铁炮百合组织培养关键技术研究

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摘 要：以铁炮百合植株为材料，研究选取不同部位的外植体、不同培养基配方对外植体愈伤诱导率、增殖率以及生根率的影响。结果表明：以鳞片做外植体效果最好，培养15d后污染率只有16%；诱导、分化和增殖效果最好的培养基是MS+NAA 0.1 mg/L +6-BA 0.5 mg/L，愈伤组织诱导率为100%，分化率为72%，增殖率为336%；生根效果最好的培养基是3/4MS+NAA 0.8 mg/L+糖6%，平均生根17条，平均根长3.1cm，生根率91%。

关键词：铁炮百合；组织培养；增殖；生根

铁炮百合是百合科百合属多年生草本植物，靠鳞茎宿存，是一种集观赏、食用、药用于一体的花卉。其繁殖方法为分殖小鳞茎等无性繁殖，但年增殖率极低，数量有限。同时因长期无性繁殖，病毒积累而严重影响品质[1-3]。本文以铁炮百合的营养器官为外植体，进行组织培养快速繁殖的研究，以期能够解决铁炮百合因长期无性繁殖后代品质变劣、分球繁殖受材料限制等问题，为优良品种脱毒复壮、提高繁殖系数和大规模生产种苗提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料

采用铁炮百合茎段、叶片和鳞片做外植体。

1.2 方法

1.2.1 培养基。以MS为基本培养基，添加不同浓度组合的植物生长调节剂诱导，培养基中均加入琼脂8g/L，蔗糖30g/L，pH值为5.8～6.0，培养温度23～26℃，每天光照14h，光照强度1500～2000Lx。

诱导、分化培养基为：① MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1mg/L；② MS+NAA 0.1mg/L +6-BA 0.5mg/L；③MS+NAA 0.3mg/L +6-BA 2mg/L。

增殖培养基为：④ MS+NAA 0.1mg/L +6-BA 1mg/L；⑤ MS+NAA 0.1mg/L +6-BA 0.5mg/L；⑥ MS+NAA 0.3mg/L +6-BA 2mg/L。

生根培养基为：⑦ 1/4MS+NAA 0.8mg/L+糖6%；⑧ 1/2MS+NAA 0.8 mg/L+糖6%；⑨ 3/4MS+NAA 0.8mg/L+糖6%；⑩ MS+NAA 0.8mg/L+糖6%。

1.2.2 材料处理与接种。选取健康、洁净、开花性状良好的母株，以茎段、叶片、鳞片为试材。将采来的外植体先用0.3%的洗衣粉水浸泡8～10min，再用流水冲洗1～2h，然后在超净工作台内用75%酒精浸泡30s，再用0.1%的升汞灭菌8～12 min，最后用无菌水冲洗6～8次。冲洗完毕后，将茎切成1cm长的茎段，叶片和鳞片切成长宽各1cm的小方块，迅速接种于诱导培养基中。诱导出愈伤组织后，将愈伤组织切割下来转入分化增殖培养基中，促进分化成丛生芽。当芽高2cm时，可切下来转入生根培养基中进行培养。

2 结果与分析

2.1 不同外植体灭菌效果的筛选

对铁炮百合茎段、叶片、鳞片用1.2.2的同样方法进行灭菌，接种于培养基上，15d后检查效果。从表1可以看出，茎段、叶片、鳞片的污染率不同，鳞片灭菌效果最好，污染率只有16%，远低于叶片和茎段的污染。主要是由于相对于叶片和茎段，所取的鳞片受到保护，与外部环境基本不接触，受到损伤和感染的几率很低，因此灭菌效果最好。

2.2 铁炮百合初代培养基的筛选

以铁炮百合鳞片为外植体，分别接种于①、②和③号培养基上，30d统计诱导愈伤诱导率和分化率。从表2说明，初代培养基配方不同，对鳞片诱导出愈伤组织及分化效果不一样。①号、②号和③号培养基对铁炮百合的愈伤组织诱导率分别为92%、100%和90%，分化率分别为39%、72%和42%，所以对铁炮百合鳞片愈伤组织诱导和分化效果最好的是②号培养基。

2.3 铁炮百合增殖培养基的筛选

以铁炮百合分化出的芽，分别接种于④号、⑤号和⑥号增殖培养基上，30d后统计增殖率。从表3看出，不定芽接种30d后，大多数芽周围均可分化出新的单芽或形成丛生芽，其增殖系数随培养基的不同而不同。3种增殖培养基中，以⑤号的增殖率最高，④号次之，⑥号最低。

2.4 铁炮百合生根培养基的筛选

取长势健壮的不定芽，分别接入⑦号、⑧号、⑨号和⑩号生根培养基上，30d统计生根率。由表4可见，⑨培养基生根效果最好，平均根数17条，平均根长3.1cm，生根率达到91%；其次是⑦号培养基，生根率达到86%；⑩号培养基，生根率为80%；⑧号培养基效果较差，生根率为78%。

3 结论

（1）通过试验可知，铁炮百合组织培养最适宜的外植体是鳞片，容易灭菌，且污染率低。

（2）铁炮百合组织培养愈伤组织诱导和分化效果最好的培养基是：作为初代培养和增殖培养的培养基MS+NAA 0.1mg/L +6-BA 0.5mg/L，愈伤组织诱导率为100%，分化率为72%。

（3）铁炮百合组织培养不定芽增殖效果最好的培养基也是MS+NAA 0.1mg/L +6-BA 0.5mg/L，增殖率为336%。

（4）铁炮百合组织培养生根效果最好的培养基是3/4MS+NAA 0.8mg/L+糖6%，平均生根数17条，平均根长3.1cm，生根率91%。（收稿：2012-05-03）

参考文献：

[1] 程爱芳.百合(Lilium spp)的组培快速繁殖技术研究.武汉生物工程学院学报,2006,2(1):27-29

[2] 马惠，郭扶兴，周俊彦等.百合叶片愈伤组织的诱导和植株再生.植物生理学通讯,1992,28(9):284一287

[3] 姚绍嫦，艾素云，杨美纯，铁炮百合组培中不定芽形成的细胞学观察。亚热带植物科学，2005,34(2):5-7.