HPLC法测定熊胆口服液中牛磺熊去氧胆酸的含量
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摘 要 建立一种利用高效液相色谱法检测熊胆口服液中牛磺熊去氧胆酸的测定方法。通过不同检测条件的改变，制定复方制剂的熊胆口服液中牛磺熊去氧胆酸高效液相法的检测条件，保证该药物的疗效。
关键词 高效液相色谱法;牛磺熊去氧胆酸;熊胆口服液。
中图分类号：G642.423 文献标识码：B
文章编号：1671-489X（2014）24-0153-02
口服液吸收了中药注射剂的工艺特点，是将汤剂进一步精制、浓缩、灌封、灭菌而得。口服液最早是以保健品的一种形式出现于市场的，近些年许多治疗性的口服液品种也大量涌现，主要是口服液能综合地浸出原料中的多种功能成分，发挥综合的治疗作用，并且具有吸收快，疗效迅速，经过浓缩工艺服用量减少，便于携带、保存和服用的特点。
以熊胆粉、茵陈、大黄、黄芩、栀子、板蓝根等多种成分配制的熊胆口服液，具有清热解毒、护肝利胆、抑菌抗炎、降酶退黄、利湿通便的功效，用于肝炎、肝硬化、肝腹水、脂肪肝、胆囊炎、胆石症的治疗。熊胆是其主药组分之一，其中的主要有效成分为牛磺熊去氧胆酸。它的含量测定方法很多，按照2010版《中国药典》高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，hplc）
测定该口服液中的有效成分，有效保证治疗效果，依次建立一个完善的含量的检测方法，具有重要意义。
1 仪器与试药
日本岛津公司生产的LC-20AD/T LPGE KIT高效液相色谱仪、SPD-16紫外检测器、25μl液相平头进样针、真空干燥器、上海之信DL-360A超声波清洗机、梅特勒-托利多天平XP205型精度为0.000 01 g的天平、精度为0.1 g的天平。
牛磺熊去氧胆酸对照品（中国食品药品检定研究院，含量测定用，批号110806-201207）、Fisher色谱甲醇、60～140目中性氧化铝、0.8～1.8 cm层析柱、0.45有机滤膜、重蒸馏水，其他化学试剂（分析纯）。
2 检测方法与结果
1）色谱条件与系统适用性实验。色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相比例为CH30H：NaH2PO4（0.03摩尔/升）=65：30，流动相调pH至4.4（用磷酸进行调pH值），检测波长为210 nm，柱温35 ℃。理论板数按牛磺熊去氧胆酸峰计算应不低于2500。
2）对照品制备。对照品溶液的制备：称取牛磺熊去氧胆酸对照品适量，经五氧化二磷真空干燥至恒重后，精密称定，用甲醇溶解，混匀。制成约含牛磺熊去氧胆酸量为0.2 mg/ml的对照品溶液。
3）样品制备。取熊胆口服液5支，混匀，精密量取1 ml，加甲醇10 ml，滤过，滤液置已处理好的中性氧化铝柱（5 g，粒度110目，内径约1.3 cm，干法装柱）上，用甲醇110 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解后，用25 ml量瓶进行定容，加甲醇稀释至全量，摇匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，测定。至上用甲醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液水浴将甲醇除尽，残渣用色谱甲醇超声溶解，用25 ml量瓶进行定容，加甲醇稀释至全量，混匀。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各25 μl，在拟定的色谱条件下，分别注入高效液相色谱仪进行测定，积分获得峰面积，作为计算数据。
4）稳定性试验。取待测样品溶液，定时（0，3，6，12，18 h）进样测定，保留峰面积积分值分别为345407、349497、347572、344587、350866，平均值为347585，RSD=
0.76%。检测结果证明，如上处理供试样品在规定时间18 h内稳定。
5）精密度试验。取前文方法处理的对照品溶液，精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪中，测试样品5次，保留峰面积积分值峰面积分别为328110、322102、323631、28885、328466，平均值为326238，RSD=0.96%。
6）加样回收率实验。取检测含量合格的、批号为20141011的熊胆口服液，精密吸取该口服液10 ml，精密量取已知浓度的牛磺熊去氧胆酸对照品溶液适量，按前文照样品制备方法制得加样样品，按预定的测定方法进行测定，检测数据见表1。
7）样品测定结果。分别精密吸取已处理的对照品溶液与样品溶液各25 μl，在拟定的色谱条件下，分别注入高效液相色谱仪进行测定，积分获得峰面积，作为计算数据。按照《中国药典》外标法计算其含量，检测数据见表2。
3 讨论
经实验改变流动相比例、确定对照品的浓度、确定纯化样品中的有效成分、确定层析柱的直径及层析试剂的粒度，结果确立本文中的色谱条件和系统适用性实验。利用高效液相色谱法测定熊胆口服液中牛磺熊去氧胆酸的含量，具有专属性强及结果简便、准确等特点，可作为熊胆口服液的含量的质量控制方法。
作者：韩秋伟，黑龙江林业职业技术学院生物制药技术专业主任，高级制药工程师、教授、执业药师，主要从事药物制剂技术、药物检测技术的教学及科研工作（157011）。