南海海绵Axinellasp化学成分研究
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1材料与方法
1.1仪器、试剂及材料
BruckerAV400核磁共振仪（TMS内标）；旋光仪：MC241digitalpolarimeter（PERKIN－ELMER）；液质联用色谱仪：Alliance2695,QuattroMicroTMESI（Water）；半制备高效液相色谱仪：日本分光公司（JASCO），PU－2089（泵），RI－2031和UV－2075（检测器）；制备HPLC色谱柱,C-18反相色谱柱：YMC-PackODS-ASH-343-5（20mm×250mm）；氚代试剂（ALDRICH公司）；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工生产,所用试剂均系分析纯。本文所用海绵采自于中国南海西沙群岛海域,经天津医科大学药学院唐生安博士鉴定为南海海绵axinellasp.,标本编号为NHA-1,保存于天津医科大学药学院。
1.2提取分离
将海绵Axinellasp.(湿重2.5kg)均匀剪碎后，用95%乙醇（3000mL）浸提3次,提取液合并后浓缩得浸膏。浸膏用少量甲醇连续脱盐3次,合并甲醇提取液，浓缩得总提取物87.5g。将总提取物分散于蒸馏水中,连续用石油醚萃取3次,合并石油醚层萃取液并浓缩,得石油醚层萃取组分12.1g。水层继续加入正丁醇萃取3次,然后浓缩最终得正丁醇层萃取组分30.3g,水层浓缩后得萃取组分43.6g。取正丁醇层萃取物用硅胶柱色谱进行初步分离,以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（95∶50∶100），得到0101-0118个组分，其中0112号样品（344．9mg）经验证为单体化合物，即化合物1。0108组分采用半制备HPLC色谱分离,用ODS-A柱，以甲醇∶水=1:9（加3‰的冰醋酸）为流动相洗脱，经分离得到化合物2（52．1mg）。0103组分采用硅胶柱色谱进行分离，以二氯甲烷－甲醇梯度洗脱（20∶10∶100）得到化合物3（9．4mg）、4（22．7mg）、5（4．7mg）、6（4．0mg）、7（9．3mg）。
2结果
2.1化合物
1debromohymenialdisine,浅黄色粉末,ESI-MS给出准分子离子峰m/z:246[M+H]+,结合1HNMR和13CNMR光谱推测其分子式为：C11H12N5O2。1HNMR（400MHz,DMSO-d6）中有2个烯质子信号,δH7.02（1H,brs,H-2）,6.87（1H，brs，H－3）。3个NH信号δH11．80（1H，brs，NH－1），7．95（1H，brs，NH－7），9．02（1H，brs，NH－15），2个CH2信号δH3．35（2H，brs，CH2－9），3．24（2H，brs，CH2－8）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出11个碳原子信号，分别为：δC122．0（C－2），110．5（C－3），122．2（C－4），125．4（C－5），162．3（C－6），39．9（C－8），29．9（C－9），125．7（C－10），126．9（C－11），170．2（C－12），158．7（C－14）。
2.2化合物
2hymenialdisine,浅黄色粉末,ESI-MS给出准分子离子峰m/z:326[M+H]+,结合1HNMR和13CNMR光谱推测其分子式为：C11H12N5O2Br。1HNMR（400MHz，DMSO－d6）中有1个烯质子信号，δH6．95（1H，brs，H－3），3个NH信号δH11．58（1H，brs，NH－1），7．84（1H，brs，NH－7），9．40（1H，brs，NH－15），2个CH2信号δH3．35（2H，brs，CH2－9），3．24（2H，brs，CH2－8）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出11个碳原子信号，分别为：δC103．9（C－2），115．5（C－3），124．2（C－4），126．4（C－5），162．9（C－6），40．4（C－8），29．0（C－9），126．4（C－10），127．2（C－11），172．0（C－12），156．4（C－14）。
2.3化合物
3aldisin,白色粉末，EI-MS给出准分子离子峰m/z:164[M]+，结合1HNMR和13CNMR光谱推测其分子式为：C8H8N2O2。1HNMR（400MHz，DMSO-d6）中有2个烯质子信号，δH6．98（1H，d，J＝2．0Hz，H－2），6．55（1H，d，J＝2．0Hz，H－3），2个CH2信号δH3．35（2H，m，H－8），2．70（2H，m，H－9），2个NH信号δH12．11（1H，s，NH－1），8．30（1H，s，NH－7）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出8个碳原子信号，分别δC122．3（C－2），109．5（C－3），123．5（C－4），127．9（C－5），162．2（C－6），43．5（C－8），36．5（C－9），194．3（C－10）。
2.4化合物
43-bromoaldisin,黄色粉末,EI-MS给出准分子离子峰m/z:242[M]+,结合1HNMR和13CNMR光谱推测其分子式为：C8H7N2O2Br。1HNMR（400MHz，DMSO－d6）中有1个烯质子信号，δH6．57（1H，s，H－3），2个CH2信号δH2．71（2H，m，CH2－9），3．29（2H，m，CH2－8），2个NH信号δH12．97（1H，brs，NH－1），8．39（1H，brs，NH－7）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出8个碳原子信号，分别为δC121．3（C－2），110．9（C－3），124．6（C－4），129．4（C－5），161．3（C－6），43．4（C－8），36．3（C－9），193．6（C－10）。
2.5化合物
5尼克酰胺,白色粉末，ESI-MS给出准分子离子峰m/z:123[M+H]+,结合1HNMR和13CNMR光谱推测其分子式为：C6H6N2O。1HNMR（400MHz，DMSO－d6）中有4个芳香质子信号，δH7．52（1H，d，J＝8．0Hz，H－5），8．22（1H，d，J＝8．0Hz，H－4），8．70（1H，d，J＝4．8Hz，H－6），9．03（1H，brs，H－2）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出6个碳原子信号，分别为δC151．9（C－2），130．8（C－3），137．7（C－4），123．4（C－5），148．6（C－6），166．5（3－CONH2）。2.6化合物6胸腺嘧啶,浅黄色固体。1HNMR（400MHz，DMSO－d6）中有1个烯质子信号，δH7．25（1H，s，H－6），1个CH3信号δH1．73（3H，s，CH3－5）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出5个碳原子信号，分别为：δC151．5（C－2），107．6（C－4），137．7（C－5），165．0（C－6），11．8（CH3）。2.7化合物7尿嘧啶,浅黄色固体。1HNMR（400MHz，DMSO－d6）中有2个烯质子信号，δH5．45（1H，d，J＝7．6Hz，H－5），7．38（1H，d，J＝7．6Hz，H－6），2个NH信号δH11．02（1H，s，NH－1），7．95（1H，s，NH－7）。13CNMR（100MHz，DMSO－d6）共给出4个碳原子信号，分别为：δC151．5（C－2），164．3（C－4），100．2（C－5），142．2（C－6）。
3讨论
本文运用硅胶、凝胶柱色谱以及半制备液相色谱等方法,对采自中国南海西沙群岛海域的海绵Axinellasp.进行化学成分提取、分离和纯化，并通过质谱、核磁共振波谱等方法,鉴定化合物的结构。结果表明，从海绵Axinellasp.中分离的7个化合物，1HNMR和13CNMR数据与文献报道一致,依次鉴定为debromohymenialdisine（1）[2，7]、hymenialdisine（2）[2,7]、aldisin（3）[8]、3-bromoaldisin（4）[1]、尼克酰胺（5）[9]、胸腺嘧啶（6）[10]、尿嘧啶（7）[11]。化合物5-7为首次从该属海绵中分离得到。化合物1-4为吡咯烷型生物碱，其中化合物1-2是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的抑制剂[12]。本研究为该属海绵化合物今后的生物活性研究以及用途提供了基础资料。
作者：许娇娇 顾琼 单位：天津医科大学药学院 天津市临床药物关键技术重点实验室