小细胞肺癌中VEGF、Dll4及Notch1的表达及相关性研究

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【摘要】 目的：探讨小细胞肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子（vegf）、dll4及notch1的表达水平及相互关系，寻找SCLC靶向治疗的新靶点。方法：采用免疫组化法测量45例SCLC肿瘤组织中VEGF、Dll4及Notch1蛋白的表达水平，并选取20例癌旁正常组织作对照组。结果：VEGF、Dll4在SCLC肿瘤组织中的阳性率均明显高于癌旁正常组织（P0.05）；在SCLC肿瘤组织中VEGF与Dll4的表达呈高度正相关（rs=0.867，P

【关键词】 小细胞肺癌； VEGF； Dll4； Notch1

中图分类号 R734.2 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）16-0063-02

【Abstract】 Objective：To investigate the expression levels and mutual relationship of vascular endothelial growth factor（VEGF），Dll4 and Notch1 in tumor tissue of small cell lung cancer，and looking for new targets of targeted therapy in SCLC.Method：Immunohistochemistry technology was used to detect the expression of VEGF，Dll4 and Notch1 protein in 45 cases with SCLC tumor tissue，compared with 20 cases of adjacent normal lung tissue.Result：In SCLC tumor tissue the positive rates of VEGF and Dll4 were significantly higher than those in the adjacent normal tissue（P0.05）.VEGF was highly positively correlated with Dll4（rs=0.867，P

【Key words】 SCLC； VEGF； Dll4； Notch1

First-author’s address：Qingdao University Medical College，Qingdao 266011，China

doi：10.14033/ki.cfmr.2015.16.034

肺癌是目前全球发病率最高的癌症，小细胞肺癌（SCLC）约占肺癌总数的20%，是肺癌中远处转移最早、恶性程度最高、预后最差的一种类型，大多患者就诊时既已发生远处转移，失去手术治疗机会，因此寻找更加有效的非手术治疗方法是目前研究的热点。抗血管生成药物贝伐珠单抗给非小细胞肺癌（NSCLC）治疗带来的生存获益已被临床证实，NCCN指南将其列入对NSCLC的一线及二线治疗推荐[1]。SCLC相关血管信号通路的研究报道甚少，但抗血管生成药物在SCLC的治疗中显示出了一定的应用前景[2-3]，受到众多学者的高度关注，因此有必要研究SCLC肿瘤组织中血管信号因子如VEGF、Dll4及Notch1等的表达情况及相关性，寻找更加合适的治疗靶点。

1 资料与方法

1.1 标本

标本为2009-2014年青岛市市立医院病理科SCLC（术前均未进行放化疗）术后的存档蜡块，共45例，术后诊断均经过免疫组化检测CD56、Syn、CK和NSE四项证实。同时选取癌旁正常肺组织蜡块20例作为对照组。

1.2 试剂

兔/鼠抗人多克隆抗体（Ⅰ抗）、PBS缓冲液购自北京中杉金桥生物技术有限公司，快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（Ⅱ抗）、EDTA抗原修复液及DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化法染色 载玻片预先经防脱片处理，组织蜡块经4 ?m厚连续切片，60 ℃烘烤，二甲苯、酒精脱蜡水化，EDTA高压热修复，3%H2O2灭活，Ⅰ抗（工作液浓度为1∶500） 37 ℃孵育1 h，Ⅱ抗于室温下作用10 min，DAB显色3～5 min，充分水洗后苏木素对比染色，酒精、二甲苯脱水，中性树胶封片，显微镜下观察分析结果。

1.3.2 阳性判断标准 肿瘤细胞的胞膜或胞浆中出现棕黄色或黄褐色颗粒者为着色细胞，着色定位（Notch1在胞浆/膜，VEGF和Dll4分别在胞浆和胞膜）准确为阳性细胞。按细胞着色程度评分：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分；按阳性细胞所占比例评分：

1.4 统计学处理

应用SPSS 15.0软件对数据进行统计分析，组间阳性率比较采用字2检验，各指标间的相关性采用Spearman等级相关分析，P

2 结果

2.1 VEGF、Dll4及Notch1在SCLC组和对照组中的表达情况

45例SCLC患者中，VEGF的阳性表达率为71.1%，其中阳性6例，强阳性2例；Dll4的阳性表达率为62.2%，其中阳性6例；Notch1的阳性表达率为8.9%，均为弱阳性。VEGF在SCLC组阳性率明显高于对照组（字2=28.013，P

2.2 VEGF、Dll4及Notch1在SCLC中表达的相关性

应用Spearman等级相关分析对数据分析显示：VEGF与Dll4的表达呈高度正相关（rs=0.867，P

3 讨论

Folkman最早提出“恶性肿瘤生长依赖新生血管”的观点，认为肿瘤的生长与肿瘤的血管生成密切相关。抗血管生成即是将肿瘤血管作为靶点从而有效控制肿瘤生长的治疗，是目前最有希望在肿瘤缩小后维持其长期稳定、将之转变成慢性病的手段。

VEGF是肿瘤血管新生过程中最重要的因子之一，通过与血管内皮细胞上的络氨酸受体（VEGFR）结合而发挥作用。抑制VEGF-VEGFR路径是目前研发抗肿瘤药物的关键目标，而且在NSCLC治疗中已被批准应用于临床并获益。在SCLC有研究发现VEGF高表达者生存期短，预后不良[4]。陈建华等[5]采用恩度联合CE方案治疗晚期SCLC患者，取得了较好的临床疗效。本研究结果显示：SCLC肿瘤组织中VEGF的阳性表达率明显高于癌旁正常组织，据此有理由推测VEGF促进了SCLC肿瘤血管的生成。但近年来临床实践显示，VEGF抑制剂并不是对所有肿瘤都有效，有的肿瘤虽然在治疗初期有效，但在治疗过程中可以发展为耐药。因此，单一抑制VEGF-VEGFR显然是远远不够的，有必要研究更多血管信号通路，寻找新的血管治疗靶点。

Dll4-Notch是另外一条影响肿瘤血管生成的重要信号通路，是近些年肿瘤研究的热点。Dll4是唯一特异性存在于血管内皮细胞的Notch配体，是VEGF的下游基因，与VEGF一起作用来调控血管萌发和分支的形态。Dll4只存在于内皮细胞的表面，VEGF高表达可使其表达显著升高，减少VEGF，Dll4表达也同时下降；同样抑制Dll4，也可使VEGF表达下降。本项研究结果显示：VEGF、Dll4在SCLC肿瘤组织中的表达均明显高于癌旁正常组织，且两者在肿瘤组织中的表达呈高度正相关。提示VEGF与Dll4相互影响，共同促进肿瘤生长；同时阻断VEGF和Dll4信号，可能起到协同抑制肿瘤生长的作用。

Notch1受体包括Notch1～4，是多种器官和组织正常发育所必需的调节信号，同时也是一些肿瘤发生、发展的影响因子。胚胎肺发育研究显示Notch1在小鼠胎肺正常发育过程中发挥重要作用，从胚胎到成熟个体Notch1表达呈现逐渐增多的动态变化。而Sriuranpong等发现Notch1的过量表达可以引起SCLC肿瘤细胞形态发生改变，使细胞周期停滞在G1期，抑制其继续生长。本研究结果显示：Notch1在癌旁正常组织中的阳性率略高于SCLC肿瘤组织，且Notch1在肿瘤组织中的表达与具有促癌作用的VEGF、Dll4因子均呈负相关，提示Notch1可能存在抑制SCLC肿瘤生长的趋势。如在阻断VEGF和Dll4信号的同时，调节Notch1因子的表达，有望提高SCLC的治疗效果，改善预后。

目前，SCLC的治疗仍以放化疗为主，预后欠佳。靶向治疗为SCLC患者带来了新的希望，有望成为最有前途的治疗策略之一。但尚需通过增加样本数量，进一步研究各种血管信号在SCLC发病过程中的作用机制及信号通路间的相互影响，从而寻找更加合适的靶点。

参考文献

[1] National Comprehensive Cancer Network.NCCN Clinical practice guidelines in oncology：non-small cell lung cancer[M].Version 2.NCCN，2013：16.

[2] Spigel D R，Townley P M，Waterhouse D M，et al.Randomized phase Ⅱ study of bevacizumab in combination with chemotherapy in previously untreated extensive-stage small-cell lung cancer：results from the SALUTE trial[J].J Clin Onco1，2011，29（16）：2215-2222.

[3] Ready N E，Dudek A Z，Pang H H，et al.Cisplatin，irinotecan，and bevacizumab for untreated extensive-stage small-cell lung cancer：CALGB 30306，a phase Ⅱ study[J].J Clin Oncol，2011，29（33）：4436-4441.

[4]王阿曼，蔡欣，周涛，等.MMP-2、VEGF、CD105和Ki-67在小细胞肺癌中的表达及预后相关性研究[J].临床肿瘤学杂志，2012，17（11）：988-993.

[5]陈建华，罗永忠，周文伟，等.重组人血管内皮抑制素联合卡铂与依托泊苷治疗晚期小细胞肺癌的临床观察[J].实用临床医药杂志，2013，17（5）：26-28.

（收稿日期：2015-02-13） （编辑：程旭然）