氨基酸的间接原子吸收法测定法研究
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【摘 要】当磷酸铜悬浮液同氨基酸作用，生成溶于水的氨基酸铜络合物，离心沉降未反应的铜盐，以原子吸收法测定上层清液中铜的信号，可间接测定氨基酸的量。通过大量的实验找出测量氨基酸含量的最佳条件，而在最佳测定条件下得出铜离子在8.4μg/ml至58.8μg/ml范围内随浓度增加呈线性关系。
1 氨基酸的概述
氨基酸（amino acids）：生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质。是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连在α-碳上。氨基酸都具有碱性二元氨基一元羧酸，例如赖氨酸（lysine）；酸性一元氨基二元羧酸，例如谷氨酸（Glutamic acid）；中性一元氨基一元羧酸，例如：丙氨酸（Alanine）三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性，呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐，也能与碱结合成盐。
2 间接原子吸收测定方法的建立
利用间接原子吸收法测定氨基酸主要有沉淀反应法、配合反应法、杂多酸反应、氧化还原反应、置换反应、增感或降感反应法等。这里我们主要选择沉淀反应法和配合反应法作为研究方向，利用样品中的被测物与阳离子反应生成一种难溶化合物或者生成配合物，测定溶液中过量或沉淀中的金属离子，从而间接计算被测物含量。原子吸收光谱法的工作原理，是利用空心阴极元素灯光源发生被测元素的特征辐射光，为火焰原子化器产生的样品蒸汽中的待测元素基态原子所吸收。通过测定特征辐射光被吸收的大小来计算出待测元素的含量。
2.1 实验部分
2.1.1 主要仪器和主要试剂
TAS-96型原子吸收分光光度计（北京普析公司电子天平（AL104型梅特勒-托利多仪器上海有限公司生产氨基丙酸；赖氨酸；磷酸氢二钠；乙酸铅；氯化铜；氯化镁；氢氧化钠；硫酸锌；硼砂；无水碳酸钠；以上药品均为分析纯，二次蒸馏水等。
2.1.2 溶液的配制
（1）赖氨酸标准溶液的配制：准确称取分析纯赖氨酸0.5027g移入500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用，得到浓度为1.01 mg/ml的溶液作为赖氨酸标准使用液，使用时稀10倍作为标准适用液。
（2）氨基丙酸标准溶液的配制：准确称取分析纯氨基丙酸0.5038g移入500ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用，得到浓度为0.21 mg/ml的溶液作为氨基丙酸标准使用液，使用时稀释10倍作为标准适用液。
（3） 铜储备液的配制：准确称取分析纯氯化铜0.0525g移入250ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用。（此溶液浓度为0.21mg/ml）
（4）硼砂-碳酸钠缓冲液的配制：称取无水碳酸钠 2.6515g，稀释至500ml，再称取0.9550g稀释至50ml，使用时取碳酸钠溶液487ml，硼砂溶液13.5ml，混匀后即得该缓冲液。
（5）0.10mol/L氢氧化钠的配制：准确称取分析纯NaOH 2.0g溶解后加水稀释到500ml。
（6）0.15mol/L氯化铜溶液：准确称取分析纯 CuCl2 10.1250g溶解后加水稀释到500ml。
（7）0.10mol/L磷酸氢二钠：准确称取分析纯 Na2HPO4 7.1g溶解后加水稀释到500ml。
（8）磷酸铜溶液：取上述氢氧化钠溶液10.00ml与10.00ml Na2HPO4溶液混合后，得到浓度为0.05mol/L的Na3PO4溶液，取上述配置好的0.1mol/L 的CuCl2溶液10.00ml，摇匀移入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用，此溶液浓度为0.5mol/L。
2.1.3 实验方法
准确移取上述配好的浓度为0.5mol/L磷酸铜溶液0.50ml（移之前摇匀）于10mL刻度离心管中，再加入标准氨基酸，充分震荡，混匀，放置10min后，用去离子水稀释至刻度，将其离心5min后，在TAS-986原子吸收分光光度计上进行测定。在恒定条件下吸光度与溶液中金属离子浓度符合比尔定律A=KC，利用这一关系式，配制一系列的标准溶液分别测定其吸光度，绘制工作曲线。
2.2 结果与讨论
2.2.1 仪器最佳条件的测定
根据实验原理，按照一起的测定最佳条件调节一起参数，分别测定铜离子的信号值，基本上每种元素灯的工作情况都是正常的，均有信号输出。
2.2.2 线性范围
为了确定仪器在使用时，在那个范围内线性关系最佳，测得的结果最准确，所以应该对仪器的线性范围进行测定。实验中首先配制成以下浓度范围的标准系列：8.4?g/ml、16.8?g/ml、25.2?g/ml、33.6?g/ml、42.0?g/ml、50.4?g/ml、58.8?g/ml，在选定的仪器的操作条件下，用去离子水调参比，测定相应的吸光度，以铜离子的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标
3结语
本文采用络合反应间接测定赖氨酸和氨基丙酸的含量，主要研究了铜离子与氨基丙酸和赖氨酸之间的络合反应反应，从而间接测定了赖氨酸和氨基丙酸的含量。本文较系统地研究了此方法测定赖氨酸和氨基丙酸含量的实验条件，建立了铜离子间接火焰原子吸收分光光度法测定赖氨酸和氨基丙酸含量的分析方法，在所考察的实验条件下，铜离子与赖氨酸和氨基丙酸定量的发生反应，通过测定溶液中未络合的铜离子的含量可以定量测定赖氨酸和氨基丙酸的含量，此方法可应用于食品样品中氨基酸含量的测定。
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