柿叶总黄酮提取工艺探究论文

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1仪器与试药

1．1仪器UV－2201紫外可见分光光度计（Shimadzu）；倾斜式高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；PB203－N电子精密天平（MettlerToledo仪器上海有限公司）；AJ150L电子精密天平（MettlerinSwitzerland）。

1．2试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿DiospyrosKakiL．f．；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：080－9303）；AlCl3·6H2O等均为分析纯。

2方法与结果

2．1因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间3种因素进行考察，每种因素分为3个水平，结果见表1。

2.2供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g共9份，按照表2L9（34）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至100ml或200ml量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（0．45μm），作为供试品溶液。

表1正交设计因素水平（略）

表2L9（34）正交实验设计及结果分析（略）

2.3对照品溶液的制备精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品0．0825g于100ml量瓶中，70％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液0．825mg·ml－1。

2.4显色试剂及测定波长的选择Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色法［4］：精密吸取芦丁标准液0．5ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至25ml量瓶中，分别加入5％NaNO21．0ml，放置6min，然后加入10％Al（NO3）31．0ml，混匀，放置6min，再加入4．3％NaOH10ml，用70％乙醇定容至刻度，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。

AlCl3显色法［5］：精密吸取芦丁标准液0．1ml和供试液1＃、4＃、7＃各适量至10ml量瓶中，分别加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min。在190～700nm范围内扫描测定吸收光谱。

比较上述两种显色法，用Al（NO3）3－NaNO2－NaOH显色后，明显生成红色絮状沉淀，此法不宜采用；而AlCl3显色后，芦丁标准液的λmax＝410nm，3个样品溶液的λmax＝400～410nm，故选择AlCl3显色后410nm测定吸光度。

2.5显色稳定性考察精密吸取芦丁标准液0．3ml和供试液4＃1．0ml，依法显色后放置不同时间，测定吸光度，结果见表3，吸光度RSD分别为0．2％和0．3％，可见芦丁标准液和供试液4＃显色后4h内基本稳定。

2.6线性关系考察取芦丁标准液1．0ml置25ml容量瓶中，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，分别取1．0，2．0，2．5，3．0，3．5，4．0ml置10ml量瓶中，加入0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，结果见表4。线性回归得标准曲线：A＝5．6×10－3C＋5．7×10－3，R＝0．9999，线性范围为33．0～132．0μg／ml。

2.7样品测定分别取9份供试品溶液适量至10ml量瓶中，加0．1mol／LAlCl3·6H2O1．0ml，用50％乙醇定容至刻度，摇匀，40min后于410nm处测定吸光度A值，换算为总黄酮含量（mg·g－1），如表2所示，极差分析得最佳提取工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。

表3显色稳定性考察（略）

表4芦丁标准曲线的制作（略）

2.8验证实验精密称取柿叶最粗粉（10～22目之间）1g5份，置于100ml锥形瓶中，按照A2B2C3条件提取，合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至200ml量瓶中，80％乙醇定容至刻度，过微孔滤膜，测定样品中总黄酮的含量，结果见表5，其平均值为101．821mg·g－1，RSD＝2．1％，表明此条件重复性良好。

表5验证实验结果（略）

3结论与讨论

3.1结论柿叶乙醇提取最佳工艺为A2B2C3，即80％乙醇，25倍量，提取4次（2，1．5，1．5，1h）。经验证样品中总黄酮平均含量为101．821mg·g－1（RSD＝2．1％），表明正交实验结果可靠。

3.2讨论

3.2.1预实验采用同一方法测定柿叶水提物和乙醇提取物中总黄酮含量，结果前者显著低于后者，根据参考文献及上述预实验结果，采用乙醇作为提取溶剂。

3.2.2AlCl3显色方法与参考文献比较未采用70℃水浴，因为实际测定两者差异不大，不采用水浴可以减少测定步骤，减小误差。

3.2.3预实验采用22～48目柿叶粉回流提取，发现有爆沸现象，改为最粗粉10～22目。

【参考文献】

［1］郭玫，董晓萍，徐文萍．柿叶的研究概况［J］．甘肃中医学院学报，2000，17（增）：78．

［2］谭仁祥．植物成分分析［M］．北京：科学出版社，2002：486．

［3］贝伟剑，彭文烈，罗杰．柿叶黄酮的大孔树脂分离提纯富集［J］．中成药，2005，27（3）：257．

［4］高梦祥，赵喜红．柿叶黄酮类物质的提取工艺研究［J］．陕西农业科学，2005（3）：41．

［5］刘斌，石任兵，周素蓉．苦参汤有效部位总黄酮含量测定方法研究［J］．中国实验方剂学杂志，2004，10（6）：24．

【摘要】目的对柿叶中总黄酮的提取工艺进行优选。方法采用正交实验法，以总黄酮含量（mg·g－1）为指标，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间3种因素进行了研究。结果将柿叶最粗粉用25倍80％乙醇提取4次，可以获得较高的提取率。结论此工艺有效成分提取率较高，重现性好，稳定可行。

【关键词】柿叶总黄酮正交实验提取工艺