马铃薯茎尖脱毒的方法

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马铃薯茎尖脱毒的方法，在具体操作上各单位尚不完全一致，现介绍其主要的程序和方法。

一、切取茎尖

从大田直接切取10~15厘米长的茎尖，或选取块茎彻底冲洗后播在装有消毒泥砂的生长箱中，用32℃催芽。当块茎出芽长约30厘米时，切取带顶芽或侧芽的茎段约10~15厘米备用。

二、茎尖消毒

茎尖先用自来水冲洗干净后，用70%的酒精浸2分钟。再用5%次氯酸钙滤液浸泡20分钟，然后用蒸馏水冲洗3次。

三、培养基

马铃薯茎尖分生组织的培养基，一般均采用MS培养基的基本配方，而在添加剂上作不同的调整。MS培养基的配方如表11-2。据试验，在MS培养基的基础上添加剂调整为加吲哚乙酸0.5毫克/升和6-苄基嘌呤2毫克/升的存活率高达81.7%，优于同比例高浓度的处理。又据试验，添加6-苄基嘌呤0.5毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升，再加赤霉素1毫克/升的比例适合马铃薯茎尖培养；添加6-苄基嘌呤0.1-0.3毫克/升和吲哚乙酸0.1毫克/升适合发根培养。同时证明浓度不能过大，否则茎尖分生组织生长过旺，大量形成愈伤组织，影响芽的分化。

茎尖发芽生根后仍用MS培养基全量进行单节繁殖和增代培养。

四、培养条件

经过消毒的茎尖，在超净工作台上的解剖镜下剥离，并切取0.3毫米左右，接种在培养基上。茎尖越大，越易成活，脱毒效果越差。反之，成活困难，脱毒效果好。接种后培养室的温度一般为30℃左右。也有采取白天温度29℃，晚上温度24℃变温培养的。光照强度接种后前半月为1000~2000勒克司，后半月为3000~5000勒克司。光周期10~16小时，一般为12小时。培养室的相对湿度为50~85%。茎尖苗可以在试管内连续进行无菌培养繁殖，待自然温度适合马铃薯生长后，将试管移出室外，揭开瓶塞进行炼苗。然后移入消毒营养土中栽植，避免日光直射。幼苗用纱布覆盖，以保持较高湿度和防止传毒媒介，以后再移入网室继续育苗，并移栽产生无毒种薯。

五、脱毒苗的检验

脱毒苗较带毒苗均有不同程度的增产，但尚不能据以确认其为无毒苗。一般以巴西牵牛（Ipomoea setosa）、裂叶牵牛（I.nil）作指示植物进行测定。据国际热带农业研究所的经验，将3~5厘米高的试管苗移至颗粒泥碳中，保持在湿度较高的玻璃箱内炼苗1周，然后栽入口径15厘米，装消毒土壤的小缽中，移入防虫隔离室。1~2月后，将其嫁接于隔离生长的巴西牵牛实生苗上，观察跕木的症状发展。当接穗带毒时，跕木在嫁接后12~21天内表现出叶脉退绿、条斑、皱缩等不同症状，生长发育受阻。再将跕木无症状的马铃薯茎尖，继续与巴西牵牛嫁接，连续3次均未表现症状的，再用电子显微镜检查有无病毒颗粒子。如仍表现无毒时，即可在培养基上进行单节繁殖。这种无病毒的马铃薯苗既可作良种繁育的原原种，又可作为国际交换的种质资源。

作者姓名：赵拉梅（1971。12），女，山西省太原市古交市人，学历：大专，农业广播学校，农技推广专业，职称：助理农艺师，研究方向：农业技术推广。