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儿童腹泻病原微生物的研究进展

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腹泻是人类最常见的疾病之一,尤其在儿童中更是一种常见病和多发病,是导致儿童死亡的重要原因。特别在发展中国家,腹泻是导致儿童死亡的主要原因。因此,对此类疾病的深入研究,预防其发生和减少死亡率十分必要。而引起儿童腹泻的病原微生物的种类是研究的重点,能引起儿童腹泻的病原微生物主要有病毒、细菌、原虫及真菌,现就儿童腹泻病原微生物的研究进展作一综述。

病毒

自诺瓦克病毒被鉴定为引起肠炎的病原体后,与人类腹泻相关的病毒抗原数量一直稳定增加,引起儿童腹泻的病毒主要有轮状病毒、肠道腺病毒、星状病毒等。

轮状病毒 在病毒引起的儿童腹泻中,轮状病毒的感染一直是首位原因。其中A组轮状病毒感染见于世界各地,温带地区以秋、冬季为主,患者以4个月~2岁婴幼儿多见。不同地区儿童腹泻患者轮状病毒的检出率及相关情况见表1。虽然轮状病毒在各地区的发病率各不相同,但从表1中数据可看出,轮状病毒在腹泻患儿中的检出率均较高,且在秋、冬较寒冷季节增多,是造成秋季腹泻的原因之一。因此,研制一种安全、有效的抗轮状病毒疫苗,了解当地轮状病毒暴发流行型别,以获得快速、有效的检测方法,将有利于降低死亡率及预防严重腹泻的发生。

肠道腺病毒 肠道腺病毒主要引起婴儿腹泻,已成为婴儿病毒性腹泻第2位的病原,仅次于轮状病毒。肠道腺病毒,如腺病毒40(Ad40)和腺病毒41(Ad41),已经被证实为引起儿童腹泻的重要病毒因素。欧洲、亚洲、美国北部和南部的调查研究表明,由腺病毒导致的儿童腹泻病例占所有儿童病例的3.1%~13.5%,其中Ad40和Ad41引起的儿童腹泻占肠道腺病毒引起儿童腹泻的37.5%~100%。肠道腺病毒在儿童腹泻标本中的检出率虽不如轮状病毒高,但近两年随着对肠道腺病毒的了解越来越深入,检测方法不断增加,商品化的检测试剂盒越来越快速简便,各国对腺病毒引起的儿童腹泻越来越重视。

星状病毒 星状病毒也是引起儿童腹泻的病毒之一,在许多地区已有儿童腹泻检出星状病毒的报道,如博茨瓦纳2.7%,阿根廷4.5%,悉尼儿童医院12%,匈牙利1.6%。但星状病毒在儿童腹泻中远不如前两种病毒重要。

其他 此外,杯状病毒、诺瓦克病毒、类诺瓦克病毒、肠道冠状病毒、细小病毒等也能引起儿童腹泻,在美国纽约曾有类诺瓦克病毒暴发流行的报道。

病毒检测方法

电镜 电镜是临床标本鉴定病毒的原理性方法,灵敏度不高,但可通过浓缩标本来提高其检测的灵敏度。若要进一步提高灵敏度,需采用免疫电镜法。已有研究证实,免疫电镜法对诊断腺病毒肠炎十分有用,但由于电镜用于检测临床标本时费用高、所需时间较长等局限性,不适用于临床诊断。

抗原检测 酶免疫法是检测病毒抗原最常用、快速的方法,采用单克隆抗体可提高检测的灵敏度和特异性。采用单克隆抗体免疫学方法对诊断由Ad40/41引起的腺病毒性肠炎特别有用,因为这两种型别的腺病毒培养十分困难。现在已有商品化的酶免疫检测试剂盒。放免法在检测的灵敏度和操作简易程度上与酶免疫检测法相当,但其最大缺点是废弃物会造成对环境的放射性污染。乳胶凝集法和免疫电镜计数仪也是快速、简便检测粪便标本中腺病毒的方法,其灵敏度与酶免疫检测法相当。免疫胶体金技术是针对病毒抗原检测的一种快速、简便、有效的方法。法国生物梅里埃公司已推出一种可快速(10~15分钟内)检测同一份粪便标本中轮状病毒和腺病毒的试剂盒。其原理是分别连接特异性针对轮状病毒和腺病毒的单克隆抗体在一反应条上进行免疫反应,对轮状病毒和腺病毒进行定性检测。

核酸测定 PCR、病毒RNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析、斑点杂交都是检测标本中病毒十分灵敏、特异的方法,而且使对病毒的认识提高到了基因水平,可对病毒进行基因水平的分型。但此类方法成本高、检测时间较长,如PCR法,即使是很微量的病毒污染,也会造成很高的假阳性结果,所以不适合粪便这种污染较大的标本检测。

病毒的分离 从标本中培养分离出相应的病毒,是诊断此种病毒感染十分可靠的方法,但病毒的培养实验技术、条件要求高,培养分离十分困难(如Ad40/41),且培养时间长,对于临床标本的检测很不适用,现主要用于科研方面。

细菌

许多肠道细菌可通过繁殖或毒素造成感染性腹泻,引起儿童腹泻的细菌有以下几种,肠致病性大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、十二指肠弯曲杆菌等。除此之外,其他能引起老年人和成年人腹泻的致病菌,如肠毒性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、霍乱弧菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、结肠炎耶尔森菌等,也能引起儿童腹泻。

在所报道的细菌引起儿童腹泻的调查中,主要是沙门菌及致病性大肠埃希菌为主要的病原菌,但在整个儿童腹泻中,作为腹泻的病原微生物,病毒的作用要比细菌更为重要。

原虫

引起寄生虫性腹泻的原虫主要有溶组织阿米巴、兰氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、结肠纤毛虫等。而寄生虫引起的腹泻,其潜伏期一般比细菌性或病毒性长,且寄生虫性腹泻都发生在卫生条件比较差的发展中国家。

随着经济、卫生条件改善,儿童中寄生虫性腹泻的发病率将会越来越少。

真菌

真菌中主要是白色念珠菌、曲霉菌、毛霉菌等引起腹泻。真菌性腹泻多发生在大量不当使用抗生素导致肠道正常菌群减少而真菌大量繁殖,或免疫力低下引起的医源性感染等情况,在儿童中真菌性腹泻更为少见。

据《国外医学临床生物化学与检验学分册》2005,26(8).