生物磁化水对金顶侧耳液体发酵的影响

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摘要：在金顶侧耳液体培养过程中采用4种不同磁处理水，对空白对照组和4个处理下的金顶侧耳的菌丝生长情况及胞外酶活性进行测定。结果表明金顶侧耳液体培养中采用磁化水可促进金顶侧耳的胞外酶分泌，提高胞外酶活性，增加生物量，增加菌丝球数量，减小菌丝球体积。最佳磁处理水条件为30min处理组和60min处理组，其中对于羧甲基纤维素酶最佳处理组为30min处理组，峰值比空白对照组高45.5%。而对于淀粉酶分泌最佳处理组为60min处理组，峰值早于空白对照组1d出现，而且比空白对照组高12.4%。

关键词：食用菌；酶活性

中图分类号：S646.1 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2013）-01-0049-2

金顶侧耳[Pleurotus citrinopileatus Sing.] 又名榆黄蘑、金顶蘑，隶属于担子菌门（Basidiomycota）、层菌纲（Hymenomycetes）、伞菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholomataceae）、侧耳属（Pleurotus）。是一种营养十分丰富的食药用菌，富含氨基酸，经常食用有利于病体康复。野生的金顶侧耳主要分布在欧洲，东南亚，北美洲和中国的东北三省，河北广州和等地多发生于潮湿多雨的夏秋季节，主要腐生于榆、杨、柳、栎树等阔叶树木的立枯腐木上。[1-3]金顶侧耳的人工驯化栽培始于20世纪70年代，由王柏松等人在中国东北长白山地区使用菇木菌丝分离方法获得了金顶侧耳的野生菌种。[4]自20世纪80年代起，吉林，黑龙江，山西，浙江等省已经有大面积人工栽培。近年来，关于金顶侧耳的研究不断深入和扩展，而关于生物磁化水处理金顶侧耳的研究鲜有报道。磁化水处理可为农作物增产、改善品质提供新途径。本研究测定了液体培养过程中生物磁化水对金顶侧耳液体发酵的影响，现将试验结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 供试菌种和仪器

菌种来源：分离自野生金顶侧耳。

磁化设备：自行设计生物磁处理设备。

磁场强度：220mT。

1.2 液体培养基的配方

马铃薯200g， 葡萄糖20g， MgSO41.0g， KH2PO32.0g，pH自然。

1.3 试验处理

本试验在金顶侧耳液体发酵过程中使用不同磁化时长的磁化水，设计5个处理，分别为空白对照（CK），15min，30min，45min，60min。每个处理设20次重复。

1.4 液体菌种培养

将配制好的液体培养基分装于150mL三角瓶中，每瓶装入100mL。灭菌冷却后， 于超净工作台上接入已经纯化的直径为0.8cm，菌龄7d的平板菌种1片。然后将其放入（25±1）℃的恒温培养箱中静止24h， 再置入（25±1）℃，175r/ min恒温振荡摇床上振荡培养14d。

1.5 菌丝生物量的测定

每处理分别取3瓶发酵液，将发酵液用滤纸过滤， 滤液备用。后放入65℃恒温鼓风干燥箱内干燥至恒重。用电子天平称重、记录。计算公式：菌丝生物量（g/100mL）=菌丝干重（g）/发酵液体积（mL）

1.6 菌丝球计数

培养结束后，每个处理下取3瓶混匀进行计数并取平均值。

1.7 菌丝球直径测定

培养结束后，每个处理下分别取3瓶混匀，使用坐标纸进行直径测定。

1.8 粗酶液的制备

取滤液于4℃，5000r/min转速， 离心10min。取其上清液备用即可。

1.9 酶活力测定

羧甲基纤维素酶活的测定[5]，淀粉酶活性测定[6，7]。

2 结果与分析

2.1 不同处理下每天菌丝球生长情况

从表1可得，不同时长的磁处理水对菌丝生长情况均有促进，而且随着磁化时长的增加，菌丝球数量、菌丝球重量和生物量均增加，而菌丝球直径呈递减变化。磁化处理60min效果最佳，菌丝球数量比对照组高374%，菌丝球重量比对照组高264%，菌丝球直径减少78%，生物量积累比对照组高374%。

2.2 不同处理下对羧甲基纤维素酶分泌的影响

从表2可得，在金顶侧耳整个液体发酵过程中，5种处理的金顶侧耳纤维素酶活力变化总体趋势基本保持一致。纤维素酶活性在液体培养初期较低，呈逐渐升高趋势，到9d后呈下降趋势。30min处理组的羧甲基纤维素酶分泌量变化比其他处理组增幅大，峰值比CK组高83.7%，而且下降缓慢。其次为60min处理组和45min处理组，前者分泌量下降趋势缓于后者。

2.3 不同处理下对淀粉酶分泌的影响

淀粉酶是降解淀粉的重要催化剂， 淀粉在淀粉酶的作用下降解为低聚糖， 可直接为菌丝吸收。淀粉酶活力的大小与菌丝前期的生长速度有着密切的关系。由表3可知，在金顶侧耳液体培养过程中，不同时长的磁化处理水均对金顶侧耳淀粉酶的分泌有促进作用，60min处理组为最优选择，具体体现为：淀粉酶分泌量大，增幅高，且峰值提前一天出现，峰值出现后下降趋势缓慢，最低值也高于其他处理组。

3 结论

综上所述，本研究结果表明：金顶侧耳液体培养中采用磁化水可提高金顶侧耳的胞外酶分泌量及活性，增加生物量，增加菌丝球数量减小菌丝球体积。最佳磁处理水条件为30min处理组和60min处理组，这两种处理下的金顶侧耳胞外酶活性均明显增强。其中对于羧甲基纤维素酶最佳处理组为30min处理组，峰值比空白对照组高45.5%。而对于淀粉酶分泌最佳处理组为60min处理组，峰值早于空白对照组1d出现，而且比空白对照组高12.4%。

参考文献

[1] 图力古尔，李玉.我国侧耳属真菌的种类资源及其生态地理分布[J].中国食用菌，2001，20（5）：829.

[2] 上海农业科学院.中国食用菌志[M].北京：人民卫生出版社，1996：22.

[3] 黄年来.中国大型真菌原色图鉴[M].北京：中国农业出版社，1998：94.

[4] 王柏松，江日仁.金顶侧耳的生物学特性观察[J].食用菌，1988，10（3）：6.

[5] 刘德海，扬玉华，安明理，等.纤维素酶酶活的测定方法[J].中国饲料，2002，（17）：27-28.

[6] 周景祥，王佳芹，余涛.蛋白酶和淀粉酶活性检测方法探讨[J].山东饲料，2002，（5）：22-23.

[7] 张凤芹.不同糖类对鸡腿菇胞外酶活性及多糖分泌的影响[J].食用菌，1999，21（4）：5-6.

作者简介：赵海宁（1987-），女，锡伯族，吉林农业大学农学院在读研究生，研究方向：植物病理；刘淑艳（1970-），女，汉族，吉林长春人，吉林农业大学农学院教授。