水菖蒲倍半萜类成分的研究

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[摘要] 研究湖南产水菖蒲化学成分及其体外抑菌活性。利用多种色谱技术分离水菖蒲化学成分，结合理化和波谱数据鉴定化合物的结构，并采用96孔板法测定化合物的体外抑菌活性。水菖蒲中分离得到11个倍半萜类化合物，经波谱分析鉴定为4β， 6β-dihydroxy-1α， 5β（H）-guai-9-ene（1），4β， 6β-dihydroxy-1α， 5β（H）-guai-10（14）-ene（2），teuclatriol（3），异菖蒲二醇（4），菖蒲二醇（5），calamusin H（6），oxyphyllenodiols A（7），oplodiol（8），菠萝香藤素（9），表水菖蒲酮（10）和bullatantriol（11），其中，化合物9为首次从菖蒲属植物中分离得到。体外抑菌实验表明，化合物3，7～9和11具有显著地抑菌活性，化合物7对金黄色葡萄球菌（MBC 12.50 mg・L-1）、化合物9对4种供试菌（MBC 20.00 mg・L-1）、化合物11对绿脓杆菌（MBC 12.50 mg・L-1）均具有良好的杀菌作用。

[关键词]水菖蒲； 倍半萜； 抑菌

[Abstract] To study the chemical constituents and antimicrobial activity of Acori Calami Rhizoma. Components were isolated through various chromatographic methods and identified by spectroscopic data. The agar dilution method was adopted to analyze antimicrobial activity of the compounds in vitro.Eleven sesquiterpenoids were isolated， and indentified as 4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-9-ene（1），4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-10（14）-ene（2）， teuclatriol（3）， isocalamendiol（4）， calamendiol（5）， calamusin H（6）， oxyphyllenodiols A（7）， oplodiol（8）， ananosmin（9）， epishyobunone（10）， and bullatantriol（11）. Compound 9 was isolated from genus Acorus for the first time. Compounds 3， 7-9， and 11 had significantly antimicrobial activity. There were good sterilizing effects that the MBC of compound 9 to the four tested strains were 20.00 mg・L-1， and compound 11 to Pseudomonas aeruginosa was 12.50 mg・L-1.

[Key words] Acori Calami Rhizoma； sesquiterpenoids； antimicrobial activity

doi：10.4268/cjcmm20161123

水菖蒲为天南星科菖蒲属植物菖蒲Acorus calamus L.的根茎，为我国临床常用中药，具有化痰开窍，除湿健脾，杀虫止痒之功效。用于治疗痰厥昏迷，中风，癫痫，惊悸健忘，耳鸣耳聋，食积腹痛，痢疾泄泻，风湿疼痛，湿疹，疥疮[1]。近2年研究报道，水菖蒲挥发油及其主要成分菖蒲酮和异菖蒲酮对烟草甲和赤拟谷盗，具有显著的杀灭作用[2]。水菖蒲能够改善束缚应激小鼠的认知功能和调节其脑组织中钠钾ATP酶通道活性和TBARS水平恢复到正常水平[3]。水菖蒲乙酸乙酯部位可通过激活Wnt信号通路增加胰高血糖素和激素原转换酶3基因的表达，也可通过提高GLP-1分泌，发挥降血糖作用[4]。水菖蒲醇提物可促进伤口愈合[5]，其水提物能显著的抑制RAW 264.7细胞中脂多糖诱导的炎症介质的mRNA表达[6]。

除上述报道，水菖蒲在抑（杀）菌、杀虫方面，表现出显著的活性。在民间，就有端午节挂菖蒲、薰艾叶、佩带香囊袋、洗菖蒲浴等以避除秽恶之气、防病祛疫，同时，课题组前期发现湖南产水菖蒲挥发油、乙醇提取物和不同萃取部位具有显著的抑菌活性[7-8]。课题组将抑菌活性跟踪与成分分离相结合，继续对其抑菌活性部位进行研究，并从水菖蒲抑菌活性部位分离得到11个倍半萜类成分，分别鉴定为3个guaiane型：4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-9-ene（1），4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-10（14）-ene（2）和teuclatriol（3）；4个cadinane型：异菖蒲二醇（4），菖蒲二醇（5），calamusin H（6），oxyphyllenodiols A（7）；2个eudesmane型：oplodiol（8）和菠萝香藤素（9）；1个elemane型：表水菖蒲酮（10）；1个oppositane型：bullatantriol（11），并采用96孔板法测定11个化合物体外抑（杀）菌活性。

1 材料

INOVA-400核磁共振仪（美国Varian公司），Agilent DD2-500核磁共振仪（美国Santa Clara， CA），HR-ESI-TOF-MS光谱仪（Agilent Series 1100 SL， ESI source Model G1969A， Agilent Technologies， Palo Alto， CA， USA），Agilent 6890N-5975N质谱仪（美国安捷伦科技有限公司），GCMSQP2010 型气相色谱-质谱联用仪（日本岛津公司），Rudolph Research AutoPol IV 旋光仪，Bruker Tensor 27和MIRacle ATR FT-IR 光谱仪（Bruker Optics），Hewlett-Packard 8452A紫外可见分光光度仪，SW-CJ-1B型超净工作台（苏州净化设备有限公司），WAC-47全自动高压灭菌锅（北京勤业永为科技有限公司），303S-0型电热恒温培养箱（上海康路仪器设备有限公司）。

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus（ATCC25923），大肠埃希菌Escherichia coli（ATCC25922），绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa（ATCC27853），白假丝酵母菌Monilia albicans（ATCC10231），均购于南京便诊生物科技有限公司，湖南中医药大学医学院病原免疫学实验室保存。普通营养琼脂（肉汤）培养基（杭州微生物试剂有限公司），无菌96孔板（NEST），ODS（60～80 μm）（日本YMC公司），Sephadex LH-20（GE Healthcare Bio-Sciences AB， Uppsala， Sweden），薄层色谱和柱色谱硅胶均为青岛海洋化工集团公司产品，所用试剂石油醚（60～90 ℃）、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和甲醇等均为分析纯。

于2011年12月采自湖南省浏阳大围山，经湖南中医药大学刘塔斯教授鉴定为天南星科植物水菖蒲A. calamus，凭证标本（序号20111211）保存在湖南中医药大学中药活性物质筛选工程技术研究中心。将采收的水菖蒲洗净去泥砂，取根茎，阴干，备用。

2 提取与分离

水菖蒲（10 kg）粉碎成粗粉，加95%乙醇浸提4次，每次24 h，合并提取液，45 ℃减压浓缩，得乙醇提取物（浸膏重1.1 kg）。将乙醇提取物加蒸馏水1 L使悬浮，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取（0.8 L×5次），得石油醚部分（浸膏重618.6 g）、三氯甲烷部分（58.9 g）、乙酸乙酯部分（5.2 g）和正丁醇部分（16.0 g）。石油醚部分经硅胶柱色谱，以石油醚-乙酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脱，得片段Fr.1～6，Fr. 1（225.5 g）依次经硅胶柱色谱和Sephadex LH-20柱，分离得到化合物10（5.0 mg）；Fr.3（115.0 g）经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（40∶1～0∶1）梯度洗脱，分得5个亚流分（Fr.3-1～ Fr.3-5），Fr.3-3经ODS柱色谱，甲醇-水（3∶10～0∶1）梯度洗脱，得化合物1（60 mg），2（40 mg），4（1.8 g）和5（1.8 g）；Fr.4（13.5 g）经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脱，得化合物3（30 mg）。三氯甲烷部分经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（50∶1～0∶1）梯度洗脱，得片段Fr.1～6，Fr.2（13.1 g）经硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（20∶1）洗脱，得到化合物6（7.0 mg）和8（25 mg）；Fr.3（14.0 g）硅胶柱色谱，以石油醚-丙酮（20∶1～5∶1）梯度洗脱，分得2个亚流分（Fr.3-1和Fr.3-2），Fr.3-1经ODS柱色谱，甲醇-水（3∶10～0∶1）梯度洗脱，得化合物7（45 mg）和9（30 mg）；Fr.4（9.0 g）经Sephadex LH-20[石油醚（60～90 ℃）-三氯甲烷-甲醇（4∶5∶1）]分离，得化合物11（30 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 无色针状结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显紫红色斑点。ESI-MSm/z261[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：5.49（1H， m， H-9），4.05（1H， m， H-6），2.36（1H， dd，J=14.5，5.4 Hz， H-1），2.28（1H， m， H-8a），2.03（1H， dd，J=11.7，9.8 Hz， H-5），1.84（1H， m， H-2a），1.80（1H， dd，J=10.6，5.8 Hz， H-8b），1.74（1H， m， H-3a），1.70（1H， m， H-2b），1.68（3H， br s， H-14），1.64（1H， m， H-11），1.58（1H， m， H-3b），1.33（3H， s， H-15），1.29（1H， td，J=9.4，3.9 Hz， H-7），1.01（3H， d，J=6.6 Hz， H-12），0.94（3H， d，J=6.6 Hz， H-13）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：140.5（C-10），127.2（C-9），81.8（C-4），73.5（C-6），59.6（C-5），51.5（C-7），44.7（C-1），41.4（C-3），29.8（C-11），28.4（C-2），25.5（C-8），24.6（C-15），23.3（C-14），21.9（C-12），21.7（C-13）。在NOESY谱中，H-1与H-6/H-7，H-6与H-15的相关信号，确定H-1，H-6，H-7和H-15为相同构型。以上数据对比文献报道[9]，确定该化合物为4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-9-ene。

化合物2 无色结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显紫红色斑点。ESI-MSm/z261[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD， 500 MHz）δ：4.76（1H， s， H-14a），4.71（1H， s， H-14b），4.04（1H， dd，J=8.9， 3.5 Hz， H-6），2.57（1H， m， H-9a），2.32（1H， td，J=14.7， 6.8 Hz， H-1），2.13（1H， dt，J=14.3， 7.3 Hz， H-9b），1.83（1H， dd，J=7.8， 2.9 Hz， H-5），1.80（2H， m， H-2a， H-3a），1.71（1H， m， H-11），1.68（1H， dd，J=5.0， 2.1 Hz， H-2b），1.64（2H， m， H-3b， 8a），1.57（1H， dt，J=13.0， 6.6 Hz， H-8b），1.29（3H， s， H-15），1.25（1H， m， H-7），1.01（3H， d， J=6.5 Hz， H-12），0.96（3H， d，J=6.5 Hz， H-13）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：154.2（C-10），108.1（C-14），81.6（C-4），73.2（C-6），61.4（C-5），50.1（C-7），44.8（C-1），41.6（C-3），37.6（C-9），30.5（C-11），28.1（C-2），24.7（C-8），24.2（C-15），22.1（C-12），21.9（C-13）。在NOESY谱中，H-1与H-6/H-7/H-15的相关信号，确定H-1，H-6，H-7和H-15为相同构型。以上数据对比文献报道[10-11]，确定该化合物为4β，6β-dihydroxy-1α，5β（H）-guai-10（14）-ene。

化合物3 无色油状物。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5% 硫酸乙醇显紫红色斑点。ESI-MSm/z255[M - H]-。1H-NMR（CD3OD， 400 MHz）δ：4.08（1H， dd，J=7.9， 4.0 Hz， H-6），1.24（3H， s， H-15），1.21（3H， s， H-14），1.08（1H， m， H-1）， 1.01（3H， d，J=6.6 Hz， H-12），0.97（3H， d，J=6.6 Hz， H-13）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ：81.9（C-4），76.1（C-10），72.1（C-6），56.9（C-5），53.1（C-1），48.6（C-9），47.5（C-7），41.7（C-3），31.1（C-11），24.1（C-2），21.9（C-14）21.8（C-12），21.7（C-13），23.3（C-15），21.5（C-8）。以上数据对比文献报道[10-11]，确定该化合物为teuclatriol。

化合物4 无色油状物，有浓郁的香味。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显色剂显绿色。ESI-MSm/z237[M - H]-。1H-NMR（CDCl3， 500 MHz）δ：4.85（1H， br s， H-15a），4.73（1H，br s， H-15b），2.51（1H， m， H-5a），2.38（1H， m， H-1a），2.10（1H， m， H-11），1.99（2H， m， H-3b， 5b），1.95（1H，t，J=2.1 Hz，H-1a），1.85（1H，dt，J=12.0， 3.1 Hz， H-9a），1.52（2H， m， H-8），1.44（1H，m， H-9b），1.38（1H， m，H-1），1.32（1H， m， H-1b），1.21（3H， s， H-14），1.13（1H， m， H-7），0.93（3H， d，J=6.9 Hz， H-13），0.90（3H， d，J=6.9 Hz， H-12）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：146.3（C-4），111.8（C-15），75.2（C-6），72.8（C-10），54.4（C-1），51.7（C-7），47.2（C-5），43.3（C-9），34.9（C-3），25.5（C-11），24.2（C-13），23.4（C-14），23.1（C-2），19.7（C-8），18.6（C-12）。以上数据对比文献报道[12-13]，确定该化合物为异菖蒲二醇（isocalamendiol）。

化合物5 白色结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显色剂显绿色。ESI-MSm/z237[M-H]-。1H-NMR（CD3OD， 500 MHz）δ：4.74（1H， s， H-15a），4.66（1H，s， H-15b），2.58（1H， dd，J=13.8，1.8 Hz， H-5a），2.39（1H，m， H-3a），2.16（1H， m， H-11），2.02（1H， m， H-3b），1.89（1H， m， H-5b），1.78（3H， m，H-2a，8a，9a），1.66（1H， m， H-2b），1.48（1H， m， H-9b），1.43（H， m， H-8b），1.28（1H， dd，J=12.6， 3.6 Hz， H-1），1.18（1H， m， H-7），1.15（3H， s， H-14），0.94（3H， d，J=6.9 Hz， H-12），0.93（3H， d，J=6.9 Hz， H-13）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：147.0（C-4），110.4（C-15），77.4（C-6），73.6（C-10），53.3（C-7），51.4（C-1），45.6（C-5），41.9（C-9），35.4（C-3），28.6（C-14），26.6（C-11），24.1（C-13），23.4（C-2），18.4（C-12），17.7（C-8）。以上数据对比文献报道[13-14]，确定该化合物为菖蒲二醇（calamendiol）。

化合物6 白色针状结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显色剂显褐色斑点。[α]20D+ 33.8°（C 0.003 67， MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）：203 nm（3.04）；HR-ESI-MSm/z277.180 4[M+Na]+（计算值 277.178 0）。1H-NMR（CDCl3， 500 MHz）δ：5.00（2H， s， H-15），4.04（1H， s， H-5），2.37（1H，m， H-3b），2.21（1H， m， H-3a），2.11（1H， td，J=12.8， 6.9 Hz， H-11），1.93（1H， m， H-2b），1.86（1H， m， H-9a），1.81（1H，dd，J=12.8， 3.4 Hz， H-1），1.64（1H， m， H-7），1.56（1H， m， H-8a），1.48（2H， m， H-8b， H-9b），1.30（1H， m， H-2a），1.21（3H， s， H-14），0.96（3H， d，J=6.9 Hz， H-12），0.91（3H， d， J=6.9 Hz， H-13）；13C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ：148.3（C-4），114.3（C-15），77.1（C-6），76.3（C-5），73.1（C-10），48.0（C-1），45.5（C-7），43.3（C-9），29.5（C-3），24.9（C-11），23.6（C-12），23.3（C-14），22.6（C-2），19.1（C-8），18.7（C-13）。在NOESY谱（CDCl3）中，H-1与H-7，H-5与H-11，H-13与H-9b，H-9a与H-14的NOE相关信号，从而确定H-1，H-7和H-14为α构型；H-5为β构型；同时在NOESY谱（CD3COCD3）中，观察到6-OH（δ：3.93）与10-OH（δ：2.98）的相关信号。以上数据对比文献报道[15]，确定该化合物为calamusin H。

化合物7 无色油状物。TLC紫外灯（254 nm）下有荧光，喷5%硫酸乙醇显色剂显桔红色斑点。ESI-MSm/z237[M-H]-。1H-NMR（CDCl3， 400 MHz）δ：4.16（1H， br s， H-5），2.63（1H，br dd，J=5.3 Hz， H-7），2.53（1H， m， H-9a），2.49（1H， m， H-2a），2.33（1H， m， H-9b），2.26（1H， m， H-2b），2.20（1H，m， H-11），1.97（2H， m， H-8），1.80（1H， m， H-3a），1.67（1H， m， H-3b），1.22（3H， s， H-15），1.06（3H， d，J=6.9 Hz， H-13），0.90（3H， d，J=6.9 Hz， H-12）；13C-NMR（CDCl3， 100 MHz）δ：199.8（C-10），157.4（C-6），132.7（C-1），75.3（C-5），72.3（C-4），40.3（C-7），35.1（C-9），32.3（C-3），30.0（C-11），22.5（C-8），22.1（C-15），21.7（C-12），21.6（C-2），19.3（C-13）。以上数据对比文献报道[16]，确定该化合物为oxyphyllenodiols A。

化合物8 白色胶状物（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显紫色斑点。ESI-MSm/z237[M-H]-。1H-NMR（CD3OD， 400 MHz）δ：5.34（1H， dd，J=3.5， 2.2 Hz， H-9），3.30（1H， dd，J=11.9， 3.7 Hz， H-2），2.21（1H， m， H-11），2.10（1H， m， H-3a），2.06（2H， m， H-7），1.88（1H， m， H-10a），1.84（1H， m， H-3b），1.74（1H， m， H-4a），1.61（1H， d，J=17.0 Hz， H-10b），1.53（1H， m， H-4b），1.30（1H， dd，J=12.1， 5.0 Hz， H-6），1.18（3H， s， H-15），1.03（3H， d，J=7.0 Hz， H-12），1.01（3H， d，J=7.0 Hz， H-13），0.95（3H， s， H-14）；13C-NMR（CD3OD， 100 MHz）δ：142.1（C-8），116.2（C-9），80.1（C-2），71.2（C-5），46.4（C-6），40.8（C-10），39.6（C-4），37.8（C-1），35.1（C-11），30.0（C-15），26.9（C-3），23.2（C-7），21.9（C-12），21.4（C-13），11.9（C-14）。在NOESY谱中，H-2与H-6，H-6与H-15，H-10b与H-2/H-6，H-14与H-10a的相关信号，确定H-2，H-6，H-15均为α构型，Me-14为β构型。以上数据对比文献报道[17]，确定该化合物为oplodiol。

化合物9 无色针状结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显紫色斑点。ESI-MSm/z255[M-H]-。1H-NMR（CDCl3+ CD3OD， 500 MHz） δ：4.20（1H， dd，J=11.5， 4.8 Hz， H-7），3.20（1H， m， H-2），1.94（1H， m， H-11），1.62（3H， m， H-4a， 6， 9a），1.56（1H， m， H-3a），1.50（2H， m， H-3b， 4b），1.46（1H， m， H-8），1.41（2H， m， H-9b， 10a），1.21（3H， s， H-15），1.09（1H， m， H-10b），0.99（3H， d，J=6.6 Hz， H-12），0.83（3H， d，J=6.6 Hz， H-13），0.83（3H， s， H-14）；13C-NMR（CDCl3+ CD3OD， 125 MHz）δ：79.0（C-2），73.0（C-7），72.8（C-5），49.6（C-6），47.1（C-8），40.7（C-1），39.7（C-4），35.6（C-10），27.7（C-3），25.2（C-11），24.3（C-12），23.3（C-15），22.7（C-9），22.2（C-13），13.9（C-14）。以上数据对比文献报道[18]，确定该化合物为菠萝香藤素（ananosmin）。

化合物10 无色油状物。GC-MSm/z 220 （M）+・。1H-NMR（CDCl3， 500 MHz）δ：5.83（1H， dd，J=17.4， 10.8 Hz， H-2），5.02（1H， dd，J=3.2， 1.6 Hz， H-4a），4.99（1H， dd，J=9.9， 0.9 Hz， H-3a），4.96（1H， dd，J=3.2， 0.9 Hz， H-3b），4.77（1H， dd，J=1.2， 0.6 Hz， H-4b），3.04（3H， s， H-6），2.16（1H， dd，J=8.8， 4.3 Hz， H-8），2.13（1H， dd，J=6.1， 4.4 Hz， H-11），2.03（1H， m， H-9），1.92（1H， m， H-10），1.77（3H， m， H-15），1.04（3H， s， H-14），0.92（3H， d，J=6.6 Hz， H-12），0.88（3H， d，J=6.6 Hz， H-13）；13C-NMR（CDCl3， 125 MHz）δ：210.1（C-7），146.7（C-2），140.1（C-5），116.9（C-4），111.2（C-3），66.9（C-6），56.4（C-8），46.3（C-1），39.6（C-10），26.4（C-11），24.9（C-9），24.5（C-15），21.3（C-12），19.0（C-14），18.7（C-13）。以上数据对比文献报道[19-20]，确定该化合物为表水菖蒲酮（epishyobunone）。

化合物11 无色颗粒状结晶（甲醇）。TLC紫外灯（254 nm）下无荧光，喷5%硫酸乙醇显紫红色斑点。ESI-MSm/z255[M - H]-。1H-NMR（CD3OD， 500 MHz）δ：3.29（1H，dd，J=7.9， 3.0 Hz， H-2），2.25（1H， m， H-7），2.08（2H， m， H-8a， H-9a），1.86（1H， m， H-3a），1.63（1H， m， H-4a），1.57（1H， m， H-10a），1.53（1H， m， H-3b），1.46（1H， dd，J=13.9， 4.8 Hz， H-4b），1.40（1H， m， H-9b），1.34（1H， m， H-8b），1.27（3H， s， H-15），1.23（3H， s， H-13），1.22（3H，s，H-12），1.18（1H， m， H-10b），1.01（3H， s， H-14），0.93（1H， d，J=10.9 Hz， H-6）；13C-NMR（CD3OD， 125 MHz）δ：80.7（C-2），72.6（C-5），72.4（C-11），60.3（C-6），52.1（C-8），48.1（C-1），42.0（C-4），40.2（C-10），33.4（C-9），33.0（C-7），32.0（C-15），30.3（C-12），30.0（C-13），28.6（C-3），15.1（C-14）。在NOESY谱中，H-2与H-6，H-4b与H-6/H-15的相关信号，确定H-2，H-6和H-15均为α构型；H-7与H-14的相关信号，确定H-7与H-14为β构型。以上数据对比文献报道[21]，确定该化合物为bullatantriol。

4 抗菌活性测定

取供试品溶液（乙醇溶解）用液体培基稀释约为200 mg・L-1，取稀释液置96孔板的2孔中，每孔100 μL，从第二孔开始采用二倍稀释法，用液体培基将各样品稀释成终浓度见表3，每孔加入10 μL菌悬液（菌液浓度2×107 CFU・mL-1），另设置加等量不含任何药物M-H液体培养基的正常对照，含菌不含药M-H液体培养基的阳性对照，乙醇为空白对照，细菌37 ℃培养箱中培养24 h，真菌28 ℃培养48 h后，肉眼观察不同菌株生长情况，以培养基中没有细菌生长的最高稀释度为最低抑菌浓度（MIC）。利用测定的MIC，接种培养物在不含药物的琼脂培养基，经孵育过夜，分别菌落计数，其菌落数少于5个的药物浓度即为最低杀菌浓度（MBC）。

从表3分析可知，化合物1对上述4种供试菌、化合物2对除白假丝酵母菌外的其余3种供试菌、化合物8对白假丝酵母菌和绿脓杆菌，化合物10对白假丝酵母菌，均无抑菌作用。化合物3对除绿脓杆菌外其余3种供试菌、化合物7和8对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌、化合物9和11对上述4种供试菌，均有显著地抑菌活性（MIC≤12.50 mg・L-1）。化合物7对金黄色葡萄球菌（MBC 12.50 mg・L-1）、化合物9对上述4种供试菌（MBC 20.00 mg・L-1）、化合物11对绿脓杆菌（MBC 12.50 mg・L-1）均具有显著的杀菌作用。

5 讨论

水菖蒲抑菌的相关报道较多，但大多集中在粗提物的活性评价，仅Begum J等[22]报道，水菖蒲中1，2，4-三甲氧基-5-（1-丙烯基）苯对壳球孢菌、链格孢菌和弯孢菌三种植物真菌有显著的抑制作用；β-细辛醚对丝状真菌红色毛癣菌、石膏样小孢子菌和马尔尼菲青霉表现出较强的抑制作用，IC50分别为0.2， 0.2， 0.4 g・L-1[23]，现无水菖蒲倍半萜类成分抑（杀）菌作用的相关文献报道。本文对分离得到的11个倍半萜类成分进行体外抑菌活性研究，发现化合物3， 7～9和11对不同细菌和真菌表现出显著地抑菌活性（MIC≤12.50 mg・L-1），并且化合物7，9和11具有显著地杀菌作用（MBC≤20 mg・L-1）。因此，通过本实验的研究，为水菖蒲及菖蒲属植物倍半萜类成分抗菌作用的研究及其合理开发应用提供实验依据。

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