复方冰硼冲洗液体外抑菌效果的评价

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[摘要] 目的 评价纯中药制剂复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对4种牙髓病原菌的体外抗菌活性。方法 采用琼脂稀释法，测定复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对4种厌氧病原菌牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌和粪肠球菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果 2种冲洗液对4种厌氧病原菌均有抗菌作用，复方冰硼冲洗液的抗菌性优于冰硼冲洗液。粪肠球菌的抗药能力明显强于其余3种菌株。结论 纯中药制剂复方冰硼冲洗液具有良好的抗菌性，作为根管冲洗液可能是有优势的。

[关键词] 复方冰硼冲洗液； 根管冲洗； 抗菌性

[中图分类号] R 739.86 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.04.006

Evaluation on antimicrobial efficacy of Fufang Bingpeng irrigant： An in vitro study Shi Yan1， Yang Jian1， Chen Hao2. （1. Dept. of Conservative Dentistry and Endodontics， Stomatology Hospital of Nanchang University， Nan-chang 330006， China； 2. Dept. of Pharmacy， The Affiliated Hospital of Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330006， China）

[Abstract] Objective To evaluate the antimicrobial efficacy of Fufang Bingpeng irrigant and Bingpeng irrigant on four endodontic pathogen bacteria. Methods The agar dilution method was used to observe the antimicrobial activity of Fufang Bingpeng irrigant， Bingpeng irrigant against four selected endodontic pathogen bacteria（Porphyromonas gingi-valis， Prevotella intermedius， Fusobacterium nucleatum， Enterococcus faecalis）. Minimum inhibitory concentration and minimum bactericidal concentration was examined. Results Two irrigants had the antimicrobial activity against the anaerobic microorganisms. The antimicrobial efficacy of Fufang Bingpeng irrigant was better than that of Bingpeng irri-gant. Compared with others， Enterococcus faecalis had the strongest resistance. Conclusion Fufang Bingpeng irrigant has good antibacterial activity. As a root canal irrigant， Chinese medicine alteratives might be advantageous.

[Key words] Fufang Bingpeng irrigant； root canal irrigation； antimicrobial efficacy

根管内的细菌在牙髓和根尖周病中扮演重要的角色。根管治疗的成功取决于根管内感染的有效控制。根管冲洗是根管治疗的重要步骤，能有效去除根管内病原菌、残髓和牙本质碎屑，维持根管的清洁和非感染状态。根管冲洗液的种类很多，但都存在一定缺陷。中药具有独特的清热解毒、消肿止痛作用，且毒副作用小，作为根管冲洗液有其优势；但目前多数研究[1-2]尚停留在成品中药制剂上，其制剂的水溶液呈黄色，会对白色的牙体组织产生一定的染色作用，影响美观。本研究将白色中药——复方冰硼和冰硼按中医组方的原则进行配制，制成根管冲洗液，探索用于感染根管冲洗消毒的可行性。

1 材料和方法

1.1 实验药物的配制和分组

Ⅰ组：复方冰硼冲洗液，由冰片、硼砂、玄明粉、白芷、细辛共5味中药配制而成；Ⅱ组：冰硼冲洗液，由冰片、硼砂、玄明粉与蒸馏水稀释而成。2种冲洗液均由江西省中医学院附属医院配制。

1.2 实验菌株

实验菌株由口腔疾病研究国家重点实验室（四川

大学）提供，共4种：牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277，中间普氏菌ATCC 25611，具核梭杆菌ATCC 25286，粪肠球菌ATCC 19433。质控菌株为脆弱拟杆菌ATCC 25285。

1.3 仪器设备

DY-2型厌氧培养箱（浙江义乌冷冻机总厂），细菌多点接种仪（SAKUMA公司，日本），PB-10系列

pH计（北京赛多利斯天平有限公司）。

1.4 含药琼脂平皿的配制和药物实验液的配制

选用牛心脑浸液-辅助琼脂（beef heart infusion-

supplemented broth，BHI-S）（OXID公司，英国）培养

基作为实验培养基。分别取复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液，按照不同的体积比与温度为45～55 ℃的BHI-S琼脂混匀后倾注于无菌平皿中，配制成对倍递减的系列实验药物平板，冷却凝固后使用。将复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液的原液定为1（100%），药物

平板的稀释倍数及相应的稀释后体积分数分别为：2（50%）、4（25%）、8（12.5%）、16（6.25%）、32（3.1%）、

64（1.6%）、128（0.8%）、256（0.4%）、512（0.2%）、

1 024（0.1%）。

1.5 实验菌液的准备

在BHI-S琼脂表面复苏并纯化4种实验菌株，置于80%N2、10%CO2、10%H2条件下37 ℃培养48 h，取纯培养物接种于BHI肉汤培养基，培养条件同前，校正菌液密度为每毫升1.5×108个细胞，备用。

1.6 药物抑菌效果的评估指标和测定方法

最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）：肉眼观察无细菌生长，即振摇后实验管内液体清亮无浑浊或无沉淀生长，且涂片检查无细菌存在，血平板培养小于7个菌落形成的最低药物稀释体积分数为该药的MIC。最小杀菌浓度（minimum bac-tericidal concentration，MBC）：肉眼观察无细菌生长的试管培养物，涂片检查无细菌存在，血平板培养无菌落形成的最低药物稀释体积分数为该药的MBC。

用细菌多点接种仪分别取实验菌液（细菌密度为每毫升1.5×108个细胞）点种于不同稀释体积分数的系

列含药琼脂平皿表面，然后放置于培养箱培养后（培养条件同前）读取MIC和MBC结果。

1.7 溶液的pH值

用蒸馏水冲洗pH计电极，擦干，将电极置于2种药物的原液溶液中测其pH值。

2 结果

复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液原液的pH值分别为9.44和9.12；对4种厌氧菌株的MIC和MBC测定结果见表1和图1：2种冲洗液对4种厌氧菌均有抗菌作用，复方冰硼冲洗液的抗菌效果更好。

3 讨论

感染根管中是以厌氧菌为主的混合感染。刘长虹等[1]从临床感染根管的样本中检出的优势菌有牙

龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌、韦荣菌、消化链球菌、口腔拟杆菌、放线菌、乳杆菌等。粪肠球菌有致病潜力，对牙髓治疗抵抗性强，经常出现在根管治疗失败和持续性根尖周炎病例中[3]。据

此，本实验选择了感染根管的3种优势菌（牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌）和1种顽固菌（粪

肠球菌），来评价冲洗液的消毒效果。

目前最常用的根管冲洗液是次氯酸钠（NaClO）溶液和乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）溶液，另外还有过氧化氢、氯己定、MTAD、氯亚明、抗生素、碘伏、生理盐水等。NaClO具有良好的抗菌性和组织溶解性，价格便宜，使用期限长，缺点是毒性大，气味难闻，能漂白衣服，有潜在腐蚀性，有过敏现象。EDTA能去除根管壁玷污层，具有良好的清洁性，还能抗真菌和粪肠球菌，但使用过多会降低牙本质硬度。过氧化氢能有效杀灭厌氧菌，同时有发泡作用，利于根管内碎屑的排出，但对牙髓组织无溶解性，冲出根尖孔能引起气肿。氯己定具有广谱抗菌性，毒性低且无耐药性，但不具有组织溶解能力。MTAD是由四环素同分异构体、乙酸和Tween80去污剂组成的混合液，具有抗粪肠球菌能力，细胞毒性低，能有效去除玷污层，但不能有效杀灭真菌。氯亚明具有抑菌杀菌性能，但对组织的刺激和毒性大。抗生素具有潜在过敏性和细菌耐药性，不推荐在根管治疗中常规使用。碘伏具有广谱杀菌作用，其性质稳定、刺激性小、毒性小、无抗原性，但其原液呈黄色，易使牙体组织染色，也有可能过敏。各种冲洗液存在一定的优缺点，目前尚无一种非常理想的冲洗液。

本研究将成熟的中药——冰硼散（剔除朱砂成

分）引入口腔医学领域，并根据中药的药性特点，加入白芷和细辛，按照中医组方的原则配制出白色的复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液。冰硼散是用冰片配伍硼砂、朱砂、玄明粉研磨而成，具有良好的解毒、消肿、止痛作用。质量分数0.5%的冰片对葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌及部分致病性皮肤真菌等有抑制作用。硼砂主要含四硼酸钠，能清热解毒、消肿防腐。玄明粉主要含无水硫酸钠，具有消肿散结等功效。白芷主要含挥发油，能解表散寒、消肿排脓。细辛含挥发油，其主要成分为甲基丁香油酚，具有解热、抗炎、镇静、抗惊厥及局部麻醉作用[4]。5味天然中草药物合成的复方制剂，具有清热、解毒、消肿止痛等功能，其消毒、杀菌作用强，毒副作用小。

本实验中，复方冰硼冲洗液和冰硼冲洗液对牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌和粪肠球菌均有抗菌作用，而复方冰硼冲洗液较冰硼冲洗液的抗菌效果更明显。笔者分析，这是由于白芷和细辛的加入增加了复合制剂的药效之故。此外，本实验结果可以看出，粪肠球菌的耐药性强于其余3种菌株，这是因为粪肠球菌拥有一些毒力因子，如溶解酶、胞嘧啶、凝聚物、外激素等[5]，能抵抗氢氧

化钙的高pH值和其他根管内药物，并能在少量营养物的环境中存活，具有忍受长期饥饿的能力[6]。

根管冲洗液的抗菌作用与其浓度、pH值、温度等有关，药物浓度、pH值、温度越高，杀菌效果越明显[7]。根管冲洗液在根管内可提高局部pH值，使

主根管和侧支根管牙本质小管内的细菌在碱性环境中失去活力。复方冰硼冲洗液的pH值为9.44，冰硼冲洗液为9.12，均具有强碱性，杀菌效果明显。

笔者[8]在前期研究中探讨了复方冰硼冲洗液的清洁性能，本实验进一步证实了其抗菌性。中药来源广泛，性质温和，具有独特的清热消毒止痛作用，费用低，有效期长，且毒副作用小，无细菌耐药性[9]。复方冰硼冲洗液作为根管冲洗液有积极的应用前景。

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