固相萃取—高效液相色谱检测法测定蛋制品中三聚氰胺残留量
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摘要：三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机物。其化学式为C3H6N6，在化工生产中经常被使用到。在我国的食品标准中规定了三聚氰胺在蛋制品的含量不得超过1mg/kg。但是目前在市面上，仍然存在着一些不合格的蛋制品，其三聚氰胺的含量远远超过了国家标准含量。在蛋制品三聚氰胺残留量的检测过程中，通过固相萃取-高效液相色谱检测法可以准确地测定出其中三聚氰胺的残留量。本文对固相萃取-高效液相色谱检测法测定蛋制品中三聚氰胺残留量做出了综合性的阐述。
关键词：高效液相色谱 固相萃取 三聚氰胺
0、引言
三鹿毒奶粉事件的发生让三聚氰胺重新回到了人们的视野中。三聚氰胺经过水解会得到氨与氰尿酸，而上述两种物质会对人体的肾功能带来较大的影响。在我国的食品标准中具有明确的规定，三聚氰胺在蛋制品的含量不得超过1mg/kg[1]。但是一些不法商家为了提高产品中的粗蛋白含量，从而获取更高的经济利润在食品中添加大量的三聚氰胺，这严重影响了消费者的权益，并给消费者带来了严重的健康威胁。为了让这些不合格产品不能流向市面，就需要在检测环节上加大力度，对这些非法违章行为进行严厉的打击，以此来维护消费者的正常权益。在蛋制品三聚氰胺残留量的检测中一般会采用固相萃取-高效液相色谱检测法，该方法能够准确地测定出三聚氰胺残留量，具有很好的适用性[2]。
1、三聚氰胺的基本性质
三聚氰胺外观呈现为白色、单斜晶体，其熔点为300度，相对密度为1.573，相对蒸汽密度为4.34，饱和蒸汽压为6.66kPa，在20度时水中的溶解度为0.33g，其水溶性较差，易溶于有机溶剂如（HOCH2）?乙二醇、CH3CH2OH（乙醇），不溶于CCl4（四氯化碳）、C4H10O（乙醚）[3]。
2、三聚氰胺残留量具体检测实验
2.1实验试剂与实验仪器
主要实验仪器：高效液相色谱仪（Agilent1100）、固相萃取柱、高速离心机、氮吹仪等。
主要试剂：甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、NaOH（分析纯）、蒸馏水、氨水（分析纯）、正丁烷（分析纯）等。
2.2实验方法
2.1.1样品测定
取蛋制品2.0g作为样本，放入离心管中，加入NaOH（分析纯）0.15ml以及浓度为20%的氨水乙腈提取液8.0ml。通过振荡器将上述样品进行激烈震荡10分钟，然后调节振荡器工作状态进行中速震荡保持半个小时。
将上述样品放入旋转蒸发仪当中，温度控制在40-45度之间，将其蒸干。之后加入3ml乙腈进行溶解，反复2-3次、加入4-6ml正丁烷进行震荡，在2000 ×g条件下进行离心，时间为10分钟，将分离出来的正己烷层去除。
离心所得到的下层要用N2（氮气）进行处理，将其吹干。之后加入1-2ml的乙腈（色谱纯）进行溶解，所得到的溶剂置入固相萃取柱中，需要注意的是固相萃取柱在使用之前应该用乙腈（色谱纯）进行润洗。在固相萃取柱填充完毕以后，用5.0ml的20% 氨水乙腈溶液进行洗脱。对洗脱液进行处理，在水浴的情况下用N2（氮气）吹干洗脱液，温度控制在40度至45度之间。对于其中的残渣一定要用流动相将其溶解，同时进行定容，体积为1ml。
2.2.2标准曲线的设定
对贮备液进行稀释处理，配制相应的标准液，其浓度为0、0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00μg/ml。对其中的每个浓度重复测定5次，根据测定结果的平均值描绘出相应的标准曲线，以此来作为样品定量的标准。
2.2.3测定样品的回收率
取2.0g蛋制品样品放入离心管中，并将已配制好的标准液加入到离心管中，在混合以后静置15分钟左右按照上述实验方法进行测定并计算相应的回收率。添加浓度为0.02、0.05、0.10mg/kg，每个浓度的样品重复测定5次。
3、实验结果及讨论
对上述各浓度的三聚氰胺标样进行色谱测定，得到相关线性回归方程为y=200.03x-0.7654，r=0.9994，其中x为样品液的浓度，而y即为峰面积，标准曲线如上图所示。从图中可以明显地发现该线性范围与测定标准相符合，即说明了在测定蛋制品中三聚氰胺残留量的过程中，固相萃取-高效液相色谱检测法具有较高的可靠性。
通过上表可以看出不同添加浓度下蛋制品三聚氰胺的回收率，其范围为82.1%至86.7%。
对上述结果进行相应的讨论。在提取样的过程中，如果是用乙腈或者是乙酸乙酯去进行操作，其效果并不理想，其中杂质含量较高而回收率也较低。对三聚氰胺的化学结构进行相应的分析，其中含有3个氨基，因此在碱性溶液中的溶解度较好[4]。本实验采用了2 0 % 氨水的乙腈溶液对样品进行提取，取得了较好的效果，具有良好的回收率并且杂质较少。氨水与乙腈的极性较大，在提取样品的过程中会提取蛋制品中的一部分色素与脂肪，所以通过氮气吹干，并用旋蒸仪进行浓缩，以此来对这部分脂质和色素进行净化，这样将能够保证整体性的测量效果，让实验测定的结果更为准确。
4、结语
通过本实验对固相萃取-高效液相色谱检测法测定蛋制品中三聚氰胺残留量进行了说明，并提出了相应的检测方案。通过实验结果可以发现固相萃取-高效液相色谱检测法具有良好的可操作性，并具有很高的实验效率，同时具备很高的准确率，能够准确的测定蛋制品中三聚氰胺的含量。
参考文献：
[1]王登飞，黄智辉，郑俊超，王瑞龙.固相萃取-HPLC法测定水产品中三聚氰胺残留量[J].水产科学.2011（10）：112-113.
[2]曹维强，黄刚，吕飞，佘永新，王静.固相萃取液相色谱-二极管阵列检测器测定猪肾中三聚氰胺[J].分析试验室.2011（02）：145-146.
[3]楼文斌，徐艳艳，刘亚丽.高效液相色谱法测定大米蛋白中的三聚氰胺[J].现代食品科技.2011（10）：124-126.
[4]刘梅，李金强，田德金，李佩暖，曹鹏.固相萃取-液相色谱-串联质谱法检测食品中的三聚氰胺[J].化学分析计量.2012（12）：123-126.