水产品中硝基呋喃代谢物残留快速检测新方法的研究
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摘 要：水产品是我国食物种类的重要组成，深受百姓的青睐，但是为了确保水产品的正常养殖，需要使用硝基呋喃类药物，预防疾病的发生。虽然这类药物可以经代谢排出，但是水产品体内依然会有一定的残留，人们在食用水产品时如果将其体内残留的硝基呋喃代x物摄入体内，会给机体带来一定的伤害。为了避免这种结果，必须对水产品中的硝基呋喃代谢物（AHD、SEM、AOZ以及AMOZ）进行快速检测，以免出现严重的后果。本文试对硝基呋喃代谢物进行检测，并对这种物质的新检测方法进行简单的介绍。
中图分类号：TS254.7 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170333033
呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮等硝基呋喃类抗菌药物曾经在畜禽类和水产品的养殖中有着非常广泛的应用，但是硝基呋喃本身具有的毒性可以为人体健康带来危害，虽然经过代谢可以适量排出体外，但是其与蛋白质结合后会产生一定的残留产物，具有致癌作用。为了保障食品安全，实验室必须对水产品进行快速检测，以确保其体内的硝基呋喃代谢物在残留程度上符合安全标准。
1 检测重要性
硝基呋喃是抗菌药物中的一个种类，具有广谱的优点，由人工方式合成，结构为“5-硝基”，曾经被添加到饲料中，用于畜禽或水产品疾病的预防和治疗。但是，这种物质有一定程度的慢性毒性，短暂摄入人体后会带来恶心呕吐、腹泻、厌食等不良反应，部分患者甚至会出现黄疸或溶血性贫血，若是长时间或大剂量摄入，会有致畸或致癌效果。虽然这种物质半衰期较短，可以通过代谢排出，但是硝基呋喃代谢物可以与组织蛋白质结合，以另一种存在形式长期存留在人体中。对此，我国农业部在2002年12月下旬与2005年10月下旬先后了关于禁止在水产品养殖与畜牧饲养过程中添加硝基呋喃的公告，将硝基呋喃在动物饲养中的应用视为非法行为。正是基于这样的状况，实验室务必要对硝基呋喃残留状况进行快速检测，避免相关食品安全问题的出现。
2 方法――免疫胶体金法
目前，用于硝基呋喃代谢物检测的方法有许多，如：免疫胶体金法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱/串联质谱线性组合法、固相萃取高效液相色谱-质谱法等方法。本文选择免疫胶体金法这种新方法进行分析。
2.1 方法
挑选河蟹、鱼虾等水产品，取其可食用部分，大约100g，将捣碎后均匀混合，放在干净容器中，送入-18℃环境中作冷冻避光保存。为AHD、SEM、AOZ以及AMOZ 4种硝基呋喃代谢物准备生化试剂，分别为4-CBA、4-NBA、2-NBA，另准备氢氧化钠溶液、盐酸溶液以及磷酸氢二钾溶液各0mol/L、pH=7.4的PBST缓冲剂复溶液以及其他一些必备物品。为水产品进行快速检测。为了尽快取得阴性样品与阳性样品，可以借助LC-MS/MS方法进行预检。将解冻样品先称取2g，放入50mL的离心管之中，添加10mL的“甲醇：水=1：1”的混合溶液，给予1min的漩涡混合操作，再以4000转/min的速率进行5min的离心操作，完毕后将液体剔除，将残留物放入10mL的0.2mol/L盐酸之中，均匀浆后再次加入0.05mol/L的2-NBA与50?g/L的混合内标物（包含99.5%以上纯度的AHD、SEM、AOZ、AMOZ）各0.1mL，进行1min的漩涡混合，做100次/min的振荡，保持37℃温度不变，过夜后将样本取出并冷去，再添加0.1mol/L的磷酸氢二钾5mL，使用1mol/L的氢氧化钠进行酸碱度调整，直至其pH=7.4，随后使用4mL的乙酸乙酯进行2次提取，待干燥后使用50%的甲醇溶液进行定容，直至最终量为1mL。在混匀之后若达到0.22?m，则可以使用UPLC-MS/MS方法进行测定。为样品进行面积胶体金方法的检测。将样品吸取0.1mL，放入含有金标抗体的酶标板为控制中，以滴管进行反复吹打，直至微孔中的红色物质彻底溶解。安静等待5min之后，将试条取出并保持水平放置，将微孔中的溶液全部滴加到加样孔并开始计时，使用肉眼进行结果观察。
2.2 结果
阴性（-）为检测线（T）颜色与对照线（C）相同或更深；阳性（+）为检测线颜色比对照线显色浅，甚至检测线无显色。检测线的显色越浅，水产品硝基呋喃代谢物的残留度就越高。不同衍化剂对不同混合内标物具有不同的敏感度，AMOZ、AOZ、SEM与4-CBA配合性更好，AHD与2-NBA配合性更好（见图1）。
3 结语
实验室当前用于硝基呋喃代谢的检测方法主要有免疫胶体金法、液相色谱-串联质谱法等。本文仅对免疫胶体金法这种新型方法进行简单介绍，但是实验室应该在众多选择中选择最适宜的方法，来提高对硝基呋喃代谢物的检出率。
参考文献
[1]柳爱春，刘超，赵芸，等.免疫胶体金法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物的研究[J].浙江农业学报，2013，25（1）.