乳腺原发癌和淋巴结转移癌发病探索
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乳腺癌为恶性肿瘤，在临床中常见。近年来随着人们生活习惯的改变，乳腺癌发病率逐渐上升，而临床却无法有效控制其病死率［1］。对于乳腺癌患者而言，转移是导致其病死的主要原因。肿瘤转移过程极其复杂，与生物学有关，当前使用常规病理学无法准确评估不同患者肿瘤转移潜能以及预后［2］。而经大量研究后发现HER－2基因密切关联于乳腺癌患者的治疗方案，例如化疗、内分泌、Herceptin、预后等方案的选择［3］。本文为探讨使用荧光原位杂交技术检测乳腺原发癌和淋巴结转移癌HER－2基因的表达及意义，现选取患者40例作为研究对象，回顾性分析其临床资料，并报道如下。
1资料与方法
1．1一般资料
选取海口市人民医院2013年1月至2014年1月收治的乳腺原发癌患者40例作为研究对象，收集所有患者的手术切除标本，应用荧光原位杂交技术（FISH）与免疫组织化学技术（IHC）对所有患者手术切除标本的HER－2基因表达予以检测。40例患者年龄31～79岁，平均（56．3±4．7）岁；38例为浸润性导管癌，浸润性小叶癌与浸润性导管－小叶癌各为1例。使用10％中尔马林对所有标本予以固定，并使用常规石蜡进行包埋处理。
1．2方法
FISH检测法：组织切片每片为2μm，将其放置于载玻片上，之前已使用L－多聚赖氨酸对载玻片予以处理，而后放置于65℃环境下烘烤，过夜后按照试剂盒说明书严格规范试验操作。FISH试剂盒产自北京金菩嘉。IHC检测法：组织切片每片为4μm，将其放置于载玻片上，之前已使用L－多聚赖氨酸对载玻片予以处理，而后放置于65℃环境下烘烤，时间持续1h，而后按照试剂盒标准严格规范操作，该试剂盒产自福州迈新。质量控制：载玻片经多聚赖氨酸处理后，设置不同的DNA样品区，将不同DNA样品溶液分别加到其上，风干后紫外交联仪照射，使DNA结合到玻片上，得到简化的染色体片，而后进行免疫检测，通过不同区域信号的反应得出荧光原位杂交质量反馈。采用本监控方法，可以快速地锁定杂交过程中出现问题的中间环节，并进行相应的纠正，从而快速高效地应用FISH技术。
1．3结果判定标准
FISH：对30个细胞核予以计数，对Ra－tio（细胞核中红信号总数与率信号总数的比值）予以统计，若Ratio在1．8以下则为阴性，说明该样本中不存在HER－2基因扩增现象；若在2．2以上则为阳性，说明该样本中存在HER－2基因扩增现象；若Rati在1．8～2．2，则可计数100个细胞核，或者再次开展FISH检测对最终结果予以判断。IHC：若癌细胞出现棕褐色则代表为阳性，结合染色强度对阳性程度予以划分，主要有弱阳性（＋）：10％以上的肿瘤细胞有不完整且微弱的细胞膜着色；中度阳性（＋＋）：10％以上的肿瘤细胞有完整且弱或者中度的细胞膜着色；强阳性（＋＋＋）：10％以上的肿瘤细胞有完整且强的细胞膜着色。
1．4统计学处理
应用SPSS22．0对全部数据予以统计学处理，对比以P＜0．05为差异有统计学意义。
2结果
2．1两种检测方法的HER－2基因表达对比
FISH检测后阳性17例（42．5％），IHC阳性23例（57．5％）。两者符合率如表1所示。
2．2HER－2基因表达与淋巴结转移的关系
淋巴结转移与淋巴结未转移阳性率对比，差异有统计学意义（P＜0．05）。见表2。
3讨论
HER－2基因存在于人体17q21，185×103跨膜糖蛋白为其编码分子，属于原癌基因。一般而言HER－2基因不会诱发肿瘤，其自身有诸多Tyr（酪氨酸残基）磷酸化位点，在受体分子膜区亦存在PTK（酪氨酸蛋白激酶）活性［4－5］。当生长因子结合于HER－1、3或者4后，会引发蛋白膜外区构象产生变化，结合于HER－2生成异二聚体，增加细胞膜内的PTK活性，致使Tyr自身出现磷酸化。存在于HER－2蛋白膜内段的磷酸化位点为识别PTK底物的位点，可对特定信号蛋白产生作用［6－7］。因此，Tyr是否出现磷酸化对于下游底物分子的解离与结合状态有决定作用，可对信号转导予以调节。一旦失控会持续开启增殖信号途径，进而诱发肿瘤。HER－2指标不仅密切关联于肿瘤发展，同时还可作为预后指标［8－10］。当前诊断HER－2基因主要有IHC与FISH法，前者操作简易，重复性好，且成本低，敏感性较强，故而使用广泛，但是会致使抗原决定簇丢失，且经标准化固定后会改变抗原进而降低其敏感性，会导致检测结果出现假阳性或者假阴性，对其精确性存在影响［11］。FISH主要是对DNA予以检测，具有较高的可重复性、特异性以及稳定性，且不会受到主观因素的影响，客观性较强，因此世界卫生组织将其作为金标准［12］。在本研究中，使用IHC与FISH法对乳腺原发癌与淋巴结转移癌HER－2基因表达予以检测后发现FISH阳性率为42．5％，IHC为57．5％；IHC阴性时与FISH符合率为88．2％，IHC（＋）与FISH符合率为37．5％，IHC（＋＋）与FISH符合率为83．3％，IHC（＋＋＋）与FISH符合率为100．0％。淋巴结转移阳性率为66．67％，未转移阳性率为32．14％，对比差异有统计学意义（P＜0．05）。与宋宝等［13］的研究结果相近。综上所述，IHC对HER－2基因予以检测时若结果为阴性或者强阳性则与FISH符合率较高，同时HER－2基因表达与腋淋巴结转移之间呈正相关关系。
作者：钟威达 单位：海南省海口市人民医院检验科 海南妇产科医院检验科