女贞子多糖的超声波提取工艺研究

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[摘要] 目的:女贞子多糖的提取工艺研究。方法:以多糖为评价指标,采用正交试验优化超声波提取工艺,用分光光度法进行测定。结果:选取在功率80%条件下,超声提取25 min,用5倍的溶媒提取1次为最佳工艺条件。结论:超声提取的提取率提高了约1.4倍,超声波的功率对提取率的影响最大,溶媒用量次之。

[关键词] 超声波提取;女贞子;多糖;正交试验

[中图分类号]R943[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210(2009)01(c)-057-02

Study on the extracting procedure of polysaccharide from ligustrum lucidum by ultrasonic extraction technology

GUO Liucheng

(Luohe Medical College, Luohe 462002,China)

[Abstract] Objective: To study the extraction process of polysaccharide from ligustrum lucidum. Methods: With polysaccharide as the evaluation index, using orthogonal optimization of ultrasonic extraction process, were determined by spectrophotometry. Results: Selected in the power of 80% of the conditions, the ultrasonic extraction 25 min, with 5 times the solvent extraction time was the best process conditions. Conclusion: The yield of ultrasonic extraction is higher about 1.4 fold than that of solvent extraction, and the most important factors for ultrasonic extraction are ultrasonic power and solvent usage.

[Key words] Ultrasonic extraction; Ligustrum lucidum; Polysaccharide; Orthogonal test

女贞子是我国传统的扶正固本药物,早在《神农本草经》中就有记载。女贞子多糖是女贞子具有多重功效的物质基础之一,现代药理研究表明多糖具有抗氧化、抗衰老、增强免疫等功效。利用溶剂法进行女贞子多糖的提取分离已有文献报道[1],但存在提取时间长,效率低、溶剂用量大等缺点,而超声波提取具有设备简单、提取方便、效率高、节能环保等优点,已经广泛应用于中草药有效成分的提取[2]。本文利用超声波对女贞子进行有效成分提取,用分光光度法测定多糖的含量,并对提取条件进行了正交试验的研究。

1 仪器与试药

KQ5OODE型医用超声波(昆山市超声仪器有限公司);752型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);RE3000型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);DZF-6020型真空干燥箱(上海基玮试验仪器有限公司);LDZ4-0.8型医用离心机(北京医用离心机厂);女贞子(药用,购于漯河市广惠和医药有限公司),其他试剂均为国产分析纯。

2 方法与结果

2.1 多糖含量测定

采用硫酸-蒽酮法[3]测定所提取的女贞子多糖中多糖含量,经验证葡聚糖的线性范围为0.5～90.0 mg/L。然后根据所用女贞子的质量(2 g)计算出女贞子中多糖得率。

2.2 回收率试验

精密量取上述已知含量的女贞子提取液,准确加入葡聚糖对照品1.00 mg,后按样品含量测定方法进行测定,得到葡聚糖的回收率为97.9%。

2.3 提取工艺流程及方法

女贞子(40目)称量加双蒸水调配超声提取多糖离心除去杂质浓缩乙醇沉淀干燥粗多糖。

2.4 超声波样品提取液的制备

2.4.1 工艺设计利用四因素三水平正交设计L9(34)正交实验,选取超声功率(A)、溶媒用量 (B)、提取时间(C)和提取次数(D)四因素,以多糖含量为测定指标。设计试验因素和水平见表1。

表 1 正交试验设计

2.4.2 制备工艺取女贞子2.0 g,精密称定9份,分别按正交实验法进行实验,用双蒸水浸泡30 min后,超声提取,合并提取液,离心除杂,浓缩,醇沉,滤过,真空干燥,得到1～9号超声样品。

2.5 样品含量测定

将超声波提取液按“2.1”项下含量测定法进行测定。结果见表2。

2.6 验证实验

取女贞子2.0 g,精密称定6份,分别用溶剂提取法和优化后的超声提取法,提取女贞子中的多糖。结果见表3。

3 讨论

由表2可知,超声波的功率和溶媒的用量是影响超声提取的主要因素,而超声提取时间和超声提取次数的影响较小。方案最佳:A2B2C2D1,即在功率80%条件下,用5倍的溶媒,超声25 min,提取1次为最佳工艺条件。

由表3可知,采用优化后的超声提取法提取女贞子中的多糖与传统的溶剂提取法比较,提取效率提高了约1.4倍,耗时短,且实验方法简单易行,操作稳定性好。

女贞子主要含有多糖、萜类、黄酮等化合物。女贞子多糖的成分为鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖及岩藻糖等[4]。由于双蒸水能广泛地溶解多糖,故本试验以双蒸水为溶媒,采用超声提取和溶剂提取两种方法,通过对多糖提取含量的比较得出,超声提取多糖含量明显高于溶剂提取法,这可能是声波破坏了女贞子细胞结构的缘故,而且超声提取法操作简易,无污染,成本低,是一种理想的多糖提取方法。

目前报道的测定中草药中多糖含量的方法中,苯酚-浓硫酸法和蒽酮-浓硫酸两种方法应用最广[5],用其测定女贞子多糖含量的方法亦有报道[1]。苯酚-浓硫酸比色法的显色不稳定,测定误差较大;而蒽酮-浓硫酸比色法的显色稳定,线性关系比较好。因此,蒽酮-浓硫酸比色法为检测女贞子多糖的一种理想方法[6]。

[参考文献]

[1]邱荣丽,李.女贞子多糖的提取工艺[J].中成药,2008,30(4):612-614.

[2]董嘉德.超声波在中药提取中的应用[J].中国药业,2002,11(11):55.

[3]李淑梅,扬帆,汤波,等.太行山黄芪多糖的提取工艺[J].光谱实验室,2008,25(3):335-337.

[4]张振明,葛斌,许爱霞,等.女贞子多糖的抗衰老作用[J].中国药理学与毒理学杂志,2006,20(2):108.

[5]黄瑞松.中草药多糖含量测定方法概述[J].中国药师,2005,8(1):68.

[6]杨莉,王志华,陶健生.黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较[J].中国医药工业杂志,2005,36(9):562-563.

(收稿日期:2009-09-21)