辛伐他汀原料药中BHA含量测定方法研究

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摘　要：目的：建立辛伐他汀原料药中抗氧剂叔丁基对羟基茴香醚（bha）含量测定的方法

方法：采用气相色谱法，质谱检测器。色谱条件：应用DB-35ms(0.25mm×60m，0.25μm)交联石英毛细管柱，载气为氦气，流速为1ml/min，分流进样，分流比为50：1，进样量为2μl，进样口温度为280℃，柱温200℃；质谱条件：电离方式为电子轰击（EI），扫描方式为选择离子监测模式，用于定量分析的离子为正离子137、165、180。

结果：方法的线性范围为10.26-28.73μg/ml，最低检测限为20ng/L（S/N=3：1），加样回收率为93.4-103.7%，相对标准偏差（RSD）为4.3%。

结论：能够应用GC-MS法测定辛伐他汀原料药中BHA的含量，方法操作简便，快速

关键词：GC HPLC GC-MS　叔丁基对羟基茴香醚　辛伐他汀

前 言

辛伐他汀（Simvastatin）由美国默克公司开发，于1988年首次上市，1991年12月获美国FDA批准，是治疗原发性高胆固醇血症的药物，具有有效的调脂作用。因辛伐他汀原料药成品在放置过程中易被氧化，需要在辛伐他汀成品中加入一定量的抗氧化剂，本品加入了一定量的高效抗氧化剂叔丁基对羟基茴香醚（Butylated Hydroxyanisole，简称BHA）。BHA具有中等毒性，会对人体产生危害，最大使用量不得过0.2g/kg。目前在食品、化妆品中BHA测定多采用高效液相色谱法（1）或气相色谱法（2），由于BHA在辛伐他汀原料药中含量很低，单独采用高效液相色谱法或气相色谱法检测达不到定量的要求，因此，选择了灵敏度较高的质谱检测器，采用GC-MS测定，获得了较好的定量结果。

以下为实验部分

一、液相色谱法

1.仪器试剂

Agilent 1100 高效液相色谱仪；UV2450紫外分光光度仪（岛津公司），BHA对照品由中国医药（集团）上海化学试剂公司提供；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，辛伐他汀原料药（批号为071111、071112、071113、）由本厂研究院自制。

2.方法

2.1对照品储备溶液的制备

BHA对照品溶液的配制 精密称取BHA对照品50mg，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。

2.2紫外分光测定

取BHA对照品储备液1ml置100ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度成10μg/ml的溶液，摇匀测定分光得最大吸收波长约为288nm；取辛伐他汀原料药适量用乙腈稀释成10μg/ml的溶液，测定分光得最大吸收波长约为238nm。

2.3 色谱条件与系统适应性试验

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈—0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH4.5）(65:35)为流动相；检测波长为238nm，288 nm[3]。

2.4测定法

2.4.1取本品约40mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈适量，加对照品储备液8μl，再用乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀即成辛伐他汀浓度为0.16mg/ml+BHA浓度为0.032ug/ml的溶液，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图 。

2.4.2取本品约200mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙腈适量，加对照品储备液40μl，再用乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加乙腈稀释至刻，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.5结果

从检测过程中可以看出：当以辛伐他汀的最大吸收波长238nm检测时，BHA浓度为0.032μg/ml时BHA检测不到；当以BHA的最大吸收波长288nm检测时，BHA虽能检测，但达不到定量要求；加大辛伐他汀样品量同样也加大BHA量，但对BHA检测干扰较大，因此不能用HPLC法测定辛伐他汀中BHA的量。

二、气相色谱法

1.仪器

Agilent 6890 气相色谱仪

2.方法

2.1供试品溶液的制备

对照品溶液的配制 精密称取BHA对照品50mg，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密量取对照品储备液2ml置100ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。

样品溶液的配制 精密称定辛伐他汀原料药1.0g，置10 ml容量瓶中，加BHA对照品储备液0.2ml，再用乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。

2.2色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：SPBTM-1毛细管柱（30m×0.25mm）；以氮气为载气；分流比为50：1；进样口温度为280℃；检测室温度为280℃；柱温采用程序升温，初始温度100℃，保持5分钟，再以每分钟10℃的速度升温至200℃，保持10分钟；FID检测器；进样量为1μl；分别进样对照品溶液和样品溶液，记录色谱图（见色谱图1-2）

2.3结果

从色谱图中可以看出：BHA在GC中可以检测到，但是BHA在辛伐他汀中只含有万分之二，浓度为20μg/ml的BHA没有检测到，因气相色谱仪没有自动进样装置,采用外标法测定进样面积达不到要求。因此用GC法常规检测器测定响应值太小,达不到定量测定要求，所以GC方法也不能用。

三、GC—MS方法

1.仪器

6890/5973N气相色谱/质谱联用仪。

2.方法

2.1供试品溶液的制备

对照品溶液的配制 精密称取BHA对照品50mg，置50ml容量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密量取对照品储备液2ml置100ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。

样品溶液的配制 精密称定辛伐他汀原料药1.0g，置10 ml容量瓶中，加BHA对照品储备液0.2ml，再用乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。