复方胆通片质量标准的研究
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇复方胆通片质量标准的研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
摘 要：目的建立复方胆通片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别方中的大黄、溪黄草与胆通；用高效液相色谱法测定羟甲香豆素和齐墩果酸的含量。结果薄层色谱法能明显检测出大黄、溪黄草、胆通，薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰；羟甲香豆素进样量在4.92～49.2μg范围内呈良好线性关系(r=0.9997)，平均加样回收率为98.79％；齐墩果酸进样量在0.3～3.0μg范围内呈良好线性关系(r=0，999 3)，平均加样回收率为99.90％。结论所建标准可用于复方胆通片的质量控制。
关键词：复方胆通片；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准
中图分类号：11975+.5 文献标识码：A 文章编号：1672-979X(2010)11-0407-05
复方胆通片由胆通、溪黄草、茵陈、穿心莲、大黄5味药材组成，具有清热利胆、解痉止痛的功效，用于治疗急、慢性胆囊炎，胆管炎，胆囊、胆道结石合并感染等。根据国家药典委员会2005年《国家药品标准提高行动计划中成药品种增加修订项目》的任，在原标准的基础上，增加了大黄、溪黄草、胆通的薄层鉴别，采用HPLC法测定制剂中的有效成分羟甲香豆素和齐墩果酸含量，建立复方胆通片的质量标准。
1 仪器与试剂
戴安高效液相色谱仪(PDA－100二极管阵列检测器，ASI-100自动进样器，P680A四元泵，变色龙色谱软件，Autoscience AXW-5柱温箱)；硅胶G板(10cm×10cm×0.2mm，青岛海洋化工厂)。 溪黄草对照药材(批号121488，200501)、齐墩果酸(批号709－8903)：大黄对照药材(批号902，9404)、大黄素(批号110756－200110)、羟甲香豆素(批号100241，200501)均购于中国药品生物制品检定所；复方胆通片样品(批号080701，080702，080703，080704，080705，080706，080707，080708，080709，080710)：甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2.1 大黄薄层色谱鉴别
复方胆通片除去包衣，研细。取研细后的粉末3g，加乙酸乙酯30mL，于冰浴中超声提取30min，滤过，蒸干滤液，残渣加乙醚20mL溶解，乙醚液用5％碳酸钠萃取2次，每次20mL，合并碱液，加稀盐酸调pH至3.0，再加乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.2g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录VIB)试验。吸取上述供试品溶液3μL、对照药材溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)，甲酸乙酯，甲酸(15:5:1)上层液为展开剂，在冰箱中展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，与对照药材色谱相对应的位置显相同颜色的荧光斑点，在对照品色谱相对应的位置显相同颜色的荧光斑点。1.2.3：胆通片供试品4：大黄对照药材5：大黄素对照品6：大黄阴性对照
图1大黄薄层色谱图
2.2 溪黄草薄层色谱鉴别
本品除去包衣，研细，取研细后的粉末3g，加石油醚(60～90℃)50mL，超声30min，滤过，弃石油醚，晾干残渣，加乙醚20mL，于冰浴中超声30min，滤过，乙醚液加2％氢氧化钠萃取2次，每次15mL，合并碱液，加水饱和正丁醇萃取2次，每次30mL，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加无水乙醇30mL溶解，加盐酸2mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25mL，摇匀，用加水饱和的乙酸乙酯萃取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取溪黄草对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品，加无水乙醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录VIB)试验。吸取上述供试品溶液5μL、对照药材溶液和对照品溶液各3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷，醋酸乙酯(7:3)为展开剂，在冰箱中展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至显色清晰，紫外灯(365mm)下观察。供试品色谱与对照药材色谱相对应的位置显相同颜色的荧光斑点，在对照品色谱相对应的位置显相同颜色的荧光斑点。
2.3 胆通薄层色谱鉴别
本品除去包衣，研细，取研细后的粉末0.5g，加无水乙醇20mL，超声提取10min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。另取羟甲基香豆素对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版《中国药典》一部附录VI B)试验。吸取上述2种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)，乙酸乙酯一丙酮(5:3:1)为展开剂，冰箱中展开，取出，晾干，紫外灯(365mm)下检视。供试品色谱与对照品色谱相对应的位置显相同颜色的荧光斑点。
3 含量测定
3.1 羟甲香豆素含量测定
3.1.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：KROMASIL c18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇，水(50：50)；柱温30℃；检测波长320nm；流速0.8mL／mim理论板数：按羟甲香豆素计算，应不低于3000。色谱图见图4。
3.1.2 检测波长选择 紫外光谱扫描羟甲香豆素对照溶液，在320 nm处有最大光谱吸收，所以选择320nm为检测波长。
3.1.3 溶液制备
3.1.3.1 供试品溶液本品除去包衣，研细，取研细后的粉末0.2g，精密称定，置圆底烧瓶，精密加入无水乙醇30mL，称定重量，摇匀，加热回流30 min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液3mL，加无水乙醇稀释并定容至10mL，即得。
3.1.3.2 对照品溶液精密称取羟甲香豆素对照品适量，加甲醇制成每1mL含9.84mg溶液，即得。
3.1.3.3 阴性对照溶液按处方量比例取除胆通外的处方药材，制备胆通阴性样品。取胆通的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备，得阴性对照溶液。
3.1.4 专属性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照液各5μL，按所定色谱条件进样并记录色谱图。结果表明阴性样品溶液对测定结果无干扰。
3.1.5 线性与线性范围分别量取对照品溶液1，2，4，6，8，10 mL置10mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取5μL依法测定，得羟甲香
豆素峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程y=435.87 X+23.987，r=0.9997，表明羟甲香豆素在进样量4.92～49.2μg范围内呈良好线性关系。
3.1.6 稳定性试验取同一供试品溶液，于8h内每隔0，2，4，6，8h进样检测，依法测定，RSD=0.28％，表明样品在8h内稳定性良好。
3.1.7 重复性试验取批号080701胆通片样品，按供试品溶液制备方法平行操作6份，依法测定，RSD=1.25％，表明该方法重复性良好。
3.1.8 精密度试验 取羟甲香豆素对照品溶液依法测定，连续测定6次，RSD=0.89％，表明仪器精密度良好。
3.1.9 加样回收率试验精密称取批号为080701的样品(含量182.98mg／g)适量，分别精密加入羟甲香豆素对照品溶液(1.184mg／mL)15mL，按供试品溶液制备方法平行操作6份，依法测定，平均回收率98.79％，RSD=1.82％，表明此方法回收率良好。见表1。
3.1.10 样品测定结果 精密称取10批复方胆通片样品，按“3.1.3.1”项方法制备供试品溶液，依法测定。本品每片以羟甲香豆素(C10H803)计，不得少于40mg。结果见表2。
3.2 齐墩果酸含量测定
3.2.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱：KROMASIL c18柱(4，6 mmX250 mm，5μm)；流动相：甲醇一水(90：10)：柱温30℃；检测波长210mm；流速1.0mL／mim理论板数：按齐墩果酸计算应不低于3000。色谱图见图5。
3.2.2 溶液制备
3.2.2.1 供试品溶液制备本品除去包衣，研细，取研细后的粉末3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入无水乙醇20mL，摇匀，功率300w，频率50 kHz超声提取30min，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜滤过，即得。
3.2.2.2 对照品溶液制备精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.3mg的溶液，即得。
3.2.2.3 阴性对照溶液制备按处方量比例取除溪黄草外的处方药材，制备溪黄草阴性样品。取此样品，按供试品溶液的制备方法制备，得阴性对照溶液。
3.2.3 专属性试验分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5μL，按所定色谱条件进样并记录色谱图。结果表明阴性样品溶液对测定结果无干扰。3，2，4线性与线性范围分别量取对照品溶液l，2，4，6，8，10mL置10mL量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μL，依法测定，得齐墩果酸峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=151.5X-3.75，，r=0.9993，表明齐墩果酸在进样量0.3～3.0μg范围内呈良好线性关系。
3.2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，于0，2，4，6，8h进样检测，依法测定，RSD=0.56％，表明样品在8h内稳定性良好。
3.2.6 重复性试验取批号为080703的胆通片样品，按供试品溶液制备方法平行操作6份，依法测定，RSD=0.98％，表明方法重复性良好。
3.2.7 精密度试验取齐墩果酸对照品溶液，依法测定，连续测定6次，RSD=1.02％，表明仪器精密度良好。
3.2.8 加样回收率试验精密称取批号为080703的样品(含量0.3 mg／g)适量，分别精密加入齐墩果酸对照品溶液(0.03 mg／mL)15mL，按供试品溶液制备方法，平行操作6份，依法测定，平均回收率为99.90％，RSD=1.15％，表明方法回收率良好。见表3。
3.2.9 样品测定结果 精密称取10批复方胆通片样品，按“3，2，2，1”项方法制备供试品溶液，进样量10μL，依法测定，本品每片以齐墩果酸(C30H4808)计，不得少于0.08mg。结果见表4。
4 讨论
4.1 根据国家药典委员会2005年《国家药品标准提高行动计划中成药品种增加修订项目》的任务，在原标准的基础上增加了胆通、溪黄草和大黄的薄层鉴别，同时增加了羟甲香豆素和齐墩果酸的含量测定。结果显示提高后的质量标准操作简便、结果准确。
4.2 为了准确测定复方胆通片样品中羟甲香豆素的含量，我们考察了制剂的供试品溶液的制备方法，选择了超声、加热回流、浸渍等方法提取，提取溶剂选择了50％甲醇、甲醇和乙醇。结果表明采用无水乙醇30mL，加热回流30min的方法最佳。经方法学验证，该方法专属性强，空白对照无干扰，能够达到控制复方胆通片质量的目的。
4.3 测定10批样品中药物的含量可见，每片复方胆通片中羟甲香豆素含量介于53.685～56.562mg之间，齐墩果酸含量介于0.096～0.117mg之间。考虑不同厂家所采用药材的产地、采收季节等不同，其主要成分含量也会有差别，所以将药物的限度调整为每片含羟甲香豆素不小于40mg和齐墩果酸不小于0.08 mg。
参考文献
[1]卫生部药品标准[s]，中药成方制剂第5册，1998：111.
[2]王茵，季巧遇，刘耀明，等，通便补气胶囊质量标准的研究[J]，中成药，2005，27(9)：1106-1109.
[3]王世清，心脉通胶囊的薄层色谱研究[J]中国药业，2007，(24)：30.
[4]肖树雄，张幼扬，马丽莎，溪黄草的质量标准研究[J]，中国中药杂志，2000，25(2)：77-80.
[5]沈雪梅，何伟，利尿通淋颗粒的质量标准研究[J]中成药，2006，28(4)：509-513.
[6]张莉・朱晶，复方胆通胶囊中羟甲香豆素的含量及溶出度的测定[J]，中药新药与临床药理，2006， (3)：333-334.
[7]刘昌发，HPLC法测定灵仙跌打片中齐墩果酸的含量[J]中医药导报，2008，14(7)：9I－92