浅谈ELISA的影响因素

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【摘要】elisa即酶联免疫吸附试验,ELISA是一种敏感性高、重复性好的固相酶联免疫测定广泛用于各种抗原抗体的检测,但影响因素较多,有时易出现假阳性或假阴性,本文重点针对内源性、外源性因素对ELISA测定结果的影响进行探讨。

【关键词】酶联免疫吸附试验(ELISA);测定结果;影响因素

【中图分类号】R392.33【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2010)18-032-1

如今病毒性疾病的诊断主要依赖对其抗原、抗体的检测。而检测方法大多采用酶联免疫吸附试验(ELISA),如何保证实验结果的准确性,现结合自己的实际工作经验,总结了下列影响因素,希望对检验工作者有所帮助。

1内源性干扰因素

1.1类风湿因子(RF)在类风湿患者、其他自身免疫性疾病及正常人的血清中,常含有较高或不同浓度的RF,RF一般为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可以充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。

1.2补体补体易激活C1q起到铰链作用,结果易出现假阳性。

1.3嗜异性抗体人类血清中含有天然的嗜异性抗体,将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,造成假阳性。

1.4自身抗体由于B细胞的超反应性,患者血清中常出现一些自身抗体,能与靶抗原结合形成复合物。

1.5溶菌酶可致假阳性。

2外源性干扰因素

2.1标本溶血,分离不完全、加有血球。

2.2标本被细菌污染。

2.3标本储存时间过长。

2.4标本凝固不全。

2.5冰冻保存标本反复冻融。

2.6试剂在室温下平衡

2.7加样速度过快,加样时加在孔壁上或产生气泡。

2.8温育时关键因素之一,尽量选择温度低的,温育时间长的试剂盒。

2.9洗涤要彻底。

2.10双波长比色可减少容器上的划痕和指印等造成的光干扰。

2.11试剂质量的影响。选用高质量的试剂是保证结果准确的关键因素之一。

3高值钩状效应(HOOK效应)

在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时出现钩状效应。过量抗原分别和固相抗体和酶标抗体结合,而不再形成“夹心复合物”类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常规法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应,因为标准曲线到达高峰后钩状弯落。

综上所述,ELISA影响因素较多,要想提高检验质量,就要加强实验室科学管理,加强标准化程序操作,加强质量控制,提高人员素质,以减少假阳性、假阴性的发生

参考文献

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[2] 刘国刚,钟海明,胡金元.ELISA检测HIV抗体的几点体会[J].中华医学实践杂志,2004,3(10):907.