清中高尔基体蛋白升高的主要原因之一。②甲胎蛋白是肝细胞合成的高特异性蛋白质，70%～80%的患者在发病期间有甲胎蛋白基因发生高表达[17]。甲胎蛋白属于一种胚原蛋白，或者糖蛋白，含有两条复合糖链，含糖量大约是4%，主要成分是甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖等，其在胎儿发育的过程中开放表达，在幼儿出生2年之后处于关闭状态，在成人肝细胞恶性转化早期，肝细胞内的甲胎蛋白基因会重新被激活，并且出现高表达，临床上常将甲胎蛋白作为肝癌诊断的重要肿瘤标志物和标准。有资料显示[18]，甲胎蛋白可以激活刺激肝癌细胞磷脂酰肌醇（-3）激酶/蛋白激酶B信号功能，诱导癌基因Ras、Src发生过度表达，从而实现肝癌细胞的过度增殖。甲胎蛋白和肝癌细胞增殖和凋亡有一定的相关性，甲胎蛋白和其受体结合，激活钙离子信号途径，促进癌基因c-fos、c-jun、ras等基因表达，从而刺激肝癌细胞生长[19]，另外甲胎蛋白还具有促进肝癌细胞抗凋亡的生物学功能。③甲胎蛋白异质体3%是单链糖蛋白的一种，不同组织细胞内合成甲胎蛋白，糖链结构不是十分相同，对于植物凝集素结合能力不是十分相同，这种糖链结构不同的甲胎蛋白被称为甲胎蛋白分子异质体。有资料显示[20-23]，甲胎蛋白异质体3%可以由恶性肝癌细胞生成，属于原发性肝癌特异性较高的血清学指标，可以进行良恶性肝病的预警信号，血清中甲胎蛋白异质体3%水平会随着肝细胞癌生长呈现线性升高，对于肝癌的诊断具有比较高的特异性，并且不会受到甲胎蛋白≥400 μg/L的限制。如果患者血清中甲胎蛋白水平只是轻度升高，然而甲胎蛋白异质体3%>10%，提示肝癌的可能性较大[24-25]。
本研究结果显示，原发性肝癌组高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%均明显高于内部对照组、外部对照组，提示高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%在原发性肝癌患者中均有不同程度的高表达，高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%均明显高于良性肝脏疾病和健康体检人员，原发性肝癌组、内部对照组、外部对照组研究对象在甲胎蛋白≤200 μg/L时的高尔基体蛋白73阳性率无明显差异，原发性肝癌组在甲胎蛋白>200 μg/L时高尔基体蛋白73阳性率均明显高于内部对照组、外部对照组，说明甲胎蛋白水平为200 μg/L是一个临界点，当甲胎蛋白水平高于200 μg/L时，高尔基体蛋白73阳性率也会明显增加，这可能与原发性肝癌不断进展有着密切的关系。另外三项指标联合检测对原发性肝癌诊断的敏感性、特异性均高于单一高尔基体蛋白73检测、单一甲胎蛋白检测、单一甲胎蛋白异质体3%检测，高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%联合检测可以提高原发性肝癌诊断符合率，具有很高的敏感性、特异性。
综上所述，高尔基体蛋白73、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体3%联合检测对原发性肝癌具有较高的敏感性和特异性，为原发性肝癌的临床诊断和治疗提供了可靠的理论依据。
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（收稿日期：2015-11-07 本文编辑：张瑜杰）