蝴蝶兰类原球茎分化的开放组培试验研究
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摘要 以自行研制的抗菌剂进行蝴蝶兰原球茎分化成苗开放组培试验。培养基1/2MS+3 g/L 6-BA+100 g/L香蕉泥+20 g/L蔗糖+1.0 g/L活性炭+6.3 g/L琼脂条，处理组附加适当浓度的抗菌剂。培养45 d观察发现抗菌剂能有效抑制培养基污染，类原球茎能全部分化成苗，平均苗高（2.6±0.4）cm，与对照（高压灭菌）差异不显著，叶片数1～2片、>0.5 cm根1～3条，与对照一致。由此表明，蝴蝶兰类原球茎分化成苗的开放组培确实可行。
关键词 蝴蝶兰；开放组培；类原球茎；分化成苗
中图分类号 S682.31 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）21-0115-01
植物开放组培[1]指在培养基中添加抗菌剂，免去高压灭菌，接种免超净工作台可在相对开放的环境进行，具有培养基成分免遭破坏、减少琼脂用量等特点，在几种植物组培[1-8]中已有试验。开放组培在蝴蝶兰组培苗生产上的推广应用，将在降低能源消耗、提高工作效率、降低苗木成本、提高市场竞争力等方面有较大意义。笔者利用自主研发的抗菌组培复配抗菌剂，成功应用于多种植物种子的萌发试验[9]，本文报道蝴蝶兰类原球茎分化成苗（长芽生根）的开放组培试验。
1 材料与方法
1.1 试验材料
蝴蝶兰（Phalaenopsis ssp.）组培类原球茎（PLB）由福建省亚热带植物研究所组培实验室提供。
1.2 试验方法
1.2.1 培养基配制方法。650 mL玻璃兰花瓶预先84消毒水浸泡30 min，晾干。培养基1/2MS+3 mg/L 6-BA+100 g/L香蕉泥+20 g/L蔗糖+1.0 g/L活性炭+6.3 g/L琼脂条（常规用量70%）。培养基各组分常规方法加热完全熔化，断开热源，定容，处理组每升培养基加入抗菌剂A（主要成分为乙蒜素）0.3 mL和抗菌剂 B（主要成分为苦参碱）0.8 mL，调pH值至5.6，不经高压灭菌，直接分装到培养瓶。15 min内加盖静置存放。对照培养基不添加抗菌剂，琼脂条0.9%，pH值5.8，常规高压灭菌。
1.2.2 接种方法。接种免超净台，普通接种室用75%酒精喷雾降尘、开紫外灯照射20 min，用75%酒精将接种台面和手擦干净，在台面接种操作，对照在超净工作台常规方法接种。每瓶接种类原球茎12粒。
2 结果与分析
类原球茎培养45 d后观察长叶生根情况见表1。可以看出，对照（高压消毒）与开放组培培养基都只有1瓶污染，污染率相同，说明该抗菌剂浓度能有效抑制培养基微生物污染。未污染培养基的类原球茎可全部成活并分化成苗，培养45 d后平均苗高t检验差异显著性，t统计量-0.92，绝对值小于t（0.05）临界值2.05，即差异不显著，叶数、>0.5 cm根数一致，表明该抗菌剂对蝴蝶兰类原球o长叶生根没有明显抑制作用。
3 讨论
开放式组培的技术关键是在培养基中添加一定浓度的抗菌剂，既能有效抑制培养基微生物污染，又对所培养植物没有明显的毒副作用。目前，热门的兰科植物（铁皮石斛、金线莲、蝴蝶兰、大花蕙兰）的组织培养均采用大培养瓶（约650 mL）分装培养基，培养基还添加富含营养的果蔬汁液，这2个因素将导致培养基污染概率明显提高，所以必须添加较高的抗菌剂剂量以控制污染，同时又要对所培养植物没有明显的毒副作用，这在实际操作中存在一定难度，制约了开放式组培技术的广泛应用。本试验利用自主研发的开放组培抗菌剂，证明添加香蕉汁且用大培养瓶分装，开放组培蝴蝶兰类原球茎分化（长芽生根）是可行的，该结果为培养基添加果蔬汁液且用大培养瓶分装的开放组培提供借鉴。
4 参考文献
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