RP-HPLC测定平胃滴丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量

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摘要：建立测定平胃滴丸中厚朴酚与和厚朴酚含量的方法。方法采用Waters SymmeWy C18色谱柱(5μm，150 mm×4.6mm)：流动相：乙腈，水(56：44)；流速1.0 mL／min；检测波长294nm：柱温40℃。结果方法学考察厚朴酚的线性范围为0.084～1.680μg，平均回收率99，9％(n=9)，RSD=1.28％；和厚朴酚的线性范围为0.0498～0.996μg，平均回收率99.7％(n=9)，RSD=1.89％。结论此方法简便、准确，可用于制剂的质量控制。

关键词：平胃滴丸；厚朴酚；和厚朴酚；反相高效液相色谱法

中图分类号：R284.1　文献标识码：A　文章编号：1672-979X(2010)07-0267-03

平胃滴丸由苍术、厚朴(姜制)、陈皮、甘草等中药经提取加工制成，有燥湿健脾，消胀散满的功效，常用于治疗脾土不运，湿浊困中，胸腹胀满，口淡不渴，不思饮食，或恶心呕吐，大便溏泻，困倦嗜睡，舌不红，苔厚腻等。处方中厚朴(姜制)为臣药，其所含的主要化学成分为厚朴酚与和厚朴酚。文献报道，厚朴酚和和厚朴酚有明显的抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗吗啡戒断反应、抑制儿茶酚胺分泌等药理作用。为更好的控制成品质量，本研究采用反相高效液相色谱法(rp-hplc)测定平胃滴丸中厚朴酚与和厚朴酚的含量。

1　材料、仪器与试剂

1.1　材料

平胃滴丸(河北以岭医药研究院，批号061201，每粒45mg)：厚朴酚与和厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号0729-200107，0730-9204)。

1.2　仪器

1100型高效液相色谱仪(美国Agnent)；紫外检测器。

1.3　试剂

乙腈为色谱纯：水为双重蒸馏水：其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1　色谱条件

色谱柱：Waters Symmetrycl8(5μm，150mm×4.6mm)；流动相：乙腈一水(56：44)；流速：1.0mL／min：检测波长：294mm；柱温：40℃。理论塔板数按厚朴酚峰计算不低于3800。

2.2　对照品溶液的制备

取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含厚朴酚420μg、和厚朴酚249μg的溶液，摇匀作为对照品贮备液；用时精密量取上述对照品贮备液5 mL至50 mL量瓶中，流动相稀释至刻度，即得每1 mL含厚朴酚42μg、和厚朴酚24.9μg的对照品溶液。

2.3　供试品溶液与阴性对照溶液的制备

取平胃滴丸适量，研细，精密称取2.0g置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，称定重量。超声处理(功率250W，频率40kHz)20min，放冷，称重。用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液，作为供试品溶液。另取方中除厚朴之外的其他药材，按照制备工艺制得阴性样品，用供试品溶液的处理方法处理，制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入高效液相色谱仪测定，结果阴性对照不干扰厚朴酚与和厚朴酚的测定。见图1。

2.4　线性关系考察

精密吸取对照品贮备液，分别用甲醇稀释至含厚朴酚8.4，21.0，42.0，84.0，126，168μg／mL；含和厚朴酚4.98，12.45，24.9，49.8，74.4，99.6μg／mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10μL，依次注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，厚朴酚在进样量0.084～1.680μg范围内呈良好的线性关系，回归方程：y=1.588 9X-1.393 2，r=0.99998：和厚朴酚在进样量0.0498～0.996μg范围内呈良好的线性关系，回归方程：y=1.769X--1.574，r=0.99991。

2.5　精密度实验

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10gL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积。结果对照品中厚朴酚的RSD=1.34％、和厚朴酚的RSD=1.35％，样品中厚朴酚RSD=1.06％、和厚朴酚RSD=0.58％。

2.6　稳定性实验

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10gL，分别于0，1，2，4，8，10，12，24 h进样，测定峰面积。结果对照品中厚朴酚的RSD=0.34％、和厚朴酚的RSD=0.35％，样品中厚朴酚RSD=1.26％、和厚朴酚RSD=-1.18％。

2.7　重复性实验

取同一批样品9份，分别取高(0.60g)、中(0.50g)、低(0.40g)3种剂量，按照供试品溶液的制备方法制备，测定，样品中厚朴酚含量2.72mg／g，RSD=0.97％：和厚朴酚含量1.58mg／g，RSD=0.91％，表明方法的重复性好。

2.8　回收率实验

采用加样回收实验。取同一批样品9份，分为3组，按高、中、低3种剂量，分别加入50mL不同浓度的厚朴酚、和厚朴酚对照品甲醇溶液，超声提取，测定，计算回收率。厚朴酚平均回收率为99.9％，RSD=1.27％(n=9)；和厚朴酚平均回收率为99.7％，RSD=1.89％(n=9)，结果见表1。

2.9　系统耐用性实验

取同一份样品，注入液相色谱仪，在(1)流动相组成比分别为乙腈-水52：48、乙腈。水56：44、乙腈，水58：421

(2)选用Waters Symmetry c18(5μm，150mm×4.6mm)、Phenomenex Gemini C18(5 p,m，150mm×4.6mm)：Agilent Eclipse XDB-C18(5μm，150mm×4.6mm)：

(3)波长290，294，298nm条，件下测定厚朴酚、和厚朴酚含量。结果流动相组成比的微小改变，对厚朴酚、和厚朴酚含量没有明显影响，厚朴酚RSD=0.24％、和厚朴RSD=0.18％；色谱柱改变，对厚朴酚、和厚朴酚含量没有明显影响，厚朴酚RSD=0.84％、和厚朴酚RSD=0.31％；检测波长微小改变，对厚朴酚、和厚朴酚含量没有明显影响，厚朴酚RSD=0.24％、和厚朴酚RSD=0.18％。

2.10　样品测定

用制定的含量测定方法，测定3批平胃滴丸中厚朴酚、和厚朴酚含量，结果见表2。

3　讨论

平胃滴丸成分复杂，曾参考药典厚朴药材项下流动相从中选择，因复方中其他物质干扰，不能很好的达到基线分离。采用本文中的流动相，能使厚朴酚与和厚朴酚达到基线分离，重现性好。

本文采用高效液相色谱法，以厚朴酚、和厚朴酚为指标成分测定含量，并考察精密度、重现性、稳定性和加样回收率，都得到了良好的结果，证明此法能有效控制平胃滴丸的内在质量。

本品为滴丸剂，采用固体分散技术制备。工艺条件易控制，质量稳定，剂量准确，受热时间短。易氧化及挥发性药物溶于基质后，稳定性增加，具有吸收迅速、生物利用度高等特点。

参考文献

[1]王立青，江荣高，陈蕙芳，厚朴酚与和厚朴酚药理作用的研究进展[J]，中草药，2005，(10)：1591-1594。

[2]孟超，吴丰，马林厚朴类中药厚朴酚及和厚朴酚含量测定[J]，天然产物研究与开发，2007，(19)：1024-1026。