正交设计优选益肾壮腰片提取工艺

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摘要　目的：筛选并优化益肾壮腰片提取工艺。方法：以干膏得率和提取物中补骨脂素及异补骨脂素含量为考察指标，采用正交设计多指标综合评分法优化提取工艺。结果：通过正交试验优化确定的提取条件为：药材饮片第一次以10倍水，第二次8倍，提取2次，每次60min。结论：优化得到的提取工艺合理、稳定、可行。

关键词　正交设计　补骨脂素　异补骨脂素

益肾壮腰片是广东第二中医院院内制剂，由杜仲、桑寄生、补骨脂等十三味药组成，具有补益肝肾，活血通络等功效，主治肾虚所致腰膝疼痛，腰肌劳损，肢节屈伸不利。补骨脂又名破故纸，为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实。 除东北、西北地区外全国各地均产，生长于温暖地带。栽培或野生，其性温，味辛。补骨脂作为本方君药，具补肾助阳、固精缩尿、温脾止泻之功效。因此，将补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素含量总和作为指标性成分，结合提取工艺浸膏得率为考察指标，采用正交试验设计对其提取条件优选，为生产工艺参数的确定提供依据。

1　仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪：G1316A检测器、G1312A二元泵、G1329A柱温箱、G2170A数据处理系统(Agilent，美国)；XS2055分析天平(梅特勒，瑞士)，药材饮片(广州致信药业有限公司，批号20100108)，补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110738-200811)，异补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110739-200812).水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1干膏得率的测定方法取各正交实验号浓缩液10ml于干燥蒸发皿中水浴蒸干，照干燥失重测定法(中国药典2010年版一部附录IXG)测定，计算干膏得率。

2.2补骨脂素和异补骨脂素含量测定

2.2.1对照品制备：利用分析天平精密称取已干燥的补骨脂素对照品1.08mg和异补骨脂素对照品1.12mg置50ml容量瓶，甲醇溶解定容至50ml，即补骨脂素为0.216mg／ml，异补骨脂素为0.223mg／ml。

2.2.2样品制备及测定：取各正交实验号浓缩液5ml，置干燥蒸发皿中80℃水浴蒸干，甲醇溶解定容至50ml。同法制备阴性样品。

2.2.3色谱条件：色谱柱：ZORBAX Ecliose XDB-C18柱(4.6×150mm，5Ixm)；流动相：甲醇：水(45：55)；检测波长246nm，柱温25～C。将补骨脂素和异补骨脂素对照品分别进样，2、3、4、5、6、8、10ul，由图1补骨脂素和异补骨脂素在该色谱条件下分离效果良好，其中补骨脂素在43.2-216ng范围内线性关系良好，回归方程为：Y=8.89033656X-11.978077，r=0.99987(见图4)；异补骨脂素在44.6～223ng范围内线性关系良好，回归方程为：Y=9.90464316X-14.750634，r=0.99981(见图5)。将阴性样品和待测样品进样检测，结果表明，阴性样品色谱在补骨脂素和异补骨脂素相应的保留时间上无色谱峰(见图3)，样品补骨脂素和异补骨脂素样品中色谱峰分离度良好(图2)。

2.2吸水率考察按处方称取的药材，加10倍量的水浸泡，每隔1个小时观察一次浸透心情况，直至药材全部浸透，滤过，量取滤液体积，计算药材吸水率，求得药材吸水率为178.1％。

2.3正交设计优选提取工艺益肾壮腰片采用水煎煮提取工艺，在单因素试验考察的基础上，采用正交试验优化提取工艺，选取加水量(A)，提取次数(B)，提取时间(c)，作为考察因素，各取三水平，进行L9(34)正交试验，筛选最佳工艺条件，因素水平表见表1。补骨脂作为方中君药，补骨脂素和异补骨脂素为其主要成分，本试验以高效液相法测定提取液中补骨脂素和异补骨脂素的含量，作为评价指标之一，权重系数定为0.6；而作为有效成分煎出间接控制的―个指标，药效物质提取的多少以干膏得率为考察指标。权重系数定为0.4，以两指标的结果进行综合评分。 试验时按处方量称取药材、饮片，按正交试验设计各实验号进行提取，滤过，滤液减压浓缩，定容至250ml，备用。分别按2.2项下方法测定干膏得率、补骨脂素及异补骨脂素含量，采用以下公式：

Y=(40/得膏率max)×得膏率+(60/(补骨脂素+异补骨脂素)max)×(补骨脂素+异补骨脂素)含量

进行综合评分，用SPSS11.0统计软件进行数据处理，对评分结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出在该试验条件下最优的提取条件，试验安排及结果见表2，方差分析结果见表3。

由直观分析可知.影响提取工艺效果的因素顺序为：提取时间(B)>提取次数(c)>加水量(A)，最佳工艺组合为A182C2。方差分析结果显示，提取次数和提取时间均对提取结果具有显著性影响，而加水量对试验结果的影响无显著性影响。由于处方药材吸水率为178.1％，综合考虑缩短生产周期，降低生产成本等综合因素，选择第一次加水10倍量，第二次加水8倍，提取2次，每次提取60min作为水提取工艺参数。

2.4验证实验为确定该工艺条件的稳定性，以筛选的最佳条件，验证3批，结果见表4。验证试验结果与正 交试验优选结果吻合，表明正交试验优选确定的工艺条件合理、稳定、可行。

3　讨论

3.1 中药复方提取效果直接关系到产品的质量和疗效，选择评价提取工艺优劣的评价指标是研究工作中的重要问题，合理的提取工艺评价指标应该是提取的有效成分质和量的代表，也是提取物临床作用性质和强度的代表。一般工艺优选只选择一个主要指标成分作为考察指标。采用正交试验优选提取工艺的研究，一般选择总固物得率作为评价指标。由于中药中大量淀粉、黏液质、鞣质等大分子物质容易被煎出，特别是在提取时间长，提取次数多的情况下，往往导致得膏率偏高，造成假阳性结果，不利于结果的判断。本文选取了方中君药补骨脂中两个主要成分补骨脂素和补骨脂素的含量以及得膏率三者综合评分作为考察指标，能更客观的评价试验结果，可使优选出的工艺更可靠，更合理。

3.2各种提取方法所得的中药提取液一般体积较大，一般需进一步分离和精制。药材的水提取药液常用醇沉方法，以除去杂质，从而达到减少服用量，提高药物稳定性的目的。考虑本益。肾壮腰复方制剂最后制备成片剂，载药量小，有待进一步考察纯化工艺，本提取试验为益肾壮腰片的制备奠定基础。