高效液相色谱法测定肾炎解热片中连翘苷的含量
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作者：方晓明,曹爱民,包永睿
【摘要】 目的 建立肾炎解热片中连翘苷含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以shim-pak clc-ods (4.6 mm×150 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈-0.025 mol/l磷酸水(20∶80)为流动相,流速1 ml/min,检测波长277 nm。结果 连翘苷进样量在0.12～0.5 μg范围内线性关系良好,平均回收率为97.1%(n＝5),rsd＝1.61%。结论 本试验含量测定方法可作为该制剂质量控制方法。
abstract：objective to establish a method for the determination of forsythin in shenyan jiere tablets by hplc. methods the separation was performed on shim-pak clc-ods (4.6 mm×150 mm, 5 μm) with accetonitrile-0.025 mol/l h3po4 (20∶80) as mobile phase. the flow rate was 1 ml/min and uv detector was at 277 nm. results the method had good average recovery with 97.1% (n＝5), rsd＝1.6%, good linear relationship within the range of 0.12～0.5 μg. conclusion the method is accurate, reliable and can be used for quality control of the production.
key words：shenyan jiere tablets；forsythin；hplc；content determination
肾炎解热片由白茅根、连翘等14味中药组成,具有疏解风热、宣肺利水功能,用于急性肺炎的热重寒轻、头面眼睑浮肿等症的治疗。本试验采用高效液相色谱(hplc)法对该制剂连翘中的连翘苷含量加以测定,经方法学考察,方法专属性、精密度、重复性、回收率试验均符合有关规定,为该制剂质量分析建立了可靠的控制方法。
1 仪器与试药
岛津lc-10a液相色谱仪,浙江大学n3000工作站；dl-360超声波仪,360 w,35 khz(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。
连翘苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110842-200403)；肾炎解热片由辽宁桓仁药业提供。甲醇为色谱纯(天津科密欧公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以shim-pak clc-ods(4.6 mm×150 mm,5 μm)为色谱柱；以乙腈-0.025 mol/l磷酸水(20∶80)为流动相,流速1 ml/min；检测波长277 nm。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘苷对照品适量,加甲醇溶解制成每1 ml含40 μg的溶液,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品20片研细,取粉末约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇50 ml,密塞,称定重量,超声处理25 min,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密吸取续滤液25 ml,蒸至近干,用中性氧化铝2 g拌匀,加于中性氧化铝柱(100～120目,5 g,内径1～1.5 cm)上,用70%乙醇100 ml洗脱。收集洗脱液,浓缩至近干,残渣用甲醇20 ml溶解后转移至25 ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。
2.4 阴性样品溶液的制备
按处方去除连翘,其他药味不变,按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。
2.5 方法专属性考察
精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl,注入液相色谱仪中。测定结果提示,供试品具有与对照品相同保留时间色谱峰,阴性样品无干扰,方法专属性良好。见图1。
2.6 线性范围考察
精密吸取连翘苷对照品溶液(0.040 82 mg/ml)2、4、6、8、10 μl,注入液相色谱仪中。测定结果经回归处理,y＝
1 514 338.03x＋3 350.79,r＝0.999 4。结果提示：连翘苷进样后在0.08～0.4 μg范围内线性关系良好。
2.7 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μl,按前述色谱条件进样分析,测定时间为0、2、4、6、8 h,结果供试品溶液在8 h内稳定。色谱峰面积无明显变化,在此时间内,待测组分化学性质稳定。
2.8 精密度试验
精密吸取对照品溶液(0.040 82 mg/ml)10 μl,按前述色谱条件进样5次,结果提示,色谱峰面积rsd＝1.6%,符合有关规定,表明仪器精密度良好。
2.9 重复性试验
取同一批次样品5份,每份0.5 g,精密称定,按供试品溶液制备方法操作。分别吸取10 μl进样分析。测定结果显示,本品每片含连翘苷0.482 mg(n＝5)。
2.10 加样回收率试验
取已知含量样品(0.482 mg/片,片重0.3 g)5份,每份0.25 g,精密称定,精密加连翘苷对照品溶液(0.040 82 mg/ml)10 ml,其他按供试品溶液制备方法操作。测定结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.11 样品测定
按已确定方法测定3批样品,结果见表2。表2 样品中连翘苷含量测定结果(略)
3 讨论
在供试品溶液制备方法考察中,参考文献[1-2],曾先后采用超声处理法、回流法,鉴于本制剂为中药复方制剂,干扰组分多,经试验,采用甲醇超声处理,经中性氧化铝净化,去除了部分干扰组分,在确立条件下,供试品中测试组分与相邻组分分离度良好。本试验先后采用甲醇-水(30∶70)、乙腈-0.025 mol/l磷酸水(20∶80)为流动相,在后者条件下,连翘苷色谱峰对称,与相邻组分分离度良好。
【参考文献】
[1] 陈 勇,朱炳辉,方继辉.rp-hplc测定双黄连口服液中连翘苷含量[j].中成药,2002,24(10)：761－764.
[2] 张国刚,徐绥绪.高效液相色谱法测定抗病毒口服液中连翘甙的含量[j].中草药,1998,29(3)：162－163.