人参养荣汤对血管性痴呆大鼠的神经保护作用
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【关键词】 血管性痴呆;人参养荣汤;神经保护;神经发生;认知障碍
【摘要】 目的 初步探讨人参养荣汤对血管性痴呆的神经保护作用。方法 采用永久性结扎双侧颈总动脉血管性痴呆大鼠模型，从学习记忆、脑梗死面积、海马齿状回新生神经细胞和自由基损伤等方面初步考察人参养荣汤的神经保护作用。结果 与模型组比较，人参养荣汤组认知障碍明显改善，脑梗死面积明显降低，齿状回新生神经细胞明显增加，自由基损伤明显减轻。结论 人参养荣汤对血管性痴呆具有一定的神经保护作用，其内在机制值得深入探讨。
【关键词】 血管性痴呆;人参养荣汤;神经保护;神经发生;认知障碍
人参养荣汤首载于《太平惠民和剂局方》，有益气补血、养心安神等功效。本文观察人参养荣汤对血管性痴呆大鼠认知障碍、神经发生和自由基损伤等方面的影响，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物 wistar雄性大鼠，体重220～260g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证编号scxk(京)2002-2003。
1.2 模型复制、分组与给药 取大鼠30只， 10%水合氯醛麻醉，分离双侧颈总动脉，双重丝线结扎后随即剪断。随机分为模型组和人参养荣汤组，2组动物数基本相当。另取大鼠15只，除不结扎动脉外操作如前，设为假手术组。术后次日，各组动物处置如下：假手术组及模型组给予自来水1ml，人参养荣汤组给予人参养荣汤5g/kg(相当于生药含量，本研究所自煎)，连续4周。
1.3 morris水迷宫 测试前先采用morris水迷宫(中国医学科学院药物研究所)训练6天，以潜伏期(从入水到找到平台所用时间)和游泳距离(从入水到找到平台的总行程)为测试成绩的指标，每天每只大鼠在4个象限共训练4次，每次游泳时间为60s，第7天成绩记做测试成绩。测试于实验结束前1周进行。
1.4 自由基损伤 末次给药后6h，每组取6只大鼠，断头，冰上分离海马，称重，以冷生理盐水制成匀浆液(质量体积比1：9)，低温分离取上清，考马斯亮兰法测定蛋白含量。按说明书测定mda、gsh含量和sod活性。
1.5 神经发生 末次给药前2天，每组取3只大鼠，以50mg/kg brdu腹腔注射2次，每次间隔8h。水合氯醛麻醉，4%多聚甲醛灌注，取脑，置于多聚甲醛后固定过夜，20%蔗糖沉底，选择齿状回部位冠状位冰冻切片，脑片厚30μm，置于磷酸盐缓冲液。常规免疫荧光染色(anti-brdu稀释比1：400，anti-neun稀释比1：500)。摄片并计算brdu/neun阳性细胞数。
1.6 脑梗死范围 末次给药后6h，每组取5～6只大鼠，断头取脑，剔除嗅球、小脑和低位脑干。将大脑连续冠状切成5片。用1% ttc(氯化三苯基四氮唑)染色，37℃避光温孵15min。按切片顺序排列并拍照，计算脑梗死面积。
1.7 统计学处理 所有描述性参数以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析。用spss13.0软件包进行分析，p<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 人参养荣汤对认知障碍的影响 水迷宫测试结果表明，造模后潜伏期和游泳距离均显著延长(p<0.01)，而人参养荣汤可显著使之缩短(p<0.05)，提示其可明显改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力(见表1)。表1 人参养荣汤对认知障碍的影响注：与假手术组比较，p<0.01;与模型组比较，*p<0.05
2.2 人参养荣汤对自由基损伤的影响 造模后，大鼠mda升高，sod、gsh降低;给予人参养荣汤后，动物mda、sod和gsh的不良变化均得以改善(见表2)。表2 人参养荣汤对自由基损伤的影响 注：与假手术组比较，p<0.01;与模型组比较，*p<0.05
2.3 人参养荣汤对神经发生的影响 造模后，大鼠brdu/neun阳性细胞数明显增加;在此基础上，给药组大鼠阳性细胞数进一步显著增加(见图1～3，表3)。表3 人参养荣汤对神经发生的影响注:与假手术组比较，p<0.01;与模型组比较，**p<0.01
2.4 人参养荣汤对脑梗死面积的影响 造模后，大鼠脑梗死面积显著增加;给予人参养荣汤后，大鼠脑梗死面积显著减少(见表4)。表4 人参养荣汤对脑梗死面积的影响 注：与假手术组比较，p<0.01;与模型组比较，**p<0.01
3 讨论
现阶段，缺血性脑血管病患者的临床治疗效果往往难以令人满意，不断探索和寻找新的治疗途径和治疗药物始终是当前国内外神经病学研究的重点内容和社会急需解决的课题[1～5]。缺血性脑损伤后，脑组织由于缺血、缺氧，细胞能量代谢出现障碍，导致海马区局部激素水平、神经递质、神经营养因子等浓度发生改变，进而导致包括海马齿状回神经发生在内的多种神经生物学事件发生。但由于新生神经细胞数量有限，且持续存在的病理生理因素使得大部分新生细胞难以与周围建立联系，最终导致迟发性凋亡，影响神经功能重建。因此，增强脑内源性神经元更替能力成为治疗神经系统疾病的一个研究热点[6～9]。人参养荣汤有益气补血、养心安神等功效，现代医学研究提示其具有抗氧化应激、抗衰老和拮抗脑缺血再灌注等神经保护作用[10～15]，但其对血管性痴呆的作用未见报道。本文研究发现，人参养荣汤可明显改善其认知功能障碍，显著激活神经发生，提示人参养荣汤对大鼠血管性痴呆具有保护作用，值得深入探讨。
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