五指毛桃种苗繁育技术研究

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摘要 切取五指毛桃0.2 mm茎尖作为外植体，研究其科学合理的种苗繁育体系。结果表明：最佳诱导培养基为MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，诱导率为55%；最佳增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，增殖倍数为4.8倍；最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.25 mg/mL+活性炭0.3 g/L，生根率为95%。

关键词 五指毛桃；茎尖；组织培养；培养基

中图分类号 S662.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0063-01

五指毛桃原植物为桑科叶榕Ficus hirta Vahl，又名五爪龙、五指牛奶、土北芪等，分布于我国西南部至东南部。其味辛、甘，性平，主治脾虚浮肿，食少无力，肺痨咳嗽，盗汗，带下，产后无乳，风湿痹痛，水肿，肝硬化腹水，肝炎，跌打损伤[1-2]。现代研究表明：五指毛桃水提物具有消化系统保护作用、平滑肌调节作用、抗氧化作用、杀菌抗炎作用，还能提高免疫功能[3-4]。五指毛桃还是药食同源的珍品，具有平肝明目，滋阴降火，健脾开胃，益气生津，祛湿化滞，清肝润肺等作用。五指毛桃始载于清朝《生草药性备要》，是一个多民族使用的民间草药，瑶、傣、侗、壮、黎、哈尼、景颇等多个民族的民间药书中都有记载。随着现代人们生活水平的提高，保健意识增强，市场对五指毛桃药材及深加工产品的需求量与日俱增，年用量超过 1万t。

五指毛桃市场供应基本依靠采挖野生资源。由于农民掠夺式的采挖，同时其自然繁殖能力弱，致使野生资源越来越少。五指毛桃为小灌木，分枝少，单株药材产量低，需要高密度种植才能取得较高的经济效益，用种量2.7万株/hm2，若种苗的价格过高，容易造成投资大于产出，这是人工种植至今无法顺利开展的主要原因。因此，培育出高性价比的种苗，是开展五指毛桃规模化人工种植的关键。

1 材料c方法

1.1 试验材料

材料来自桂林亦元现代技术有限公司建立在兴安漠川乡的种源基地。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体处理。选择连续3 d晴天的上午，采集健壮、无病虫害的当年生顶芽作为外植体。去掉叶片，剪成3～5 cm，放置灭菌瓶中，用流动水冲洗15 min。在超净工作台上，用75%酒精浸泡消毒30 s，再用0.1%升汞浸泡灭菌6～8 min，用无菌水冲洗4～6次，备用[5]。

1.2.2 初代培养。在显微镜上用顶芽切取0.2 mm的茎尖，转接到初代培养基中：MS+BA 0.3～1.1 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL、MS+KT 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL，以外植体出芽时间、出芽率为指标，筛选出最佳诱导培养基。

1.2.3 继代培养。将初代诱导出的丛生芽剪切成单芽或带腋芽的茎段，转接到继代培养基中MS+BA 0.5～0.8 mg/mL+NAA 0.1～0.3 mg/mL。培养1个月后记录苗的生长情况和增殖倍数，筛选出最佳的继代增殖培养基[6]。

1.2.4 生根培养。将继代苗剪成单芽或带腋芽的茎段，转接到生根培养基中1/2MS+NAA 0.25～1.00 mg/mL，每组处理20瓶，每瓶转接15株，培养1个月后记录苗的生长情况、生根数量、生根的质量，筛选出最佳的生根培养基。

以上培养基均添加3%蔗糖，琼脂5 g/L，pH值5.8～6.0；生根培养基另外还添加活性炭3 g/L。培养温度为（25±2） ℃，光照强度1 800～2 000 lx，光照时间10 h/d；另外，生根培养先暗培养5～7 d后进行光照培养。

2 结果与分析

2.1 不同初代培养基对五指毛桃萌芽的影响

切取茎尖接到初代诱导培养基中，5 d左右开始膨大，20 d后变绿色，长丛生芽。从表1可以看出，在BA、KT浓度相同的情况下，BA的诱导率比KT高，效果较好；当BA浓度为0.3～0.5 mg/mL时，诱导率随着浓度的增加而增加，且苗生长正常；当BA浓度为0.8～1.1 mg/mL时，诱导率随着浓度的增加而降低，外植体愈伤较大，且苗有玻璃化、褐化。因此，最佳的诱导培养基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL。

2.2 不同继代培养基对五指毛桃增殖的影响

从表2可以看出，在浓度为BA 0.5 mg/mL时，随着 NAA用量的增加，倍数也增加，但当NAA浓度达到0.3 mg/mL，苗开始出现玻璃化。在浓度为BA 0.8 mg/mL时，随着NAA用量的增加，增殖倍数反而降低。因此，最佳的增殖继代培养基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL。

2.3 不同生根培养基对五指毛桃生根的影响

从表3可以看出，培养基1/2MS+NAA 0.25 mg/mL生根率较高，基部愈伤小，根条数、须根多，后期移栽容易成活；培养基1/2MS+NAA 0.5 mg/mL生根率最高，但是生根苗的基部愈伤大，须根少，移栽时成活率低；培养基1/2MS+NAA 0.75 mg/mL、1/2MS+NAA 1.0 mg/mL NAA用量高，导致苗生根率低、根少，且不长须根，后期移栽成活率低。因此，最佳的生根培养基是1/2MS+NAA 0.25 mg/mL，生根率为95%。

3 结论与讨论

五指毛桃表面带有绒毛，植株多浆。用茎段作为外植体灭菌较难，污染率高，培养过程中，容易褐化。本试验采用茎尖进行诱导，减少污染、褐化，容易诱导丛生芽。

植物生长调节剂种类和质量浓度对五指毛桃的诱导、分化和生根有较大影响。初代对BA、KT进行筛选，结果表明BA作用较好；在增殖培养中，选用BA、NAA进行组合搭配试验，筛选出了最佳的搭配组合为MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL，增殖倍数为4.8倍；最佳的生根配养基为1/2MS+NAA 0.25 mg/mL，生根率为95%。

4 参考文献

[1] 南京中医药大学.中药大辞典[M]上海：上海科学技术出版社，2006：29.

[2] （中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：人民卫生出版社，1977：90-91.

[3] 王伟伟，陈瑶.五指毛桃的化学成分和药理作用研究进展[J].中国民族民间医药，2013（3）：41.

[4] 岁骞，席萍，廖雪珍，等.五指毛桃水煎液的药理安全性实验[J].今日药学，2009（2）：12-13.

[5] 河源市金源绿色生命有限公司.一种五指毛桃规范化产业化种子繁殖的种植方法：中国，200410051711.8[P].2006-04-05.

[6] 李林轩，吴庆华，蔡锦源，等.五指毛桃组织培养获得再生植株的研究[J].中草药，2014，45（17）：2547-2551.