索拉非尼纳米混悬剂的稳定性研究
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[摘要] 目的 研究索拉非尼纳米混悬剂的物理稳定性和化学稳定性。 方法 观察不同温度和时间下纳米混悬剂的粒径和多分散指数（PDI）的变化，并用HPLC对不同时间内索拉非尼纳米混悬剂的浓度进行测定并绘制其降解曲线。 结果 索拉非尼纳米混悬剂避光放于4℃下物理稳定性良好，粒径和PDI变化不大；索拉非尼纳米混悬剂与溶解状态的索拉非尼相比，化学稳定性显著改善，有效药物浓度的降解速度明显降低。 结论 将索拉非尼制成纳米混悬剂稳定性显著改善，可长期保存。
[关键词] 索拉非尼；纳米混悬剂；物理稳定性；化学稳定性
[中图分类号] R965 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）05（c）-0120-04
[Abstract] Objective To investigate the physical stability and chemical stability of Sorafenib Nanosuspension. Methods The change of size and PDI under different temperature and time were observed. The concentration of Sorafenib in different time was determined by using HPLC and its degradation curve was drawed. Results Sorafenib Nanosuspensions had little change in particle size and PDI， had a good physical stability in the dark at 4℃. The degradation rate of Sorafenib Nanosuspension highly decreased compared with the reference methanol solution of Sorafenib， which meant the good chemical stability of Sorafenib Nanosuspension. Conclusion The stability of Sorafenib can be improved significantly when it is prepared to nanosuspension. It can be long-term preserved.
[Key words] Sorafenib； Nanosuspension； Physical stability； Chemical stability
索拉非尼是一种新型二芳基脲类和口服多靶点分子靶向药物[1]，它的问世开创了进展期肝细胞癌系统治疗的里程碑[2-3]。它可以通过抑制血管内皮生长因子受体-2、FLT3、Ret、c-Kit受体酪氨酸激酶和血小板衍生生长因子受体而起作用，可阻断肿瘤细胞增殖和血管形成[4-6]。索拉非尼在临床上的应用主要为片剂，但是因其药物分子难溶于水，生物利用度低，副作用较严重，限制了其在临床上的应用。
纳米混悬剂是采用少量表面活性剂稳定药物粒子所形成的一种亚微米胶体分散体系，是一种分散度极好的固体药物粒子水分散体系[7]。常采用高分子聚合物作为载体来增加药物的溶解度和生物利用度[8-9]。目前已广泛应用于各种给药途径（口服、静注、肺部、经皮和眼部给药等）制剂的制备[10-12]。本实验采用乳化法将索拉非尼制成纳米混悬剂，并对其稳定性进行研究。
本实验采用粒径及多分散指数（poly dispersion index，PDI）随时间的变化来表征其物理稳定性；采用高效液相色谱法测定不同时间段内索拉非尼纳米混悬剂和索拉非尼原料药的浓度，并绘制降解曲线测定其化学稳定性。
1 仪器与试药
1.1 仪器
FA25智能型高剪切分散乳化机（上海弗鲁克流体机械制造有限公司），旋转蒸发仪（RE52CS，上海亚荣生化仪器厂），HPLC（Aglilent 1100，美国），UV-1800紫外分光光度计（日本），JEM-2100（HR）高分辨透射电镜（日本Jeol公司），Zetasizer ZS90型激光粒度仪（英国Malvern公司），恒温培养摇床（ISO 13485，上海一恒科学仪器有限公司）。
1.2 试药
索拉非尼原料药（湖北省武汉创成药业有限公司，含量：99.0%，批号：20140306），索拉非尼对照品（上海翰香生化制品有限公司，含量：99.4%，批号：PY131206），聚乙烯吡咯烷酮K30（广东省深圳优普惠公司），Eudragit RS 100（国药集团化学试剂有限公司），乙酸铵（分析纯，天津市博迪化工有限公司），乙腈（色谱纯，美国天地公司），甲醇（色谱纯，美国天地公司），水为超纯水（实验室自制），其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
本实验前期已通过单因素试验优选出制备索拉非尼纳米混悬剂的最佳有机溶剂为丙酮∶甲醇（3∶1），表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。将索拉非尼按最优处方制备成纳米混悬剂，精密称取表1所示的药物和载体Eudragit RS100，加入适量的丙酮∶甲醇（3∶1）中超声溶解，形成有机相，将体系的pH值用稀盐酸调节为4；另取PVP，溶解于水中，形成含1% PVP的水相。搅拌下将有机相缓慢滴加进水相中，继续搅拌30 min。40℃下减压蒸发除去有机溶剂。并在10 000 r/min下高剪切10 min，即得。
制备的9组索拉非尼纳米混悬剂都具有较小的平均粒径和PDI，粒径在80～120 nm范围，PDI值均 0.300，集中于0.190～0.250，粒径分布比较均匀。当投药量为2 mg，有机相与水相比例为1∶4时，平均粒径最小，PDI = 0.231，粒径分布比较均匀，选为最优处方。见表1。
2.1 粒径分布及Zeta电位测定
Zetasizer ZS90型激光粒度仪测定纳米粒子的粒径、PDI及Zeta电位，将制备的索拉非尼纳米混悬液用蒸馏水稀释10倍，进行测定。结果见图1，平均粒径为（89.76±5.36） nm，平均PDI为（0.231±0.072），平均Zeta电位为（36.7±0.5） mV。
2.2 形态观察
将制备的索拉非尼纳米混悬液稀释5倍，过膜，滴加到覆盖碳膜的铜网上，干燥后用2%（W/V）的磷钨酸染色，用滤纸吸去多余的液体，晾干后在JEM-2100（HR）高分辨透射电镜下观察形态，拍照。结果见图2，可以看出，所制备的纳米粒为均匀球形，粒径较小且分布均匀。
2.3 物理稳定性的检测
将制备的索拉非尼纳米混悬剂装入棕色小瓶中，分别避光保存在4℃和室温环境下，放置1个月。测定其放置前后粒径和PDI的变化。粒径和PDI变化见图3。将制备的索拉非尼纳米混悬剂放在4℃环境下，分别于30、60 d测定其粒径大小和PDI，结果见图4。
图3显示，索拉非尼纳米混悬剂避光放于4℃下比放于室温下的粒径和PDI变化更小，更加稳定。图4可见，随着放置时间延长，粒径和PDI两项指标均有所增加，但变化都不是非常明显；PDI虽然有所增加，但仍然保持在0.5以下，表明体系中少量粒子发生了聚集。
2.4 化学稳定性的检测
2.4.1 色谱条件 色谱柱为Inertsil ODS-3柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相乙酸铵缓冲液（20 mmol/L）-乙腈（28∶72），检测波长266 nm，流速1.0 mL/min，柱温40℃，进样量 20 μL。
2.4.2 标准曲线的绘制 精密称取索拉非尼对照品10 mg，置100 mL量瓶中，用流动相溶解定容，然后用流动相依次稀释成浓度为1、5、10、15、20、25、30、40、50 μg/mL的一系列标准液，按以上色谱条件测定浓度，依次进样20 μL，记录色谱峰面积。以峰面积（A）对质量浓度（C）进行线性回归，得标准曲线：A = 78.862C-32.897（r = 0.9999），说明索拉非尼浓度在1～50 μg/mL范围内具有良好的线性关系。
分别在见光与避光的条件下，用HPLC测定在4℃放置下不同时间段内索拉非尼纳米混悬剂及索拉非尼原料药溶解液的药物浓度，描绘出其降解曲线，进行对比，结果见图5。索拉非尼纳米混悬剂在4℃避光条件下降解速度明显降低，10 d内降解了10%左右，以后趋于平稳只是发生极少降解，可长期保存。在见光条件下，10 d内降解30%左右，随着时间延长，降解量逐渐增大；溶解状态的索拉非尼药物避光条件下10 d内降解70%，见光条件下5 d内降解80%，结果表明在混悬液中以纳米粒子形式存在的药物比溶解状态的药物稳定，索拉非尼纳米混悬剂的降解速度明显降低，特别是在避光条件下，说明索拉非尼纳米混悬剂显著改善了此药物的化学稳定性。
3 讨论
纳米混悬剂作为一种新的制剂技术，它具有高饱和溶解度、黏膜吸附性、高溶出速率等特点，可有效提高难溶性药物的药效和生物利用度[13-14]。但纳米混悬剂稳定性较差是其最大的问题，很容易发生降解、沉降、聚集、变性等各种不稳定现象[15-16]，给纳米混悬剂的制备带来了较大挑战，是其被广泛应用的最大障碍。本实验对索拉非尼纳米混悬剂的物理稳定性和化学稳定性进行研究。
影响纳米混悬剂的因素主要有稳定剂类型、分散介质和药物自身介质等。本实验已在前期工作中优选出稳定剂类型、分散介质等，制备的索拉非尼纳米混悬剂粒径较小，分布均匀，稳定性良好。在4℃和室温条件下放置一段时间后，4℃下粒径和PDI变化比室温条件下小，说明索拉非尼纳米混悬剂在4℃下比在室温条件下更稳定。这与奥斯特瓦尔德熟化现象有关，混悬剂溶液在总体上是饱和溶液，小微粒因溶解度大而不断溶解，大微粒则因过饱和而不断增长变大，这一过程被称为奥斯特瓦尔德熟化[17]。van Eerdenbrugh等[18]在实验中证实，奥斯特瓦尔德熟化与温度密切相关，室温条件下，纳米混悬剂会发生奥斯特瓦尔德熟化，40℃的条件下奥斯特瓦尔德熟化现象增强，而较低的4℃条件下，奥斯特瓦尔德熟化减慢，甚至停止，所以索拉非尼纳米混悬剂在4℃比在室温条件下更稳定。将索拉非尼制备成纳米混悬剂，在相同条件下，降解速度比溶解状态的索拉非尼慢很多，说明索拉非尼纳米混悬剂显著改善了此药物的化学稳定性。将药物制成纳米混悬剂，通过加入稳定剂来抑制纳米粒子的成长，稳定剂一般通过立体稳定、静电稳定和静电立体稳定3种机制达到对药物分散体系的稳定作用，防止粒子间的聚集[19]，所以将药物制成纳米混悬剂比溶解状态更加稳定。
纳米混悬剂虽已被认为是一种成熟的制剂技术，但是稳定性问题仍是制约其发展的重要方面，要想使纳米混悬剂向工业化发展，稳定性首先是其亟待解决的问题，随着制备方法的不断改进和粒子稳定理论的不断研究与深入，在不久的将来，一定会制备出稳定性好、生物利用度高的纳米混悬剂。
[参考文献]
[1] 张洪，福明，闫士君.索拉非尼固体脂质纳米粒冻干粉制备及体外释药特性研究[J].中国药学杂志，2013，48（3）：196-202.
[2] Bruix J，Sherman M. Management of hepatocellular carcinoma [J]. Hepatology，2005，42（5）：1208-1236.
[3] Abou-Alfa GK，Schwartz L，Ricci S，et al. Phase Ⅱ study of sorafenib in patients with advanced hepatocellular carcinoma [J]. J Clin Oncol，2006，24（26）：4293-4300.
[4] Chang y S，Adnane J，Trail PA，et al. Sorafenib（Bay 43-9006）inhibits tumor growth and vascularization andinduces tumor apoptosis and hypoxia in RCC xenograft models [J]. Cancer Chem Pharm，2007，59（5）：561-574.
[5] Llovet JM，Ricci S，Mazzaferro V. Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma [J]. N Engl J Med，2008，359（4）：378-390.
[6] Zhu AX. Development of sorafenib and other molecularly targeted agents in hepatocellular carcinoma [J]. Cancer，2008， 112（2）：250-259.
[7] 钱帅，张建军，高缘，等.纳米混悬剂研究进展[J].药学进展，2007，31（1）：9-14.
[8] Gelperina S，Kisich K，Iseman MD，et al. The potential advantages of nanoparticle drug delivery systems in chemotherapy of tuberculosis [J]. Am J Respir Crit Care Med，2005，172（12）：1487-1490.
[9] Clark MA，Jepson MA，Hirst BH. Exploiting M cells for drug and vaccine delivery [J]. Adv Drug Deliv Rev，2001，50（1-2）：81-106.
[10] Fakes MG，Vakkalagadda BJ，Qian F，et al. Enhancement of oral bioavailability of an HIV-attachment inhibitor by nanosizing and amorphous formulation approaches [J]. Int J Pharm，2009，370（1-2）：167-174.
[11] Pilcer G，Vanderbist F，Amighi K. Preparation and characterization of spray-dried tobramycin powders containing nanoparticles for pulmonary delivery [J]. Int J Pharm，2009，365（1-2）：162-169.
[12] Mishra PR，Al Shaal L，Müller RH，et al. Production and characterization of Hesperetin nanosuspensions for dermal delivery [J]. Int J Pharm，2009，371（1-2）：182-189.
[13] 徐清，黄琴琴，王永禄，等.纳米混悬剂物理稳定性的研究进展[J].中国医药工业杂志，2012，43（2）：148-152.
[14] 陈莉，汤耄陆伟根.纳米混悬剂粒径稳定性及其控制策略[J].世界临床药物，2010，31（4）：245-249.
[15] van Eerdenbrugh B，van den Mooter G，Augustijns P. Topdown production of drug nanocrystals：nanosuspension stabilization，miniaturization and transformation into solid products [J]. Int J Pharm，2008，364（1）：64-75.
[16] Welin-Berger K，Bergenstahl B. Inhibition of Ostwald ripening in local anesthetic emulsions by using hydrophobic excipients in the disperse phase [J]. Int J Pharm，2000，200（2）：249-260.
[17] 谢向阳，陈晨，廖祥茹，等.纳米混悬剂的物理稳定性研究进展[J].国际药学研究，2011，38（5）：369-374.
[18] van Eerdenbrugh B，Froyen L，van Humbeeck J，et al. Drying of crystalline drug nanosuspensions the importance of surface hydrophobicity on dissolution behavior upon redispersion [J]. Eur J Pharm Sci，2008，35（1-2）：127-135.
[19] Fakes MG，Vakkalagadda BJ，Qian F，et al. Enhancement of oral bioavailability of an HIV-attachment inhibitor by nanosizing and amorphous formulation approaches [J]. Int J Pharm，2009，370（1-2）：167-174.
（收稿日期：2014-12-11 本文编辑：李亚聪）