红大戟中的蒽醌和三萜类化学成分

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[摘要] 运用硅胶、MCI、Sephadex LH-20柱色谱及半制备型HPLC等色谱方法，从红大戟95%乙醇提取物中分离得到9个化合物， 通过理化性质和NMR、MS等波谱数据鉴定化合物的结构为1，3-二羟基-2-羧基-9，10-蒽醌（1）， 1-甲氧基-3，6-二羟基-2-羟甲基-9，10-蒽醌（2）， 1，2，3-三羟基-9，10-蒽醌（3）， 阿江榄仁酸（4）， 2α，3β，24-三羟基齐墩果-12-烯-28-酸（5）， 2α，3β，19α，24-四羟基乌苏-12-烯-28-酸（6）， 2α，3β，24-三羟基乌苏酸（7）， 2α，3β，23-三羟基乌苏-12-烯-28-酸（8）和胡萝卜苷（9）。化合物1～9均为首次从该属植物中分离得到。

[关键词] 红大戟； 蒽醌； 三萜； 化学成分

红大戟Knoxia roxburghii（Sprengel）[1]， 原称K. valerianoides， 为茜草科Rubiaceae红芽大戟属植物， 多年生草本， 分布于我国南部多个省份， 主产于广西。红大戟的块根入药， 有泻水逐饮、攻毒消肿散结的功效； 主治胸腹积水、二便不利、痈肿疮毒等症[2]。红芽大戟属药用植物主要含有蒽醌、黄酮苷和色原酮苷类成分， 药理活性研究报道较少[3]。前期工作从红大戟中得到蒽醌、三萜、木脂素、香豆素、甾酮等成分， 体外活性筛选实验结果表明， 部分蒽醌具有抑制巨噬细胞分泌NO及肝细胞损伤保护活性[3-6]。为进一步寻找红大戟中的活性成分， 本实验对其95%乙醇提取物进行系统研究， 从中得到9个化合物， 均为首次从该属植物中分离得到， 本文报道它们的分离和结构鉴定。

1 材料

质谱用VG Autospec 3000型质谱仪测定；NMR用Bruker Avance Ⅲ 500核磁共振仪测定， TMS作内标；MCI树脂为Mitsubishi Chemical 公司生产；凝胶Sephadex LH-20为Amersham Pharmacia公司生产；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂生产；薄层色谱板为烟台江友硅胶发展有限公司生产；Waters 600型高效液相色谱仪， Ultimate XB-C18色谱柱（20 mm×250 mm，5 μm）， Waters 2489检测器；所用试剂均为分析纯或色谱纯。红大戟药材购自河北省安国中药市场， 经中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为红大戟K. roxburghii， 标本现存于中国医学科学院药物研究所植物标本室， 标本号为HDJ070413。

2 提取与分离

红大戟的干燥块根20 kg， 用95%乙醇超声提取3次， 减压浓缩得浸膏3.9 kg，将其分散于4 L水中， 用乙酸乙酯萃取3次， 得乙酸乙酯萃取部分400 g。该部分用硅胶柱色谱分离， 石油醚-丙酮梯度洗脱得到9个部分（Fr.1～Fr.9）。

Fr.6（30 g）用硅胶柱色谱分离， 氯仿-甲醇梯度洗脱得到7个小部分（Fr.6-1～Fr.6-7）。Fr.6-5（4.7 g）用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20（150 g， 石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1）柱色谱分离， 再经半制备型HPLC（甲醇-水67∶33）纯化得到化合物6（13.2 mg）。70%甲醇洗脱部分用凝胶（石油醚-氯仿-甲醇5∶5∶1）柱色谱分离得到2个小部分（M-70-1和M-70-2）， M-70-1（50 mg）用半制备型HPLC（甲醇-水85∶15）分离得到化合物5（14.4 mg）和7（15.4 mg）， M-70-2（42 mg）用半制备型HPLC（甲醇-水 80∶20）分离得到化合物4（19.3 mg）和8（6.4 mg）。Fr.6-6浓缩过程中析出白色沉淀， 过滤并用甲醇反复洗涤得到化合物9（200 mg）。

Fr.7（20 g）用甲醇溶解， 经MCI树脂充分吸附后， 用甲醇-水梯度洗脱。60%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20（150 g， 氯仿-甲醇1∶1）柱色谱分离， 得到化合物1（6 mg）， 70%甲醇洗脱部分用凝胶Sephadex LH-20（150 g， 氯仿-甲醇1∶1）柱色谱分离， 得到化合物2（8 mg）和3（10 mg）。

3 结构鉴定

化合物1 橙红色无定形粉末；ESI-MS m/z 283[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.94（1H，s，H-4），8.13（1H，d，J=7.5 Hz，H-5），7.89（1H，t，J=7.5 Hz，H-6），7.80（1H，t，J=7.6 Hz，H-7），8.10（1H，d，J=7.5 Hz，H-8）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz） δ：167.1（C-1），111.4（C-2），168.4（C-3），106.1（C-4），137.3（C-4a），126.9（C-5），135.0（C-6），133.3（C-7），126.5（C-8），132.6（C-8a），183.6（C-9），108.1（C-9a），179.7（C-10），135.6（C-10a），174.9（C-11）。以上数据与文献[7]报道的一致，故鉴定化合物1为1，3-二羟基-2-羧基-9，10-蒽醌（munjistin）。

化合物2 橙黄色无定形粉末；ESI-MS m/z 299[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.48（1H，s，H-4），7.41（1H，d，J=2.6 Hz，H-5），7.22（1H，dd，J=8.5，2.6 Hz，H-7），8.03（1H，d，J=8.5 Hz，H-8），4.56（2H，br s，H-11），3.84（3H，s，1-OMe），10.81（1H，s，3-OH），11.06（1H，br s，6-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：162.0（C-1），129.3（C-2），162.1（C-3），110.2（C-4），136.0（C-4a），111.7（C-5），162.4（C-6），122.2（C-7），130.1（C-8），127.2（C-8a），179.8（C-9），118.3（C-9a），183.2（C-10），134.5（C-10a），62.8（C-11），52.6（1-OMe）。以上NMR数据与文献[8]报道的一致，故鉴定化合物2为1-甲氧基-3，6-二羟基-2-羟甲基-9，10-蒽醌（1-methoxy-3，6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-9，10-anthraquinone）。

化合物3 橙黄色无定形粉末；ESI-MS m/z 255[M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.27（1H，s，H-4），8.14（1H，dd，J=8.5，2.6 Hz，H-5），7.89（2H，m，H-6，7），8.20（1H，dd，J=8.5，2.6 Hz，H-8），12.69（1H，br s，1-OH） ；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：152.4（C-1），152.2（C-2），139.4（C-3），109.3（C-4），110.8（C-4a），126.7（C-5），133.7（C-6），133.5（C-7），127.1（C-8），134.6（C-8a），187.4（C-9），125.1（C-9a），181.5（C-10），135.0（C-10a）。以上NMR数据与文献[9]报道的一致，故鉴定化合物3为1，2，3-三羟基-9，10-蒽醌（1，2，3-trihydroxyanthraquinone）。

化合物4 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 487[M-H]-。 1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：4.27（1H，m，H-2），4.21（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），5.47（1H，br s，H-12），3.29（1H，dd，J=13.8，4.0 Hz，H-18），4.22（1H，d，J=10.5 Hz，H-23a），3.73（1H，d，J=10.5 Hz，H-23b），1.21，1.08，1.08，1.05，0.99，0.92（each 3H，s，Me）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz），见表1。参照文献[10-11]报道的数据，鉴定化合物4为阿江榄仁酸（arjunolic acid）。

化合物5 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 487[M-H]-。1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：4.31（1H，m，H-2），3.57（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），5.46（1H，br s，H-12），3.30（1H，d，J=9.4 Hz，H-18），3.73（1H，d，J=10.9 Hz，H-24a），4.46（1H，d，J=10.9 Hz，H-24b），1.60（3H，s，H-23），1.27（3H，s，H-27），1.00（3H，s，H-26），0.99（6H，s，H-25，29），0.95（3H，s，H-30）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz），见表1。参照文献[12-13]报道的数据，鉴定化合物5为2α，3β，24-三羟基齐墩果-12-烯-28-酸（hyptatic acid-A）。

化合物6 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 503[M-H]-。1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：4.31（1H，m，H-2），3.56（1H，d，J=9.3 Hz，H-3），5.58（1H，br s，H-12），3.06（1H，s，H-18），4.47（1H，d，J=10.8 Hz，H-24a），3.73（1H，d，J=10.8 Hz，H-24b），1.13（3H，d，J=6.5 Hz，H-30），1.71，1.59，1.44，1.08，1.01（each 3H，s，Me）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz），见表1。参照文献[13-14]报道的数据，鉴定化合物6为2α，3β，19α，24-四羟基乌苏-12-烯-28-酸（hyptatic acid-B）。

化合物7 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 487[M-H]-。1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：4.30（1H，m，H-2），3.58（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），5.46（1H，br s，H-12），2.63（1H，d，J=10.9 Hz，H-18），3.72（1H，d，J=10.9 Hz，H-24a），4.46（1H，d，J=10.9 Hz，H-24b），1.60（3H，s，H-23），1.21（3H，s，H-26），1.02（3H，s，H-27），0.99（3H，d，J=5.2 Hz，H-29），0.96（3H，s，H-25），0.96（3H，d，J=6.2 Hz，H-30）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz），见表1。以上数据与文献[15]报道的一致，故鉴定化合物7为2α，3β，24-三羟基乌苏酸（2α，3β，24-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物8 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 487[M-H]-。 1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：4.27（1H，m，H-2），4.22（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），5.47（1H，br s，H-12），2.64（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），4.21（1H，d，J=10.5 Hz，H-23a），3.73（1H，d，J=10.5 Hz，H-23b），1.16（3H，s，H-26），1.08（9H，s，H-24，25，27），0.98（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.93（3H，d，J=6.4 Hz，H-30）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz），见表1。参照文献[16]中报道的数据，鉴定化合物8为2α，3β，23-三羟基乌苏-12-烯-28-酸（2α，3β，23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid）。

化合物9 白色无定形粉末；ESI-MS m/z 575[M-H]-。 1H-NMR（pyridine-d5，500 MHz）δ：5.36（1H，br s，H-6），5.07（1H，d，J=6.5 Hz，H-1′），3.94～4.59（7H，m），1.00（3H，d，J=6.6 Hz，Me），0.95（3H，s，Me），0.87～0.92（9H，m，Me），0.67（3H，s，Me）；13C-NMR（pyridine-d5，125 MHz）δ：37.3（C-1），30.0（C-2），78.4（C-3），39.7（C-4），140.7（C-5），123.5（C-6），31.9（C-7），31.8（C-8），50.1（C-9），36.7（C-10），21.1（C-11），39.1（C-12），42.3（C-13），56.6（C-14），24.3（C-15），28.3（C-16），56.0（C-17），11.9（C-18），19.2（C-19），36.2（C-20），19.0（C-21），34.0（C-22），29.3（C-23），45.8（C-24），26.2（C-25），18.8（C-26），19.8（C-27），23.2（C-28），11.8（C-29），102.4（C-1′），75.2（C-2′），78.8（C-3′），71.8（C-4′），78.3（C-5′），62.9（C-6′）。以上数据与文献[17]中报道的一致，故鉴定化合物9为胡萝卜苷（daucosterol）。

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Anthraquinones and triterpenoids from roots of Knoxia roxburghii

HONG Yi-lang1， MA Li2， WANG Yuan-fang1， SUN Ju-feng1， HOU Gui-ge1， ZHAO Feng1*，

HAN Jing-tian1*， WANG Chun-hua1

（1. Pharmacy Department， Binzhou Medical University， Shandong Province Medical and

Health Key Laboratory of Natural Medicines， Yantai 264003， China；

2. Yantai Stomatological Hospital， Yantai 264001， China）

[Abstract] Nine compounds were isolated from an ethanol extract of the roots of K. roxburghii by using a combination of various chromatographic techniques including column chromatography over silica gel， MCI gel， Sephadex LH-20， and reversed-phase HPLC. On the basis of physical-chemical properties and spectroscopic data analysis， their structures were identified as munjistin（1）， 1-methoxy-3，6-dihydroxy-2-hydroxymethyl-9，10-anthraquinone（2）， 1，2，3-trihydroxy-9，10-anthraquinone（3）， arjunolic acid（4）， hyptatic acid-A（5）， hyptatic acid-B（6）， 2α，3β，24-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid（7）， 2α，3β，23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid（8）， and daucosterol（9）. Compounds 1-9 were obtained from this genus for the first time.

[Key words] Knoxia roxburghii； anthraquinone； triterpenoid； chemical constituents

doi：10.4268/cjcmm20142128