高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响

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[摘要] 目的 分析高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内nmda受体亚单位蛋白表达的影响。方法 研究r间2015年7月―2016年4月，将36只SD大鼠随机分为模型组（皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液）和对照组（相应体积的生理盐水），检测不同时间点大鼠血浆同型半胱氨酸含量及脑内NMDA受体亚单位（NR1、NR2A、NR2B）的蛋白含量。结果 模型组中第3小组大鼠的Hcy、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B分别为（21.46±1.37）、（0.99±0.13）、（0.95±0.18）、（1.47±0.25），均高于第2小组和第1小组（P

[关键词] 高同型半胱氨酸血症；NMDA受体亚单位；蛋白；表达；影响

[中图分类号] R44 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）12（b）-0048-03

Effects of Hyperhomocysteinemia on NMDA Receptor Subunit Protein Expression in Rat Brain

YAO Bo-xin

Department of Neurology， the Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Quanzhou， Fujian Province， 362000 China

[Abstract] Objective To investigate the effect of hyperhomocysteinemia on the expression of NMDA receptor subunit in rat brain. Methods Study time From July 2015 to April 2016，36 SD rats were randomly divided into a model group （the normal saline solution for subcutaneous injection）and a control group（the corresponding volume of saline），and the rats were sacrificed at different time points The plasma levels of homocysteine and the protein content of NMDA receptor subunits（NR1， NR2A， NR2B）in rats were determined. Results The levels of NMDA receptors NR1，NR2A and NR2B in the model group were （21.46±1.37），（0.99±0.13），（0.95±0.18），（1.47±0.25），（10.14±1.13），（0.74±0.11），（0.70±0.23），（0.68±0.13），respectively（P

[Key words] Hyperhomocysteinemia； NMDA receptor subunit； Protein； Expression； Effect

高同型半胱氨酸血症发病实质是由机体甲硫氨酸代谢障碍所引起的血浆或血清中游离及与蛋白结合的同型半胱氨酸、混硫化合物含量增高，目前已被证实是诱发心脑血管疾病的重要危险因素[1-2]。脑卒中是我国临床常见的一种急性脑血管疾病，发生后不仅严重危害患者机体健康，同时也会给患者家庭造成沉重的经济负担[3]。高同型半胱氨酸血症作为脑卒中独立危险因素，对其诱发脑损害机制的深入研究，可为临床制定能够进一步改善脑卒中患者预后的治疗方案提供参考依据[4]。基于上述现状，该院于2015年7月―2016年4月选取36只实验大鼠开展研究，针对高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响进行了分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究时间2015年7月―2016年4月，实验动物为健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，由该院试验动物中心提供，3月龄，体重（200±20）g，随机分为模型组和对照组，每组各16只。两组大鼠的饲养环境相同，均为每笼4只，饮食饮水自由，光照时间相同。模型组16只大鼠的平均体重为（210.9±3.5）g，对照组16只大鼠的平均体重为（210.5±4.1）g，组间比较差异无统计学意义（P>0.05），可以开展研究。

1.2 研究方法

分组后每日给予模型组大鼠皮下注射用生理盐水配成的蛋氨酸溶液，注射┝课80 mg/（kg・d），每日给予对照组大鼠皮下注射与模型组大鼠体积相同的生理盐水。分别于实验开始后第1天、第4、8周处死两组大鼠，每个时间点每组各处死6只，按照处死时间的不同将各组大鼠分为3个小组。采用高效液相色谱法检测模型组大鼠的血浆同型半胱氨酸含量，不同时间点分离大鼠大脑皮层，使用Bio―Rad Protein Assay Dye Reagent Concerntrate进行蛋白定量，采用蛋白印迹法检测不同血浆同型半胱氨酸含量大鼠脑组织内NMDA受体亚单位体NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量。

1.3 观察指标

该课题研究的观察模型组中3组大鼠（不同时期处死）的血浆同型半胱氨酸含量、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量，模型组中3组大鼠脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量与对照组中对应组别小鼠存在的差异。

1.4 统计方法

由专业的数据分析处理人员对该课题研究得到的研究数据进行统计分析，采用SPSS 13.0统计学软件，计量型指标均采用平均数±标准差（x±s）表示，指标差异进行独立样本t检验，P

2 结果

2.1 模型组中3组大鼠的血浆同型半胱氨酸含量、脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量比较

统计检测结果发现，模型组中第3小组大鼠的血浆同型半胱氨酸含量、脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量均高于第2小组和第1小组大鼠，其中NMDA受体亚单位NR2B的蛋白含量升高幅度最高，第1小组大鼠上述指标含量均为最低，组间差异均具有统计学意义（P

2.2 模型组、对照组中3组大鼠的脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量比较

模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量均高于对照组中对应小组大鼠（P

3 讨论

NMDA受体是一种谷氨酸受体，广泛分布于哺乳动物的脑组织中，是中枢神经系统内的一种兴奋性神经递质，在神经元的存活、树突及触突结构的发育、突触可塑性的维持、神经元回路的形成及学习、记忆过程中发挥重要作用[5]。研究发现，机体处于正常生理状态时，谷氨酸对神经细胞具有快而短暂的兴奋作用，导致神经细胞去极化，产生兴奋性突触后电位，直接参与大脑的学习和记忆活动。谷氨酸共有4种离子型受体，其中NMDA受体属配体门控的离子通道，共有3个亚单位，分别为NR1、NR2A、NR2B。大量研究已经证实[6-7]，同型半胱氨酸通过竞争NMDA受体上的谷氨酸或甘氨酸结合位点，导致钙离子大量流入细胞内促进活性氧的产生和细胞蛋白酶的释放，继而会产生细胞毒性和神经毒作用，因此认为高同型半胱氨酸血症会对脑组织中NMDA受体亚单位的蛋白表达产生影响，与脑卒中的发生存在密切关系[8]。

该课题研究针对高同型半胱氨酸血症对大鼠脑内NMDA受体亚单位蛋白表达的影响进行深入分析。表1数据显示，模型组中第3小组大鼠的血浆同型半胱氨酸含量、脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B 3种亚单位的蛋白含量分别为（21.46±1.37）、（0.99±0.13）、（0.95±0.18）、（1.47±0.25），均高于第2小组和第1小组，第1小组大鼠上述指标含量均为最低，分别为（10.14±1.13）、（0.74±0.11）、（0.70±0.23）、（0.68±0.13）。由表1数据可知，随着大鼠血浆同型半胱氨酸含量的升高，大鼠脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量也呈现出升高趋势，其中以NR2B的升高幅度最明显。表2数据显示，模型组3个小组大鼠的脑内NMDA受体NR1、NR2A、NR2B、3种亚单位的蛋白含量均高于对照组中对应小组大鼠。由表2数据可知，血浆同型半胱氨酸含量正常的大鼠，其脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量不会随时间发生明显变化，而高同型半胱氨酸血症大鼠脑内NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B的蛋白含量则处于较高水平。该课题研究结果与徐斌等[8]的研究结果具有一致性。

综上所述，该院认为高同型半胱氨酸血症会导致大鼠脑内NMDA受体亚单位的蛋白表达上升，加重大鼠脑神经损伤，提示临床可从降低同型半胱氨酸含量方面来探索能够进一步改善脑卒中患者预后的治疗方案。

[参考文献]

[1] 黄川锋，秦玖刚，王爱梅，等.旱莲草水提取物对高同型半胱氨酸血症大鼠血脂及血管内膜的影响[J].中国临床药理学杂志，2015，4（10）：882-885.

[2] 邵望舒，姜雅秋，张华，等.辛伐他汀对高同型半胱氨酸血症大鼠心肌梗死再灌注后无复流的影响及其机制[J].中国老年学杂志，2014，34（2）：427-429.

[3] 丛广志，贾绍斌，罗彩琴，等.叶酸对高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉基因组总甲基化水平影响研究[J].中国现代医学杂志，2012，22（17）：35-38.

[4] 孟斌，高蔚娜，杨继军，等.高蛋氨酸饲料喂养的大鼠高同型半胱氨酸血症模型的实验研究[J].氨基酸和生物资源，2011，33（2）：53-56.

[5] 王会芹，郭宏，赵慧，等.叶酸、维生素B6和维生素B12对高同型半胱氨酸血症大鼠心室重构的影响[J].中国全科医学，2013，16（3）：275-279.

[6] 鲁轩浩，赵连友，张志敏，等.高血压伴高同型半胱氨酸血症大鼠心肌ATF6和CHOP表达对左室肥厚的影响及依叶片干预效果[J].中国循证心血管医学杂志，2016，8（6）：729-732.

[7] 张政军，贾绍斌，侯建军，等.高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉组织中Bcl-2和Bax基因的表达[J].广东医学，2013，34（8）：1160-1162.

[8] 徐斌，徐兆发，邓宇，等.MK-801对锰中毒大鼠脑纹状体NMDA受体亚单位表达的影响[J].实用预防医学，2009，16（3）：635-638.

（收稿日期：2016-09-17）