冷沉淀解冻后凝血因子变化的实验研究

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[摘要] 目的 探讨冰冻冷沉淀解冻融化后，在不同温度、不同时间凝血因子活性的变化，为临床使用冷沉淀提供理论依据。 方法 随机抽取12袋（200 mL/袋）新鲜冰冻血浆，用离心法制备冷沉淀12袋，每袋冷沉淀混匀后立即用保存管分装成多个样本（2 mL/管），速冻后-30℃保存。样本在37℃融化后分成两组，一组置于4℃保存，另一组置于24℃保存，两组分别于0、3、6、12、24、36、48、60 h进行PT、APTT、TT、FIB、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅪ 水平测定。 结果 融化后的冷沉淀在不同温度保存，PT、APTT、TT、FIB、FⅤ、FⅨ、FⅪ 变化差异无统计学意义（P ＞ 0.05），FⅡ、FⅦ和FⅧ 变化差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。融化后的冷沉淀在两组温度保存48 h，APTT水平均有明显变化（P ＜ 0.05），在4℃ 6 h及24℃ 36 h，FⅧ 水平下降均有高度统计学意义（P ＜ 0.01），且在4℃组保存，FⅧ衰减速度更快。除APTT、FⅧ外，其他指标在两种温度下60 h均无明显的改变。 结论 融化后的冷沉淀在60 h的保存期内，除FⅧ外，其他凝血因子活性没有明显的变化。在临床输注上，除非急需补充FⅧ，融化后保存60 h的冷沉淀仍可输注使用。

[关键词] 冷沉淀；凝血因子；活性；温度；时间

[中图分类号] R457.1[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）04（b）-0028-03

冷沉淀（cryoprecipitate，CP）是将新鲜冰冻血浆（fresh frozen plasma，FFP）经1～6℃解冻再经离心移除血浆后的余留不溶的沉淀物，CP主要含有凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（FIB）、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、纤维结合蛋白（Fn）和凝血因子ⅩⅢ（FⅩⅢ），广泛应用于治疗血友病、FIB缺乏、补充Fn等和纠正凝血功能障碍以及外科手术等方面[1]。然而，在临床输注上，时常出现融解后的CP因输注不及时而作为失效血液废弃，对血液资源造成浪费。因此，为准确了解CP使用的时效性，指导临床选择使用CP，减少CP解冻后因放置问题造成血液浪费，本研究对CP融化后于不同温度、不同时间下，检测各凝血因子活性，观察温度和时间对CP凝血因子活性的影响，为临床使用冷沉淀提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 标本来源及处理

随机抽取200 mL规格FFP 12袋，用离心法制备成CP，每袋CP制成后立即充分混匀，按无菌技术要求分装于多支保存管内，每管2 mL，包装标识后放入-50℃速冻箱内冻结，冻成后转入-30℃低温冰箱保存备用。

1.2 试剂与仪器

凝血酶原时间（PT）检测试剂盒（批号：20100802），活化部分凝血酶时间（APTT）检测试剂盒（批号：20100802），凝血酶时间（TT）检测试剂盒（批号：20100701），FIB检测试剂盒（批号：20100702），FⅡ检测试剂盒（批号：20100903），FⅤ检测试剂盒（批号：20100902），FⅦ检测试剂盒（批号：20100903），FⅧ检测试剂盒（批号：20100916），FⅨ检测试剂盒（批号：20100904），FⅪ检测试剂盒（批号：20100903），均为成都协和生物技术中心生产。CT-4T.6C血浆低温融化箱（美国CYTOTHERM公司）；CA-50血凝分析仪（日本SYSMEX公司）；J6-MI低温血液离心机（美国贝克曼公司）；SDJ-20血液速冻机（天津天商冰源科技公司）；-30℃低温冰箱（日本三洋公司）；4℃冰箱（日本三洋公司）；24℃恒温箱（广东省医疗器械厂）；HH-W420恒温水箱（江苏金坛医疗仪器厂）。

1.3 方法

取出保存管标本，置37℃水浴中融化。每袋CP标本分为两组，第一组融化后置于4℃冰箱保存，第二组融化后置于24℃恒温箱保存。用CA-50自动血凝仪，采用散射光法对两组CP血浆标本于0、3、6、12、24、36、48、60 h分别进行PT、APTT、TT、FIB、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅪ项目测定。

1.4 统计学方法

应用SPSS 17.0统计学软件处理，所测数据用均数±标准差（x±s）表示，采用配对t检验，以P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各凝血因子检测结果

在两组温度保存48 h后，APTT水平均有明显变化（P ＜ 0.05），FⅧ在4℃ 6 h及24℃ 12 h后有明显的变化（P ＜ 0.01及P ＜ 0.05），相比24℃，FⅧ在4℃保存衰减速度更快。其他指标在两种温度下60 h均无明显的改变。见表1。

2.2 不同温度保存下各凝血因子检测值比较

融化后的CP在不同温度保存，其PT、APTT、TT、FIB、FⅤ、FⅨ、FⅪ 水平检测比较差异均无统计学意义（P ＞ 0.05），FⅡ、FⅦ和FⅧ比较差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01），24℃组凝血因子活性高于4℃组。见表2。

2.3 部分凝血因子60 h衰减情况

融化后的CP随着时间的延长，FⅡ、FⅤ、FⅧ、FⅨ均有衰减的趋势，FⅧ变化较为明显。见表3。

3 讨论

CP是一种特别的血液制品，它的有效成分较为复杂，在临床应用上具有多重性。CP除传统用于补充FⅧ、FIB、vWF、Fn等之外，近来也有相当多其他方面应用的研究[2-4]，但对CP融化后凝血因子变化文献报道不多。本研究就CP融化后分别放置4℃及24℃环境60 h，观察各时间点的凝血因子指标变化情况。

表1显示，CP融化后，对PT、TT、FIB、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅨ和FⅪ不同时间检测，结果差异均无统计学意义，而FⅧ和APTT随时间延长变化有显著性，证明FⅧ具有不稳定性。

本研究中的检测指标PT试验，是反映外源性凝血因子（Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）水平试验， PT变化不明显，提示凝血因子（Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）相对稳定或变化小而没有影响到TP改变；APTT是反映内源性凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）水平的实验，APTT变化明显，说明凝血因子（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ）当中有明显活性衰减，这对表1中FⅧ衰减结果得到验证，进一步证明FⅧ不稳定性；TT试验是用于测定FIB转化为纤维蛋白所需的时间，其与FIB检测结果说明FIB是一种稳定凝血因子。由此可见，FⅧ是一种不稳定凝血因子，其他凝血因子（FIB、FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅪ）属稳定凝血因子。

也有文献认为FⅤ和FⅦ是一种不稳定的凝血因子[5-6]，但本实验结果表明，CP经60 h保存后，无论是在4℃还是24℃条件下，FⅤ和FⅦ活性均没有显著改变，证明FⅤ和FⅦ是稳定凝血因子，很多研究也证明了这一点[7-10]。

由表2可知，不同温度保存下，FⅡ、FⅦ和FⅧ活性变化有所不同，表3显示FⅡ、FⅦ和FⅧ在24℃保存优于4℃保存，这说明CP在24℃环境保存会使FⅡ、FⅦ和FⅧ活性衰减速度变慢，有利于稳定CP凝血因子活性，延长制品融化后保存期。

目前，我国对CP融化后的保存温度没有明确规定，在临床使用上，一般是将融化后暂不输用的CP保存于2～6℃冰箱内，认为2～6℃环境用利于凝血因子稳定。本研究表明，为保持CP凝血因子活性，2～6℃保存不是一个好的选择，而是在室温（24℃）保存更利于凝血因子稳定。对解冻CP，美国行业标准就明确规定贮存温度为20～24℃[11]，本研究结果进一步验证了此规定。

由表3结果可知，FⅧ作为一种不稳定凝血因子，其半衰期长短与保存温度有关。FⅧ在4℃保存，其半衰期24 h,保存至60 h，其活性只有0 h的46.1%；而在24℃保存，FⅧ半衰期则大大延长，超过60 h。

由于人体血液中FⅧ活性水平达到正常水平的25%左右即可发挥止血功能[12]，因此，除非患者FⅧ水平极度低下，可输注室温保存60 h的CP，有研究认为，输注室温保存6 h以上的CP以补充FⅧ是有效的[13]，从另一方面考虑，临床上绝大多数CP制品并不是用于补充FⅧ，因此，输注融化后60 h的CP是可行的。

本实验研究结果为临床对融化后CP保存及输注提供了理论依据，笔者认为，临床应优化使用CP，对融化后暂不输注的CP应保存于室温（20～24℃）条件，对有CP使用临床指征患者（FⅧ缺乏患者除外），可以使用融化后60 h CP代替输注，减少因CP输注时效而造成的血液浪费。

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