探讨外周血CD4+、CD8+T细胞CD69在小儿类风湿关节炎发生过程中的免疫病理作用
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【摘要】 目的：对小儿类风湿关节炎（RA）在发生过程中外周血中CD4+、CD8+T细胞CD69的表达水平与免疫病理作用进行探讨。方法：选取本院在2011年7月-2012年9月间采集的30例类风湿关节炎患儿与30例健康儿童的外周血标本，将前者定为观察组，后者定为对照组。对这两组儿童外周血中的cd4+、cd8+t细胞cd69采用流式细胞仪进行检测；观察组患儿采用药物治疗后，检测CD4+、CD8+T细胞CD69的表达水平情况。结果：观察组患儿的CD4+、CD8+T细胞CD69的表达水平明显高于对照组（P
类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis， RA）主要是以关节滑膜慢性炎症为主要特征的自身免疫病性疾病，该种疾病会导致关节的下层的软骨和骨质受到损害，最终导致患者的关节出现畸形。该种疾病如果不经过正规的治疗，患有此病的患者有75%会在3年之内残废。类风湿关节炎在世界各地都有分布，其发病也是有一定的种族差异。但是无论是在哪个国家，RA都是影响着小儿自身免疫性疾病的重要疾病之一。根据有关研究表明，RA与人体的免疫功能紊乱是有着一定的联系，因为免疫系统紊乱，所以会出现关节滑膜组织慢性炎症，导致化膜组织内部的纤维模样细胞增生，一些T细胞、B细胞、巨噬细胞以及树突细胞被激活并浸润，从而分泌出大量的促炎症物质。CD69根据有关研究表明，是激活T细胞的主要标记物，而CD4+、CD8+T细胞是影响CD69细胞的主要物质。为了了解CD4+、CD8+T细胞CD69的表达水平在RA发病过程中的免疫病理作用，文章将选取本院在2011年7月-2012年9月间采集的30例类风湿关节炎患儿与30例健康儿童的外周血标本，并将前者定为观察组，后者定为对照组，详细报告结果如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取本院小儿骨科、骨科门诊在2011年7月-2012年9月间采集的30例类风湿关节炎患儿与30例健康儿童的外周血标本，并将前者定为观察组，后者定为对照组。观察组男10例，女20例，年龄在7～12岁，平均年龄为（13.1±2.3）岁；对照组男12例，女18例，年龄在8～12岁，平均年龄为（12.2±2.2）岁。所有受检儿童均没有其他的遗传性疾病、部分器官组织炎症病变或是部分器官组织感染，均得到了受检者的监护人的同意。两组儿童性别年龄等一般资料差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2 方法
1.2.1 试剂选择 选择的试剂主要有异硫氰酸荧光素所标记的CD69单抗、美国BD公司所生产的藻红蛋白标记的CD4与CD8单抗，上海试剂二厂所生产的淋巴细胞分离液[1]。
1.2.2 分离方法 抽取两组受检者的外周血3 mL，将外周血液中的淋巴细胞进行分离，需要使用淋巴细胞分离液、将已经分离出来的淋巴细胞使用生理盐水进行稀释，将细胞稀释成1×106/mL的浓度[2]。
1.2.3 C69水平分析法 将已经分离出来的外周血淋巴细胞用生理盐水清洗两次，之后采用异硫氰酸荧光素对所有的单抗进行染色[3]。并将其放置在温度为4℃左右避光的位置上30 min。30 min后，用生理盐水对未结合的抗体进行清洗。对细胞采用0.5 mL 3%的多聚甲醛进行固定，并在固定结束后使用流式细胞仪对其中的CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平进行检测，也就是CD69+CD4、CD69+CD8+T细胞的含量情况进行检测。为了对样本的中阳性率的高低进行计算，需要采用CellQuest软件进行计算[3]。
1.2.4 治疗方法 选用非甾体类抗炎药物进行治疗时，根据患儿的体重合理的控制。如患儿的体重在25 kg，每日服用的药物含量在80～100 mg；患儿的体重在25 kg以上，每日服用的药物在3.6 g，每日分4次服用。治疗的时间控制在8周，在8周后重新抽取患儿的外周血进行检测，观察血液中的CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平[4]。
1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P
2 结果
2.1 两组外周血CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平比较 观察组CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平明显高于对照组，两组比较差异均有统计学意义（P
2.2 治疗结果 治疗后，观察组患儿外周血CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平明显均下降，与治疗前比较差异均有统计学意义（P
3 讨论
3.1 小儿RA基本情况 在上文已经了解到小儿RA是一种因为自身免疫引发的一种关节炎。该种疾病的临床症状主要是缓慢引起的疾病，只有少数是急性起病的[5]。RA是一种慢性的、反复发作的自身免疫性关节疾病，其主要的特征是对称性，一旦发病，将会对患儿周围的关节造成影响，其可表现在关节、关节外上。（1）关节表现出一种对称性、持续性的关节肿胀或是疼痛[6]。并且患儿在早晨起床时，肢体还会伴有僵硬的情况。中期或是晚期的患儿的手指还会出现天鹅颈或是纽扣花等畸形状态；（2）在关节外的表现还会影响到患儿的血管、心脏、胸腔、肺部、肾部或是神经系统[7]。
在近年来的研究中发现，关节滑膜组织内先天性和获得性免疫应答都与关节滑膜炎真的病变有所联系，在已经有炎症的关节化膜组织内，已经被激活的T细胞核巨噬细胞是关节滑膜炎真的主要助推器，在对关节炎症的破坏上起到了比较重要的作用。RA患儿的免疫病理学特征主要表现为：炎症关节滑膜组织内部聚集着大量已经被激活的淋巴细胞，并且通过淋巴细胞表面的高水平的免疫激活分子与辅助信号分子，例如CD25、CD28、CD154等，通过这些分子分泌出大量的促进炎症细胞因子以及趋化因子，例如IL-1B、IL-6、TNF-A、IL-8等等，高水平的促炎症细胞因子、趋化因子以及可溶性的免疫粘附因子都能够在关节滑液中检测出来。且已经被激活的淋巴细胞，能够增强RA患者全身以及关节滑膜的局部免疫应答功能，通过该种功能，分泌出大量的Thl细胞因子，促使树突状细胞的激活，进一步的增强抗原递呈的能力，从而造成关节化膜组织的损伤。
3.2 CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平表达 本次主要是对小儿RA外周血中的CD4+、CD8+T细胞表达CD69水平表达进行研究，通过观察组在表1与表2治疗前的表达情况，其是影响患儿发病的主要因素[8]。在上文了解到小儿RA在当前的临床研究中，其病理有一种说法是受到了遗传影响，所以CD4+、CD8+T细胞是受到先天性和获得性免疫应答所引起的，因为该细胞在表面具有非特异性识别关节滑膜内胶原蛋白成分，该种成分会诱使该细胞分泌出一些促进炎症发作的细胞因子[9]。且这两种细胞通过自身的抗原受体，会引起抗原特异性的获得性免疫应答，从而激活外周血液中的炎性细胞，并增殖，造成组织的损伤。CD4+T细胞能够分泌出纱帘的Th1细胞因子，激活树突状细胞，增强该细胞的抗原递呈能力，上调自身免疫的应答；CD8+T细胞能够进行变异，转变成CTL细胞，从而导致患儿的关节滑膜组织出现炎症损伤[10]。
3.3 治疗方法体会 本次在治疗观察组患儿时，所采用的治疗方法是西医，所采用的药物是非甾体类抗炎药，该种药物是一种具有解热[11]。镇痛、抗炎以及抗风湿的药物。但是在选择该种药物进行治疗的时候，不能够随意选择，因为儿童对一些非甾体类抗炎药物比较敏感。并且在选择剂量的时候要慎重，否则将会对患儿的胃肠道或是肾脏带来一定的影响。为了避免过多的副作用，还可选择中医进行治疗，选择清热凉血，祛风通络的药方也可[12-15]。
3.4 预防措施 小儿患上了RA时，应当要注意休息、避免劳累。除了药物治疗外，还应当加强自身的功能锻炼、配合理疗的方式进行治疗。家长也可在家中对患儿进行按摩、推拿等能够保持患儿关节功能的方法预防RA。
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（收稿日期：2013-09-06） （本文编辑：黄新珍）