Ki―67、Bmi―1蛋白在结肠癌患者中的表达及预后分析

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[摘要] 目的 探讨ki-67、bmi-1在结肠癌及癌旁正常组织中的表达意义、相互关系及评估预后的价值。 方法 选取 2009年1月～2012年12月保定市第二医院收治的结肠癌患者60例为观察组，同时选择其癌旁正常组织 20 例为对照组。采用免疫组织化学法检测两组结肠癌组织中Ki-67、Bmi-1的表达情况，并分析其与结肠癌临床病理特点、预后的关系。 结果 免疫组织化学检测结果显示，观察组Ki-67、Bmi-1表达明显高于对照组（P < 0.05），观察组Ki-67和Bmi-1的表达均与淋巴结转移、组织分化程度、TNM分期相关（P < 0.05），而与年龄、性别、肿瘤大小无关（P > 0.05），观察组患者结肠癌组织中Ki-67、Bmi-1表达呈正相关（r = 0.572，P < 0.05），Ki-67、Bmi-1表达阳性者3年生存率与表达阴性者比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 Ki-67、Bmi-1表达与结肠癌发生、发展相关，目前还不能确定是否与与结肠癌不良预后有关。

[关键词] Ki-67；Bmi-1；结肠癌；免疫组化

[中图分类号] R735.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）08（b）-0122-04

[Abstract] Objective To investigate the expression， relationship and the prognostic value of Ki-67 and Bmi-1 in colon cancer and adjacent normal tissues. Methods Sixty patients with colon cancer from January 2009 to December 2012 in the Second Hospital of Baoding City were selected as observation group， at the same time 20 cases of the adjacent normal tissues were collected as the control group. Expression of Ki-67 and Bmi-1 in colon tissues of two groups were detected by immunohistochemical staining， and the relationship between the expression of Ki-67， Bmi-1 and clinical pathological characteristics， prognosis were analyzed. Results Immunohistochemical detection showed that， expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were significantly higher than those of the control group （P < 0.05）， expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were related with lymphnode metastasis， diferentiation， and TNM staging （P < 0.05）， while the expression of the two genes had nothing to do with age， the gender， size （P > 0.05）. The expression of Ki-67 was positively correlated with Bmi-1 in the colon cancer tissues of the observation group （r = 0.572， P < 0.05）. 3 years survival rate between patients with Ki-67 and Bmi-1 positive expression and negative expression had no statistically significant difference （P > 0.05）. Conclusion The expression of Bmi-1 and Ki-67 is related to the occurrence and development of colon cancer， but can not sure that is related to the poor prognosis of colon cancer.

[Key words] Ki-67； Bmi-1； Colon cancer； Immunohistochemisty

Ki-67是应用最为广泛的增生细胞标志物之一，反映细胞分裂和增殖活性，其在肿瘤组织中的表达高低与肿瘤的增殖密切相关[1-2]。Bmi-1是多梳基因家族（Polycomb group genes，PcG）的重要成员之一，参与调节细胞增殖、分化与衰老，并且维持多种正常干细胞和肿瘤干细胞的自我更新和增殖[3]。本研究通过免疫组化技术检测Ki-67、Bmi-1在结肠癌组织中的表达，研究两者的相关性及其与结肠癌发生、发展的关系，以期为结肠癌的临床诊疗与预后判断提供有价值的参考指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年1月～2012年12月保定市第二医院收治并经病理证实的结肠癌患者60例，均为腺癌，同时选择其癌旁正常组织20例（距癌灶>10 cm）。所有患者术前均未行放疗、化疗及生物靶向治疗等，全部患者术后标本均经病理证实。其中男36例，女24例；年龄25～78岁，中位年龄59岁；淋巴结转移阳性29例，阴性31例；高中分化32例，低分化28例；肿瘤直径≥5 cm 28例，

1.2 试剂

Bmi-1兔抗人单克隆抗体购自美国AB-GENT公司，Ki-67兔抗人单克隆抗体，即用型S-P免疫组化染色试剂盒均为Santa cruz公司产品（北京中杉金桥生物技术有限公司），用已知阳性标本作为阳性对照， 以PBS代替一抗为阴性对照。

1.3 方法

所有标本均经10%中尔马林溶液固定，石蜡包埋，连续制成4 μm厚切片若干张，均进行SP法免疫组化染色，实验步骤按试剂盒说明书进行。

1.4 免疫结果的判定

Ki-67定位于细胞核，呈棕黄色颗粒沉着，每张切片观察5个高倍镜视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计500个细胞，阳性细胞所占比例≥10%为阳性，50%为3分；②按染色强度（B值）评分：不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。结果判定：A+B > 2分为阳性，≤2分为阴性。

1.5 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，相关性检验采用Spearman检验，生存率计算采用Kaplan-Meier法，检验采用Log-Rank法；以P < 0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 Ki-67、Bmi-1在结肠癌及癌旁组织中的表达

Ki-67的表达主要定位于细胞核，呈棕黄色颗粒，见图1。Ki-67在结肠癌组织中的表达率高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P < 0.05），Bmi-1的表达主要定位于细胞质，呈棕黄色颗粒，见图2。Bmi-1在结肠癌组织中的表达率高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 Ki-67、Bmi-1表达与结肠癌临床病理特征的关系

Ki-67、Bmi-1在结肠癌组织中的表达均与年龄、性别、肿瘤大小无关，差异无统计学意义（P > 0.05），而与淋巴结转移、组织分化程度、TNM分期相关，且随着淋巴结转移，组织分化程度减低，TNM分期增加，Ki-67、和Bmi-1的表达逐渐增加，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

2.3 ki-67、Bmi-1的表达在结肠癌中的相关性

本研究发现，Ki-67与Bmi-1均阳性表达者37例，均阴性表达者12例，Spearman相关分析显示，上述两者呈正相关（r = 0.572，P < 0.01）。见表3。

2.4 Ki-67、Bmi-1表达与患者预后的关系

本组研究中60例结肠癌患者3年生存率为65.00%（39例），Ki-67表达阳性者（生存率为62.22%）与阴性者（生存率为73.33%）之间3年生存率经Log-Rank法检验差异无统计学意义（P > 0.05），Log-Rank法检验比较Bmi-1表达阳性者（生存率为60.00%）与阴性者（生存率为75.00%）的3年生存率，差异无统计学意义（P > 0.05）。见图3～4。

3 讨论

Ki-67是一种白，可作为细胞增殖的标志物，在细胞增殖的各期（G1、S、G2和M期）中均有表达，但在细胞静止G0期不表达，大量的研究表明Ki-67的表达与肿瘤临床病理分级、淋巴结转移密切相关，对于判断肿瘤的性质及侵袭力及评估肿瘤预后也十分重要[4-7]。本研究发现Ki-67在结肠癌组织中表达明显升高，有淋巴结转移、组织分化程度低、TNM分期晚者其表达明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05），这与既往研究结果一致[8]。在前列腺癌及乳腺癌中，Ki-67被认为是一个独立的预后因子[2，9-10]，而在结直肠癌中Ki-67的预后价值仍存在争议，Allegra等[11]研究认为在结直肠癌中Ki-67表达与良好的预后相关，但Chen等[12]研究认为在结直肠癌中Ki-67高表达的患者预后较差。本研究随访3年发现Ki-67阳性组生存率与Ki-67阴性组生存率比较，差异无统计学意义（P > 0.05），由此认为Ki-67目前还不能作为预测结直肠癌预后的参考因子。

Bmi-1可能通过多种机制介导肿瘤的发生、发展，部分学者研究发现Bmi-1可增强鼻咽癌细胞的运动和侵袭力，乳腺癌中Bmi-1的表达和病理分型、临床分期及不良预后密切相关，胃癌中Bmi-1的表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和预后相关[13-17]。本研究发现Bmi-1的表达在结肠癌组织中明显升高，且随着淋巴结转移，组织分化程度减低，TNM分期增加，Bmi-1的表达逐渐增加，差异有统计学意义（P < 0.05），由此可以推测Bmi-1在结肠癌发生、发展、转移、恶化中具有重要作用，研究研究发现，高表达Bmi-1的大肠癌、鼻咽癌患者预后较差，并认为Bmi-1是判断不良预后的参考指标[18-20]，但本研究发现Bmi-1阳性组患者3年生存率与Bmi-1阴性组患者3年生存率无明显差异（P > 0.05），不支持上述观点，由此不能认为Bmi-1表达阳性组患者预后更差。

恶性肿瘤的发生、发展是一个复杂的过程，涉及到细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移[21]，是多种因素共同作用的结果，本研究结果经Spearman相关分析显示Ki-67表达水平与Bmi-1的表达水平呈显著正相关（r = 0.572，P < 0.01），提示在结肠癌发生、发展、恶化的过程中二者可能具有协同作用，但本研究仅是蛋白水平进行分析，Ki-67及Bmi-1基因学及分子水平相互影响机制尚需进一步研究。

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（收稿日期：2016-05-10 本文编辑：任 念）