丹参饮口服液质量控制标准鉴定研究

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摘要：目的：探索丹参饮口服液的质量标准鉴定方法。方法：采用薄层色谱法鉴别丹参，紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法鉴别并测定丹参饮口服液中丹参素钠的含量。色谱条件：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温40℃，流动相甲醇-1%冰乙酸（13∶87），二元梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长280 nm。结果：丹参饮口服液以及丹参药材在薄层色谱中可获得清晰的斑点。丹参素钠紫外-可见光谱的最大吸收峰在282 nm。丹参素钠在0.83 ～ 6.64 μg线性关系良好，r=0.999 5；加样回收率试验（n=6）测得平均回收率为97.22%，RSD为1.17%。结论：薄层色谱法鉴别丹参，紫外-可见光谱、HPLC测定丹参饮口服液中丹参素钠的含量，专属性强、重现性好，简便可靠。

关键词：丹参饮口服液；丹参素钠；薄层鉴别；紫外-可见光谱；高效液相色谱法

中图分类号：R286文献标识码：A

文章编号：1007-2349（2013）01-0061-03

丹参饮口服液，本品处方来源于《时方歌括》卷下，由丹参、砂仁、檀香3味药经提取、浓缩制成的口服液，具有活血祛瘀、行气止痛的功效[1]。临床上常用于气滞血瘀所致心胃诸痛等症。2009年四川省药品食品监督管理局制定的《四川省医疗机构制剂研究技术要求》中古代经典名方目录（第一批）已将丹参饮收录其中，本文初步建立丹参饮口服液的质控项目，采用紫外-可见分光光度法，高效液相色谱法测定丹参饮口服液中丹参素钠含量以及对丹参的薄层鉴别进行研究[2]。

1仪器与试药

1.1仪器LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津）；ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪（上海佑科仪表有限公司）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；JA203H型电子天平（常州市幸运电子设备有限公司）；ZQ-1.2型脉动真空压力蒸汽灭菌器（武汉市江汉医疗制药设备有限公司）。

1.2试剂与试药丹参素纳对照品（批号110855-200809，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；丹参、檀香、砂仁药材（购自泸州百草堂中药饮片有限公司，经泸州医学院附属中医医院赵剑副主任中药师鉴定为唇形科植物丹参（Savia miltiorrhiza Bge.） 的干燥根和根茎，檀香科檀香（Santalum album L）树干的心材，姜科多年生草本阳春砂（Amomum villosum Lour）的干燥成熟果实，均符合《中国药典》2010年版一部该药材项下规定）；丹参饮口服液（泸州医学院附属中医医院，批号：20120306，20120307，20120308，规格20 mL/支）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2丹参的薄层鉴别

2.1溶液制备

2.1.1对照品溶液：取丹参素钠对照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液。

2.1.2对照药材溶液：取丹参药材l g加水煎煮，放冷至室温后过滤，滤液用稀盐酸调pH至2.0，用乙酸乙酯20 mL提取，提取液蒸干，残渣用l mL甲醇溶解。

2.1.3供试品溶液：取丹参饮口服液20 mL，超声处理30 min，用盐酸调解pH至2.0，过滤，滤液用乙酸乙酯提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解。

2.1.4阴性样品溶液：按处方（除丹参药材外）与制法，制成阴性对照样品。其余处理同供试品溶液。

2.2展开剂的选择经过初步试验以及参考其他相关文献报道[3]，选择氯仿-丙酮-甲酸（10︰4︰2）作为展开剂。

2.3薄层色谱鉴别照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验[4]，吸取2.1四种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸（10︰4︰2）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性样品无干扰，结果见图1。

3紫外-可见光谱测定丹参素钠含量

3.1溶液制备

3.1.1对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容；准确吸取上述溶液2 mL，至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

3.1.2供试品溶液的制备精密量取本品5 mL，蒸干，残渣加甲醇使溶解，至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；准确吸取续滤液5 mL，至100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

3.1.3阴性样品溶液按处方（除丹参药材外）与制法，制成阴性对照样品。其余处理同供试品溶液。

3.2紫外-可见光谱的测定以3 mL甲醇溶液作为参比，用紫外-可见分光光度计进行基线校准，此后参照池不变，取3 mL对照品溶液于空置的样品池中，对其紫外-可见光谱进行测定；紫外-可见分光光度计参数设定：扫描范围210～300 nm，横坐标：λ/nm纵坐标：吸光度

A.对照品；B.供试品；C.阴性样品

4HPLC法测定丹参素钠含量

4.1色谱条件与系统适应性试验色谱柱：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温40 ℃，流动相甲醇-1%冰乙酸（13∶87），二元梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长280 nm，进样量10 μL，理论塔板数按丹参素钠计算应不低于3000[7]。

4.2溶液的制备

4.2.1对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品0.0083 g，置25 mL棕色量瓶中，加入甲醇溶解并定容，即得0.332 mg·mL-1溶液。

4.2.2供试品溶液的制备精密吸取试验样品适量，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得[8]。

4.3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得，结果见图3。本品每1 mL含丹参以丹参素钠（C9H10O5Na）计，不得少于0.15 mg。

4.4线性关系试验取4.2.1项下对照品溶液2.5，5，10，15，20 μL，按4.1项下色谱条件测定，记录峰面积。以对照品量对色谱峰面积进行线性回归，结果丹参素钠的回归方程为A=106C-649883，R2=0.9995（n=5），线性范围为0.83～6.64 μg。

4.5精密度试验取浓度为0.166 mg·mL-1的丹参素钠对照品溶液10 μL连续测定5次，其峰面积均值1448746，RSD 1.32%。表明仪器精密度良好。

4.6稳定性试验取供试品溶液（20120306）10 μL，分别在0，1.5，3，6，9，12 h进样，记录峰面积，结果丹参素钠峰面积平均值为1410746，RSD为3.23%。表明供试品溶液在12 h内稳定。

4.7重复性试验取同一批号（20120306）样品6份，按4.2.2方法制备，测定，结果丹参素钠平均含量为0.18 mg·g-1，RSD为1.04%，表明分析方法重复性良好。

4.8加样回收试验精密称取同一批（20120306）样品共6份，分别精密加入一定量的丹参素钠对照品，按4.2.2项下制备供试品溶液，各取10 μL进样测定，计算加样回收率。结果见表1。丹参素钠平均回收率为97.22%，RSD为1.17%，表明本方法准确可靠。

丹参常用于治疗妇科病、冠心病、缺血性中风、动脉粥样硬化等疾病，活性成分主要有脂溶性和水溶性两类，脂溶性成分主要是丹参酮、隐丹参酮、丹参酮ⅡA等[9]。近10多年来国内外对丹参及其同属植物的脂溶性成分进行了大量的研究，仅从丹参中分离的二萜醌类化合物就有40多个，并且对其药理也进行研究。然而中医药传统上用其水煎剂，即丹参的水溶性部位，所以研究丹参的水溶性成分相对来说更有意义[10]。研究表明，其水溶性成分主要是丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸（A，B，C，D，E，F，G）等。丹参素在自然界中不稳定，把其做成钠盐，功效和丹参素一样[11]。因此，用薄层色谱法鉴别丹参，紫外-可见光谱、HPLC测定丹参饮口服液中丹参素钠的含量。本文所建立的丹参素钠HPLC经方法学考察其专属性、重现性，简便可靠，适用于丹参饮口服液质量控制标准测定。

本试验在用紫外-分光光度计法测定丹参素钠含量时，丹参素钠对照品用甲醇溶解，丹参饮口服液未进行蒸干，直接用甲醇进行稀释定容，结果丹参饮口服液紫外-可见光谱最大吸收峰287 nm，偏离对照品丹参素钠282 nm 5个单位，超出了正常范围（280～284 nm）。通过多次试验，改为3.1.2供试品的处理方法，最大吸收峰284 nm，在一定程度上消除了中药成方制剂成分复杂的干扰，重现性好，测定结果更准确。

丹参饮作为中医药传统经典古方，在临床上具有良好的应用基础，通过现代制剂技术将其开发成新的院内制剂，以及进一步开发成国内新药，因而需要对丹参饮口服液的质量进行控制，建立丹参饮口服液初步的质量指标，体现中医药特色，为患者提供安全、有效、经济稳定的中成药。

参考文献：

[1]蒲清荣，陈玉兰，黄锐，等.丹参饮口服液水提取工艺研究[J].药物评价研究，2012，35（4）：270.

[2]曹珍，谢晓亮.丹参不同的鉴别方法[J].时珍国医国药，2007，18（8）：1861.

[3]朱荣，朱斌.妇女痛经丸质量控制标准鉴定研究[J].临床合理用药，2012，5（2B）：27.

[4]中华人民共和国药典委员会.中国药典[M].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

[5]刘省存，凡小庆，陈先亮，等.不同产地丹参的紫外光谱[J].光谱实验室，2011，28（2）：573.

[6]李化，于艳秋，杨滨.黄酮化合物与Fe（Ⅱ）络合反应的动力学研究[J].中国实验方剂学杂，2010，16（17）：99.

[7]黄衍民，黄炳亮，张亚斌，等.高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素钠的含量[J].中国医院药学杂志，2007，27（11）：1618.

[8]李海燕，李振国，宋汉敏，等.HPLC测定冠心生脉口服液中丹参素钠的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（12）：78.

[9]周静，李惠芬，王洪志，等.丹参水溶性成分与脂溶性成分抑菌作用的考察[J].时珍国医国药，2008，19（9）：2130.

[10]谢静.丹参水溶性成分提取工艺研究[J].制剂技术，2009，18（3）：27.

[11]王涛，聂云，宋金濂.HPLC法测定丹参素钠的条件优化[J].内蒙古中医药，2009，16（8）：30.

（收稿日期：2012-11-19）作者简介：肖笛（1991～），女，汉族，四川自贡人，2009级药学本科生.

通讯作者：彭芳，教授，主要从事药理学方向研究；email：