高效液相色谱法分析绿谷隆的含量

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摘 要：绿谷隆纯品为白色结晶固体，以甲醇+水为流动相，以Spherisorb C18为填充物的不锈钢柱对绿谷隆进行高效液相色谱分离，采用紫外检测器的高效液相色谱外标法进行检测。该方法的相对平均偏差为0.30%，变异系数为0.44%，平均回收率99.3-100.4%。结果表明，绿谷隆的浓度在1.34mg/50mL～8.03mg/50mL之间具有良好的线性范围，相关系数R2=0.9994。该方法简便、快速，具有较高的精密度和准确度，是一种较好的优化方案可以作为绿谷隆产品的质量分析。

关键词：绿谷隆；反相高效液相色谱；外标法

1 概述

绿谷隆纯品为白色结晶固体，是一种用于防除禾谷类及玉米田中杂草的除草剂，目前国内尚无绿谷隆的国家标准和行业标准，根据绿谷隆的物化性质和实际生产的需要，我们选择高效液相色谱法进行定量分析，该方法具有较高的精密度和准确度，且快速、准确，可作为绿谷隆的产品检验分析方法。

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

岛津LC-20AT具紫外可变波长检测器，色谱工作站，绿谷隆标准品≥98%，甲醇HPLC，新蒸二次蒸馏水，色谱柱：150mm×4.6mm×5μm，C18不锈钢柱，进样针：100μL。

2.2 液相色谱操作条件

流动相：甲醇+水=70+30（V/V），柱温：（25±5）℃，检测波长：254nm。流速： 1.0ml/min。保留时间：绿谷隆约：7.1min，绿谷隆标准品分离见图1，样品分离见图2。

2.3 测定步骤与计算

2.3.1 测定步骤

（1）标准溶液的的配制。准确称取约0.1g（精确到±0.0001g）绿谷隆标准品于50ml容量瓶中，用甲醇在超声波中溶解，取出冷却至室温，用甲醇稀释到刻度并摇匀。用移液管准确移取2.00ml该溶液于50ml容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀备用。

（2）样品溶液的配制。准确称取约0.1g（精确到±0.0001g）绿谷隆样品于50ml容量瓶中，用甲醇在超声波中溶解，取出冷却至室温，用甲醇稀释到刻度并摇匀。用移液管准确移取2.00ml该溶液于50ml容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，摇匀备用。

（3）测定。在上述色谱条件下，待仪器稳定后，连续注入绿谷隆标准溶液于色谱柱内，待相邻两针的绿谷隆标样峰面积变化小于1.0%时，按下列顺序进行色谱分析：标样溶液、样品溶液、样品溶液、标样溶液。

2.3.2 计算

将测得两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中绿谷隆的峰面积分别进行平均，试样中绿谷隆质量百分含量X按下式计算：

式中：r1-标样中绿谷隆的峰面积；r2-试样中绿谷隆的峰面积；m1-标样的质量，g；m2-样品的质量，g；P-标样中绿谷隆的质量百分含量%；

允许误差：两次平行测定结果之差小于0.5%，取其平均值作为样品中绿谷隆的百分含量。

2.4 结果与讨论

2.4.1 色谱条件的确定

（1）分离方法及检测器的选择。经过反复实验证明，绿谷隆在HPLC反相C18柱上分离效果和峰形良好，保留时间短，因此选用反相HPLC法分析。紫外检测器是高效液相色谱仪中应用最广泛的检测器，它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度均不敏感，根据绿谷隆的结构特点，通过实验证明，绿谷隆在紫外区内有很大吸收，因此紫外检测器可以作为分析绿谷隆的首选检测器。

（2）溶剂的选择。反相色谱法：固定相（填料）为非极性，流动相为极性。对应的色谱柱：烷基硅烷化键合硅胶填料，如C18（ODS）C8，C4，C3，苯基等。反相色谱中最常用的流动相及其洗脱强度：水

（3）流动相配比的选择。绿谷隆在流动相甲醇+水=80+20（V/V）时，保留时间过短，分离效果较差，在流动相甲醇+水=70+30时，峰形对称，分离效果良好，保留时间适中，且绿谷隆在甲醇中都有很好的溶解度，因此确定流动相甲醇+水=70+30为流动相操作条件。

（4）波长的选择。通过对绿谷隆吸收曲线的测定，绿谷隆在波长254nm和220nm处，都有很强的响应；在波长220nm处，吸收太强，峰高太高，超出检测器线性范围，若减少称样量或进样量，会影响结果的精密度和准确度；在254nm处，样品的称样量和峰高的比例适中，所以最后选择254nm作为绿谷隆的测定最佳波长。

2.4.2 方法的线性范围

准确称取不同质量的绿谷隆标准品配成不同浓度的溶液，在2.2色谱操作条件下测定，线性回归方程为：Y=06X+7E+58477，相关系数R2=0.9994。

2.4.3 精密度的测定

用同一样品在规定色谱条件下进行多次测定，其结果如表1所示：

表1 精密度测定结果数据表

2.4.4 回收率的实验

用绿谷隆标样加入到已知含量的绿谷隆的样品中，在规定的色谱条件下测定其回收加入率。结果如表2所示：

由23可知绿谷隆的回收率在98.8-100.4之间，说明方法的准确度较好。

3 结束语

利用反相高效液相色谱的外标法测定了绿谷隆的含量。该方法简便、快速，具有较高的精密度和准确度，是一种较好的优化方案，可以作为绿谷隆产品的质量分析。

参考文献

[1]杭州大学.分析化学手册（第二分册）化学分析[M].北京：化学工业出版社，2001.

[2]分析化学手册（第六分册）液相色谱分析[M].北京：化学工业出版社，2001.

[3]陈立仁，蒋生祥，等.高效液相色谱基础与实践[M].北京：科学出版社，2001.