藤茶化学成分的提取分离研究

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摘要：目的 研究藤茶即葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的化学成分。方法 对藤茶及该属植物的研究进展进行资料收集和整理确定其有效成分及药理作用，以及有效成分的性质，并采用系统溶剂法和色谱法对其进行提取分离研究。结果 通过对所得化合物的显色反应、紫外光谱测定和薄层色谱鉴定、熔点测定，综合进行结构解析，确定了化合物Ⅰ、化合物Ⅱ的结构分别为杨梅素和蛇葡萄素。结论 本文为提取纯化工艺指明了方向，并为进一步将其开发成中药新药提供充分的实验依据。

关键词：藤茶化学成分；蛇葡萄素；杨梅素；结构鉴定

Abstract：Objective To shudy the chemical constituents of Ampelopsisgrossedentata.Methods On Vine tea and the progress of the study to collect and collate information on its composition and effective pharmacological effects，and effective components of the nature and adopt the system solvent and chromatography separation from their research.Results Through the compound from the color reaction，UV determination and identification of TLC，melting point determination，comprehensive structural analysis to determine the compoundⅠ，the structure of compoundsⅡwere Myricetin and Ampeloptin.Conclusion For the extraction and purification of this paper pointed out the direction and to further its development into new drugs of Chinese medicine to provide adequate experimental basis.

Key words：Ampelopsisgrossedentata chemical constituent Ampeloptin Myricetin Identification

藤茶又名显齿蛇葡萄，多年生木质藤本，来源于葡萄科蛇葡萄属蛇葡萄[1]的嫩枝叶。是一种传统中草药，为湖北省鄂西地区民间常用中药，通常于夏季摘嫩枝叶，置沸水中稍烫一下，即时捞起，沥干水分，摊放通风处至表面上有白霉时即烘干为霉茶。具有显著的消炎阵痛、祛痰止咳[2]、抑菌[3]、降血压、血脂[4]、抗肿瘤、增强免疫[5]、保肝护肝等生物活性，临床上主要用于治疗原发性高血压[6]。本文对霉茶及该属植物的研究进展进行资料收集和整理，采用显色反应和色谱法对霉茶进行了提取分离研究。

1 实验部分

1.1仪器与试剂 ①仪器：Agilent1100高效液相色谱仪、显微熔点测定仪、RE52-98型旋转蒸发仪、ZK072型电热真空干燥器、可见-紫外分光光度仪、ZF-6型三用紫外分析仪；②试剂：95%乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、无水乙醇、盐酸、硫酸、冰醋酸均为分析纯，碳酸氢钠、氢氧化钠、三氯化铝、三氯化铁、硅胶G（300目）、柱层析硅胶（200目）、聚酰胺（60～100目）、葡聚糖凝胶LH-20。

1.2实验材料 显齿蛇葡萄于2007年5月采摘于湖北省恩施州来凤县。经湖北中医学院鉴定教研室鉴定为葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的枝叶。

1.3化学成分的提取与分离 ①称取10kg干燥霉茶，以9倍量95%乙醇浸泡过夜后，回流提取2次，分别为2h、1h。滤过，合并滤液。减压真空浓缩至无醇味，得浓缩液共8000ml。浓缩液加一倍量蒸馏水稀释混匀后，分别以氯仿、乙酸乙酯依次萃取分为氯仿、乙酸乙酯及水3个部位，分别减压浓缩，得氯仿液2200ml，乙酸乙酯液3500ml。②取乙酸乙酯萃取部位干浸膏200g，用200g硅胶（100～200目）60℃水浴拌样，加入到2000g硅胶柱上端，进行柱色谱分离，依次用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，以500ml为一个流分，收集1～340号流分，薄层检识，合并相同流分，得到组分A～J。组分B经硅胶色谱柱、Sephadex LH-20色谱柱及重结晶等方法分离，得化合物Ⅶ、Ⅷ。

2 结构鉴定

2.1化合物Ⅰ 黄色针状结晶，mp324℃～325℃。Mg-HCl反应呈阳性，可能为黄酮类化合物。FeCl3反应呈阳性，多数黄酮类化合物分子中含有酚羟基故可与三氯化铁发生显色反应。Molish试验为阴性，说明是游离黄酮化合物。

与杨梅素对照品共薄层：将样品与杨梅素点于一块薄层板上，以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（10：8：5）和氯仿：甲醇：甲酸（30：15：1）为展开剂展开，以5%AlCl3乙醇液显色，结果显示样品在与标准品再相应的位置显单一的亮黄色斑点。因此确定化合物Ⅰ应为杨梅素。

2.2化合物Ⅱ 无色针状结晶，mp244℃～245℃。Mg-HCl反应呈阳性，可能为黄酮类化合物。Molish试验为阴性，说明是游离黄酮化合物。

与蛇葡萄素对照品共薄层：将样品与蛇葡萄素点于一块薄层板上以甲苯：乙酸乙酯：甲酸（10：8：5）和氯仿：甲醇：甲酸（30：15：1）为展开剂展开，以5%AlCl3乙醇液显色，结果显示样品在与标准品相应的位置显单一的亮黄色斑点。因此确定化合物Ⅱ为蛇葡萄素。

3 讨论

黄酮类化合物的颜色反应主要是利用分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环的性质。盐酸-镁粉反应为鉴定黄酮类化合物最常见的颜色反应。多数黄酮类化合物分子中含有酚羟基，故可与三氯化铁水溶液或醇溶液发生颜色反应。

在采用硅胶柱层析分离霉茶乙酸乙酯部位时存在分离效果差、多种展开系统拖尾等问题，故在粗分之后使用凝胶柱及聚酰胺柱进行分离纯化，凝胶柱分离情况良好。

4 结论

本论文采用系统溶剂法和色谱法对霉茶进行了提取分离研究：得到化合物Ⅰ、化合物Ⅱ。通过对其紫外色谱图的分析，以及进行的TLC、熔点测定，综合进行结构解析，确定了结构，分别为杨梅素、蛇葡萄素。本文通过化学成分研究，为药材作用物质研究奠定了基础，同时为化学对照品的来源增加了途径。

参考文献：

[1]湖北省卫生局.湖北中草药志・第二册[M].武汉：湖北人民出版社，1982：1078.

[2]钟正贤，覃洁萍，周桂芬，等.广西瑶族藤茶中二氢杨梅树皮素的药理研究[J].中国民族医药杂志，1998，4（3）：42-44.

[3]熊大胜，朱金桃.显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物抑菌作用的研究[J].食品科学，2000，21（2）：48-51.

[4]陈晓军，陈学芬，李茂，等.显齿蛇葡萄总黄酮降脂作用的研究[J].广西中医药，2001，24（5）：53-54.

[5]周宁宁，朱孝峰.无刺根中蛇葡萄素体外抗肿瘤作用研究[J].广东药学，2000，10（4）：7-8.

[6]湖北省恩施医专门诊部.草药霉茶治疗高血压50例疗效观察[J].中草药通讯，1978，8：39-41.编辑/成森