肿瘤转移蛋白Ezrin在口腔鳞状细胞癌中的表达
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇肿瘤转移蛋白Ezrin在口腔鳞状细胞癌中的表达范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
【摘要】目的：检测Ezrin在口腔鳞状细胞癌（OSCC）、癌旁组织和口腔正常组织中的表达，探讨其在OSCC的发生发展过程中的作用及其与肿瘤淋巴结转移的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测未接受放疗和化疗的OSCC患者的手术切除标本50例、癌旁组织标本15例及口腔正常组织标本15例，用鼠抗人Ezrin单克隆抗体以及SP超敏试剂盒进行染色，采用半定量积分法判断结果，进行统计学分析，得出结论。结果：1）在口腔正常组织、癌旁组织和OSCC中，Ezrin表达分别为26.67％、53.34％、78.00％，其差异具有统计学意义（P
【关键词】口腔鳞状细胞癌；Ezrin；肿瘤转移蛋白；免疫组织化学
【中图分类号】R782
【文献标识码】A
口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcino-ma，OSCC）是最常见的口腔恶性肿瘤，其导致的死亡率为口腔癌之首，危害极大，具有极高的研究价值。世界公认转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因，大约90％的恶性肿瘤患者死于肿瘤转移。近年来，ezrin被发现与许多肿瘤发生、发展及预后相关。目前国外文献少有关于Ezrin在OSCC中表达的研究报道。中国学者对Ezrin的研究主要集中在骨肉瘤、横纹肌瘤等罕见的肿瘤，以及妇科肿瘤、胰腺癌、肝癌、黑色素瘤、乳腺癌等常见肿瘤中的表达。本研究旨在通过检测Ezrin在OSCC中的表达，初步探讨其在OSCC发生发展中的生物学意义。
1 材料和方法
1.1研究对象
选择2008年10月-2011年10月就诊于德阳市口腔医院口腔颌面外科的50例OSCC患者的手术切除标本。50例患者中男性32例，女性18例，年龄25～74岁。50例患者均无其他恶性肿瘤或严重内科疾病，术前均未行放、化疗。OSCC发生部位：颊部3例，唇部5例，舌部18例，口底17例，牙龈6例，咽旁1例。50例患者中伴有颈淋巴结转移者为36例。手术切除标本术后病理诊断为鳞状细胞癌，按世界卫生组织OSCC组织分型标准分高、中、低分化3级，其中高分化13例，中、低分化共37例。50例手术标本中选用15例在体外立即取癌旁组织（肿瘤临床边界周围1cm左右，肉眼观察大体正常的组织）标本并立即投入固定液中固定。口腔正常组织标本取自唇裂修补术切除的唇部组织及口腔良性病变周围的组织，共15例。标本的处理同前。
1.2主要实验试剂
鼠抗人Ezrin单克隆抗体、免疫组织化学超敏试剂盒Ultra SensitiveTMSP、即用型二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）；即用型抗体稀释液（Sigma公司，美国）。
1.3免疫组织化学染色
应用免疫组织化学SP法对50例OSCC组织标本、15例癌旁组织标本、15例正常口腔组织标本进行Ezrin特异性染色。石蜡切片脱蜡至水，0.01mol·L-1枸橼酸缓冲液常规水浴加热修复抗原，用过氧化物酶阻断溶液来阻断内源性过氧化物酶的活性，每张切片加正常非免疫动物血清，室温下孵育10min，除去血清，加鼠抗人Ezrin免疫组织化学单克隆抗体。室温下孵育60min，加生物素标记的羊抗鼠／兔IgG，室温下孵育10min，加链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶，室温下孵育10min。磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solu-tion，PBS）冲洗3次，每次3min，DAB显色，自来水冲洗，苏木精复染，PBS冲洗返蓝，梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。染色过程中设阳性和阴性对照，阳性对照用已知阳性切片，阴性对照用PBS代替一抗。
1.4免疫组织化学结果判定
Ezrin以细胞膜或者细胞质中出现明显的黄色或棕色颗粒为阳性染色；采用半定量积分法判断结果，每张切片随机选5个高倍视野观察，计数100个细胞，阳性细胞数≤5％为0分，6％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，>75％为4分；阳性强度：黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者积分相乘：0～1分为阴性，2～6分为阳性，8～12分为强阳性。阳性和强阳性作为表达阳性组计算其阳性率。
1.5统计学分析
采用SPSS 14.0统计软件包进行X2检验，P
2 结果
Ezrin定位于细胞的胞膜或细胞质，若胞膜或细胞质中出现了明显的黄色或棕黄色颗粒则为阳性细胞（图1）。
15例正常口腔组织标本中，Ezrin表达阳性率为26.67％；15例癌旁组织标本中，Ezrin表达阳性率为53.34％，其中强阳性表达者占20.00％；50例OSCC组织标本中，Ezrin表达阳性率为78.00％，其中强阳性表达者占44.00％，阳性表达者占34.00％。本研究显示：OSCC组织中，Ezrin的表达高于正常口腔组织和癌旁组织，三组间差异有统计学意义（P
2.2Ezrin的表达与OSCC患者的临床病理参数的关系
36例伴淋巴结转移OSCC患者的OSCC组织标本中，23例标本呈Ezrin阳性表达，阳性率为63.89％（23／36），而14例不伴淋巴结转移OSCC患者的OSCC组织标本中，仅3例标本呈Ezrin阳性表达，阳性率为21.43％（3／14），两者间差异有统计学意义（P0.05），这说明在OSCC中Ezrin的表达与其组织病理学分级无关。
3 讨论
Ezrin在C-末端的氨基酸位置上有一个关键的、与其激活有关的苏氨酸磷酸化位点，在N-末端有一个同源性很高的荧光能量共振转移功能域，该功能域在介导细胞表面黏附分子与细胞骨架通过ERM（Ezrin-Radixin-Moesin）蛋白连接的生理功能中起着关键作用。Ezrin以非活性状态和活性状态2种形式存在，由关键的C-末端苏氨酸残基经Rho或蛋白激酶C等途径磷酸化激活，再经膜上磷脂酰肌醇4，5-二磷酸的招募作用，导致其在特定细胞区域的聚集，而暴露的C-末端尾部具有肌动蛋白-细胞骨架结合位点。Ezrin将细胞膜蛋白与肌动蛋白-细胞骨架连接起来的，这种连接不但是结构上的，而且还是功能上的。通过介导膜与细胞骨架的连接，Ezrin在细胞的运动、迁移、有丝分裂等生理功能中发挥重要作用。
Ezrin在肿瘤转移过程中可能通过以下几个方面发挥作用。1）Ezrin与细胞表面受体分子的相互作用：可能参与到肿瘤转移的多个环节，包括从原发灶脱落、侵入周边组织、侵入脉管系统、穿过基底膜、选择性的在靶器官增殖形成转移灶等发挥作用。2）Ezrin与细胞黏附功能：Ezrin高表达致使肿瘤细胞运动能力增强，同时钙黏蛋白E遭破坏，使其在细胞与细胞之间的表达能力下降，导致肿瘤细胞自瘤组织中脱落，引起肿瘤的转移。Ezrin也可使细胞聚集减少而分离增加，细胞间隙增宽，伪足形成，运动力增强，侵袭力增强。3）Ezrin与细胞-细胞间的通讯连接：Ezrin的过表达可破坏细胞的外部与内部的功能的连接Rho介导的信号途径或将细胞-细胞间通讯连接的胞内蛋白的部分隔离，导致细胞-细胞问通讯连接的破坏，从而使肿瘤转移能力增强。Ezrin能将细胞与细胞在结构及功能上连接起来，细胞的外部与内部的功能的连接需要有信号途径传导信息，最重要的途径之一是由Rho介导的，Rho因子参与许多与肿瘤转移相关的细胞表面分子与胞内信号转导的过程，促进肿瘤的转移病例已被大量事实证明。4）Ezrin与信号转导机制：Ezrin的过表达可能通过对信号转导的负性调控因子的限制作用，导致正常细胞信号转导网络的失衡，从而使象CD44或Met这样的可以产生肿瘤转移效应的细胞表面分子所传递的信息被放大，最终导致肿瘤的转移。5）Ezrin与肿瘤吞噬能力：Ezrin高表达可能是干涉到Ezrin的磷酸化激活机制的失调，最终导致了Ezrin功能的增强，从而使肿瘤吞噬及转移能力增强。6）Ezrin的上游调控：Ezrin有可能受其上游Six 1基因的调控增强或减弱肿瘤细胞的转移能力。
Akisawa等检测了16种胰腺癌细胞株，结果表明胰腺癌的转移能力与Ezrin的高表达有相关性。Wan等在K7M2诱导形成的鼠骨肉瘤模型中发现，阻断Ezrin的表达或转染氨基末端显性负相的Ezrin破坏其功能都能显著的减少鼠的肺转移。李琼等在乳腺癌淋巴结转移病例中也发现，Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于良性病变，且有淋巴结转移者比无转移病例者更明显，说明Ezrin在乳腺癌中对肿瘤发生淋巴结转移有重要促进作用，可以作为预测浸润性乳腺导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。Kobel等用免疫组织化学的方法研究164例国际妇产科联合会分期Ⅰ期的子宫内膜癌患者，认为可以作为国际妇产科联合会分期Ⅰ期的子宫内膜癌预后指标。以上研究表明，Ezrin表达增高可以促进肿瘤转移，与肿瘤预后不良密切相关。然而，近来的报道也值得思考：Valdman等发现，Ezrin在大多数前列腺癌中高表达是预后不良的因素，在一些良性化生上皮及精囊腺也有高表达，可能与Ezrin在肿瘤转移中的作用具有细胞特异性有关。还有学者在散发性结直肠癌中的研究中得出：Ezrin在结直肠癌中的表达与年龄、性别、肿瘤大小、发生部位、分化程度、浸润深度等临床病理参数均无关。
本研究表明：Ezrin在OSCC组织、癌旁组织、正常口腔黏膜组织中表达逐渐降低，其中癌旁组织和正常组织之间表达差异有统计学意义（P
根据文献报道及本研究的结果，笔者认为：Ezrin在OSCC的发生发展过程中可能起着重要作用；检测OSCC组织中Ezrin的表达水平可能有助于对OSCC是否具有淋巴结转移潜能进行预测；OSCC中Ezrin的表达与淋巴结转移有关、与组织病理学分级无关。