白及种子无菌繁殖微型种茎初探
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摘要：种子；繁殖；微型种茎
中图分类号：S567.23；Q945.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4708-02
白及为兰科植物白及[Bletilla striata （Thunb. ex A. Murray）Rchb.f.]的干燥块茎， 又名白芨、连及草等，分布于亚洲的缅甸北部经中国至日本，在我国北起河南、江苏至台湾，东起浙江至东南部均有分布。白及药用历史悠久，性微寒、味苦、甘，具有补肺、止血、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮等功效，主要用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、肺伤咳血、衄血、金疮出血、 痈疽肿毒、溃疡疼痛、汤火灼伤、手足皴裂等[1]，是我国民间的传统中药，1977年以后被各版《中国药典》收载。
近年来，由于人为的过度采挖和天然生境的破坏，白及野生自然资源急剧减少，濒临灭绝，被列为国家重点保护的野生药用植物之一。白及种子较小，自然条件下需与真菌共生才能萌发，实生苗的栽培较为困难，而传统分株、切块等无性繁殖的方式成活率极低，不能满足大规模生产的需要。白及组织培养和种子繁殖技术研究虽然有不少人涉及[2-5]，但基本上采用先培育成幼苗再移栽到田间的技术路线，由于白及组培苗离开培养环境后栽培成活困难，限制了其在生产上的应用。试验就白及种子无菌繁殖微型种茎进行了研究，旨在为白及种植提供种源，以期实现规模化的人工种植，摆脱对野生资源的过度依赖。
1 材料与方法
1.1 材料
2011年10月17日在建始县颐泰生物科技有限公司红岩寺镇白及基地，采摘自然授粉结实的、饱满未开裂的白及蒴果做试验材料。
MS系列培养基购自青岛海博生物技术有限公司，KC系列培养基购自上海丽臣商贸有限公司。
1.2 方法
1.2.1 种子消毒与接种 蒴果采摘后于2011年10月19日进行处理。先用洗衣粉漂洗20 min，后置于2%的升汞溶液中消毒20 min，再用无菌水冲洗5次，然后接种。
接种时十字状切开果实，将白色粉末状种子弹到经灭菌的滤纸上，然后适量接种到培养基上。每个蒴果接种4～5个三角瓶，每种萌发培养基接种50瓶，作为批量观察。白及有胚种子才能保证发芽，所以用接种针在解剖镜下选择有胚的种子接种到三角瓶上，每种接4瓶，每瓶100粒左右有胚种子。
1.2.3
2 结果与分析
2.1 白及有胚种子在5种萌发培养基上的萌况
白及种子接种10 d后，5种萌发培养基上均可见种子呈淡绿色，20 d后可见萌芽点，30 d后可见小苗。5种培养基上均长出了小苗，发芽率见表1。从表1可以看出，以萌发培养基②发芽率最高；从长势来看，也是萌发培养基②小苗长势最好。
2.2 白及幼苗在3种生根培养基上的生根情况
由表2可知，生根培养基②上的白及幼苗生根苗数达到97株，生根率达到97%，根数为2～3条/株，最长根长为2.5 cm，远高于培养基①和培养基③。由此可以得出，白及种苗在生根培养基②上各项指标最高。
2.3 白及种苗在不同种茎培养基上的种茎生长情况
在种茎培养基中培养150 d后，由表3可以看出，①号培养基中，平均每粒白及种子可以长出2.5个苗，而②号培养基平均可以长出2.8个苗，显然②号培养基出苗率比①号培养基好；②号培养基的最大叶片长为3.8 cm，比①号多0.8 cm；②号培养基根数为6条/株，而①号培养基仅为4条/株。
继续生长至2012年7月10日观察，生长在1/2 MS培养基上的植株已全部倒苗，原球茎和根系仍保持活力；而生长在MS培养基上的植株才部分出现发黄的现象。至2012年8月20日，生长在MS培养基上的植株才绝大部分倒苗，但原球茎和根系仍保持活力。
3 小结
白及药用价值很高，资源十分匮乏。成熟的白及种子虽然在自然条件下几乎不能发芽，但具有大规模利用的可能。
试验结果表明，采用白及种子在KC+200 g/L马铃薯的培养基上萌发，并培育一段时间；再将小苗转接到1/2 MS+0.2 mg/L NAA生根培养基上，诱导生根；然后转移到MS培养基上进行原球茎的培育，能保证全部实生苗都形成原球茎（微型种茎），再利用原球茎（微型种茎）很容易繁殖白及种苗，克服了一般组培苗移栽成活率低的困难，为利用白及种子进行种茎规模化生产提出了一条可行的技术路线。
参考文献：
[1] 廖朝林，由金文.湖北恩施药用植物栽培技术[M].武汉：湖北科学技术出版社，2006.
[2] 李 嵘，王喆之.白及的研究概述及其资源利用对策[J].中草药，2006，37（11）：1751-1755.
[3] 罗文秀，张寿文，李晓婷，等.白及快速繁殖的研究概况[J]. 中国现代中药，2007，9（11）：36-38.
[4] 付志惠，张建霞，李洪林，等.白及种子萌发与快速繁殖技术的研究[J]. 武汉植物学研究，2006，24（1）：80-82.
[5] 叶 静，郑晓君，管常东，等.白及的无菌萌发与组织培养[J].云南大学学报（自然科学版），2010，32（增刊）：422-425.