大豆发酵制品中总异黄酮含量测定论文

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1器材与方法

1.1材料

正己烷（A.R），天津化学试剂厂产品；无水乙醇（A.R），天津化学试剂厂产品；氢氧化钠（A.R），河北辛集化工厂产品；染料木素对照品（含量约为98%），Sigma公司产品。淡豆豉（SemenSojaePraeparatum）购自石家庄市乐仁堂药店，经河北医科大学中医学院药用植物教研室严玉平副教授鉴定为正品，留样凭证存放于河北医科大学中医学院药用植物教研室。

1.2仪器

λ-2紫外分光光度仪（美国PE公司）、RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）、BS223S电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.3样品溶液制备［6］取符合实验要求的淡豆豉，粉碎，过10目筛，精密称取5g。加正己烷40ml超声振荡脱脂25min，弃去正己烷，重复1次。残渣加入50ml70%乙醇溶液，85℃热回流提取3次，1h/次，收集提取液。减压回收溶剂至干，加NaOH（0.01mol/L）溶液溶解，定容为250ml，作为供试品液。精密移取供试品液2ml置100ml量瓶中，加NaOH（0.01mol/L）溶液定容至刻度，摇匀。平行操作3份。

1.4标准曲线绘制精密称取120℃干燥至恒重的染料木素10.2mg，置50ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH溶液定容至刻度，摇匀。精密吸取此溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml分别置于100ml容量瓶中，加0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，以0.01mol/LNaOH溶液为空白溶液，在271nm处测吸收度。以吸收度（Y）为纵坐标，染料木素浓度(μg/ml)（X）为横坐标绘制标准曲线（见图1），结果表明染料木素浓度与吸收度呈良好线性关系。回归方程为Y=0.1698X+0.0059，r=1.0000。

1.5样品测定以0.01mol/LNaOH溶液为空白溶液，在271nm处测吸收度。每个样品重复测定2次。

2结果

2.1溶剂的选择从染料木素的结构特点及理化性质可知，其具有强疏水性，难溶于水、稀盐酸等，微溶于甲醇、乙醇。选择上述溶液作为染料木素的溶出介质不适宜。根据染料木素及异黄酮类化合物的理化特性（结构中含有酚羟基呈现弱酸性，易溶于稀碱），选择稀氢氧化钠（0.01mol/L）溶液溶解大豆提取物中异黄酮类化合物，是简便可行的。

2.2波长选择由对照品紫外扫描图谱(图2)可得知，最大吸收峰都在271nm，且最大吸收峰周围干扰较小，我们就把271nm作为测定波长。

2.3线性关系考察本法中，染料木素在0.51～4.08μg/ml范围呈良好线性关系(见图1)，相关系数r=1.0000，测定上限可达8.0μg/ml，下限为0.2μg/ml。

2.4回收率实验精密吸取标准品溶液25，50，25，50，25μl，分别置5只5ml容量瓶中,再分别精密加入供试液150μl，0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，按“1.3.3”项操作，计算回收率，结果平均回收率为99.3%，RSD为2.1%。见表1。

2.5精密度实验精密吸取标准品溶液100μl，分别置5只5ml容量瓶中,加0.01mol/LNaOH定容至刻度，摇匀，按“1.4”项操作，测定吸收度，RSD为1.9%。

2.6样品测定取已制备好的3份样品溶液测定，每份样品按测定程序测定2次，以染料木素计量大豆异黄酮含量，所得结果见表2。表1加样回收率（略）表2样品中大豆异黄酮含量（略）

3讨论

淡豆豉为常用药食同源物质，其最新报道有降血糖、血脂的作用，但有关淡豆豉中总异黄酮的质量分析报道较少［7］。我们经过研究对比，确定用一种简单易行的紫外分光光度法对其主要有效成分—异黄酮类成分进行测定，建立了一种淡豆豉的质量控制标准。

本法简便、快速、选择性好、线性范围宽、重复性好、能全面反映样品中大豆异黄酮的总含量，适用于淡豆豉中总异黄酮的质量检测和测定，尤其是生产过程的质量控制。

采用稀碱溶液溶解异黄酮，增加了异黄酮的溶解度，使得淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度大大提高。同时由于淡豆豉中异黄酮与碱发生反应，使得其最大吸收波长发生红移，紫外吸收峰远离末端吸收，也提高了淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度。

【参考文献】

［1］杨淑媛,田元兰,丁纯孝.新编大豆食品［M］.北京：中国商业出版社,1989：284.

［2］C．LeeHolder，MonaI.Churchwell，DanielR.Doerge.QuantificationofSoyIsoflavones，GenisteinandConjugatesinRatBloodUsingLC/ES-MS［J］.AgricFoodChem.，1999，47：3764.

［3］牛丽颖,王鑫国,葛喜珍,等.淡豆豉提取物降糖有效部位研究［J］.中药药理与临床,2002,20(5):21.

［4］王鑫国,葛喜珍,白霞,等.淡豆豉对去卵巢大鼠脂代谢的影响［J］.中药材,2003，26(9),652.

［5］王强,丛晓东,余伯阳,等.中药分析［M］.福州：福建科技出版社,1993:193.

［6］窦玉红,崔力剑,黄芸,等.正交设计优选淡豆豉中总异黄酮的提取工艺［J］.河北中医药学报,2006,21（2）:33.

［7］崔力剑,黄芸,杜淑娟,等.紫外分光光度法测定淡豆豉中异黄酮的含量［J］.河北中医药学报,2004,19(3):32.

【摘要】目的建立一种测定大豆发酵制品——淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在271nm波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为9.884mg/g，加样回收率为99.3%，相对标准偏差为2.1%。结论方法简便、准确、重现性好,可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。

【关键词】大豆淡豆豉氢氧化钠异黄酮分光光度法