山栀茶化学成分研究

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1材料与方法

1．1仪器与试药

RUDOLPH型自动旋光测定仪(A201102)，JE-OLECX500MHz核磁共振波谱仪(日本电子株式会社)，ACQUITY-TQD串联质谱仪，ACQUITYUP-LC超高液相色谱仪(美国沃特世公司)。D101大孔树脂(青岛海洋化工厂)，色谱用硅胶(200～300目)及硅胶GF254预制板为青岛海洋化工厂产品，MCI75～150(m为日本三菱化学公司产品;Seph-adexLH-20为瑞士PharmaciaBiotech公司产品;其他化学试剂均为分析纯。山栀茶药材采收于贵州省，经贵阳中医学院生药学教研室王世清教授鉴定为海桐花科海桐花属植物光叶海桐的根。

1．2提取与分离

取山栀茶药材粗粉11kg，用70%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩至浸膏，浸膏用水混悬，上D101大孔树脂层析柱，依次用水、70%乙醇、95%乙醇洗脱，分别用水洗脱、70%乙醇洗脱、95%乙醇洗脱3个部位。取70%乙醇洗脱部位400g，经硅胶柱层析以乙酸乙酯－甲醇(10∶06∶4，加0.1%醋酸)进行梯度洗脱，得组分S1～S3。组分S3经RP-18、SephadexLH-20、正相硅胶等反复柱层析分离纯化后，得到化合物1(87mg)、2(20mg)、3(60mg)、4(85mg)、5(7mg)及6(15mg)。S1依次经MCI、SephadexLH-20、硅胶等柱层析分离纯化得到化合物7(30mg)。

2结构鉴定

化合物(1)白色粉末，ESI-MSm/z:741．3［M-H］－．1H-NMR(600MHz，CD3OD)δ6.92(4H，s，H-2，6，2'，6')，4.88(2H，d，J=3.0Hz，H-7，7')，3.12(2H，m，H-8，8')，4.00(2H，dd，J=9.0，3.0Hz，H-9a，9'a)，4.15(2H，m，H-9b，9'b)，3.76(12H，s，3，3'，OCH3－5，5')，5.78(2H，d，J=6.6Hz，Glc-H-1，1')，4.30－4.39(12H，m，葡萄糖2～6位质子信号)。13C-NMR(150MHz，CD3OD)δ153.8(C-3，5，3'，5')，139.1(C-4，4')，134.7(C-1，1')，105.0(C-2，2')，105.0(Glc-C-1，1')，104.4(C-6，6')，86.7(C-7，7')，77.5(Glc-C-5，5')，77.0(Glc-C-3，3')，74.9(Glc-C-2，2')，72.7(C-9，9')，70.5(Glc-C-4，4')，61.7(Glc-C-6，6')，57.4(OCH3-3，3'，5，5')，54.7(C-8，8')。所得数据与文献［8］报道的丁香脂素-4，4'-双-O-β-D-葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为丁香脂素-4，4'-双-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物(2)白色粉末，ESI-MSm/z:417.1［M+HCOO］－.1H-NMR(600MHz，CD3OD)δ6.75(2H，s，H-3，5)，6.55(1H，d，J=15.9Hz，H-7)，6.33(1H，d，t，J=15.9，5.5Hz，H-8)，4.23(2H，d，J=5.5Hz，H-2，9)，3.86(6H，s，OCH3－2)，3.35～3.70(6H，m，葡萄糖2～6位质子信号)。13C-NMR(150MHz，CD3OD):154.1(C-2)，154.1(C-6)，135.7(C-1)，135.1(C-4)，131.1(C-8)，129.8(C-7)，105.2(C-3)，105.2(C-5)，63.4(C-9)，56.8(2-OCH3)，105.1(Glc-1)，78.2(Glc-5)，77.6(Glc-3)，75.5(Glc-2)，71.4(Glc-4)，62.4(Glc-6)。所得数据与文献［9］报道的紫丁香苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为紫丁香苷。

化合物(3)无色粉末，ESI-MSm/z:477.2［M－H］－.1H-NMR(600MHz，CD3OD)δ6.46(2H，s，H-2，H-6)，4.96(1H，d，J=2.6Hz，H-1″)，4.79(1H，d，J=7.5Hz，H-10)，4.02(2H，d，J=9.2Hz，H-6')，3.94(1H，d，J=9.6Hz，H-4″)，3.87(1H，d，J=2.6Hz，H-2″)，3.81(6H，s，OCH3-3，5)，3.75(1H，d，J=9.5Hz，H-4″)，3.70(3H，s，OCH3-4)，3.63～3.53(4H，m，葡萄糖2～6位质子信号)，3.42(2H，s，H-5″)。13C-NMR(150MHz，CD3OD)δ156.0(C-1)，154.8(C-3，C-5)，134.5(C-4)，110.8(C-1″)，103.1(C-1')，96.2(C-2，C-6)，80.5(C-3″)，77.9(C-3')，77.8(C-2″)，77.0(C-4″)，74.9(C-2'，C-5')，71.6(C-4')，68.8(C-6')，65.3(C-5″)，61.2(OCH3-4)，56.7(OCH3-3，5)。所得数据与文献［10］报道的3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-(16)-β-D-吡喃葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为3，4，5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-(16)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物(4)无色粉末，ESI-MSm/z:579.2［M–H］－.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ6.69(2H，d，H=2，6)，6.63(2H，d，H-2'，6')，4.86(1H，d，J=7.2Hz，Glc-H-1″)，4.74(1H，m，H-7)，4.69(1H，m，H-7')，4.25(2H，m，H-9a，9'a)，3.88(2H，m，H-9b，9'b)，3.81～3.83(12H，m，OCH3-3，5，3'，5')，3.75(1H，m，Glc-H-6″a)，3.64(1H，m，Glc-H-6″b)，3.44(1H，m，Glc-H-2″)，3.38(2H，m，Glc-H-3″，4″)，3.33(1H，m，Glc-H-5″，3.28(2H，m，H-8，8')。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ154.4(C-3，5)，149.3(C-3'，5')，139.5(C-1)，136.1(C-4')，135.5(C-4)，133.0(C-1')，105.3(Glc-C-1″)，104.8(C-2，6)，104.5(C-2'，6')，87.6(C-7')，87.1(C-7)，78.3(Glc-C-5″)，77.8(Glc-C-3″)，75.7(Glc-C-2″)，72.9(C-9，9')，71.3(Glc-C-4″)，62.5(Glc-C-6″)，57.0(OCH3-3'，5')，56.8(OCH3-3，5)，55.7(C-8')，55.5(C-8)。所得数据与文献［11］报道的丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物(5)无色粉末，ESI-MSm/z:521.2［M–H］－.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ6.77(1H，d，J=1.5Hz，H-2')，6.72(1H，d，J=8.0Hz，H-5')，6.62(1H，s，H-2)，6.61(1H，d，J=1.5Hz，H-6')，6.15(1H，s，H-5)，4.09(1H，d，J=7.7Hz，H-1″)，3.82(1H，m，H-8')，3.78(6H，s，OCH3-3，3')，3.63(2H，m，H-9)，3.33(2H，m，H-9')，3.30～3.20(6H，葡萄糖2～6位质子信号)，2.80(2H，m，H-7)，2.04(1H，m，H-8)，1.77(1H，m，H-7')。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ148.9(C-3)，147.1(C-3')，145.8(C-4)，145.1(C-4')，138.7(C-1')，134.4(C-6)，129.1(C-1)，123.1(C-6')，117.4(C-5)，116.1(C-5')，114.3(C-2')，112.3(C-2)，105.2(C-1″)，78.1(C-5″)，77.9(C-3″)，75.2(C-2″)，71.6(C-4″)，69.5(C-9')，65.2(C-9)，62.8(C-6″)，56.4(OCH3-3，3')，47.9(C-8')，45.9(C-7')，39.5(C-8)，33.9(C-7)。所得数据与文献［12］报道的异落叶松树脂醇-9'-O-β-D-葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为异落叶松树脂醇-9'-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物(6)无色粉末，ESI-MSm/z:587.2［M–H］－.1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ6.56(1H，brs，H-8)，6.41(2H，brs，H-2，6)，4.41(1H，d，J=5.9Hz，H-4)，4.22(1H，d，J=7.7Hz，H-1″)，3.83(1H，m，H-3'a)，3.79(3H，s，OCH3-7)，3.82(1H，m，Glc-H-6a)，3.72(6H，s，OCH3-3'，5')，3.63(2H，Glc-H-6b，H-2'a)，3.54(1H，dd，J=7.7，14.7Hz，H-2'b)，3.43(1H，d，J=6Hz，H-3'b)，3.33(3H，s，OCH3-5)，3.30～3.20(6H，葡萄糖2～6位质子信号)，2.70(1H，dd，J=4.0，15.1Hz，H-1a)，2.60(1H，dd，J=11.8，14.5Hz，H-1b)，2.05(1H，brs，H-3)，1.69(1H，brs，H-2)。13C-NMR(100MHz，CD3OD)δ148.9(C-3'，5')，148.6(C-7)，147.5(C-5)，139.4(C-6)，138.9(C-1')，134.4(C-4')，130.1(C-9)，126.4(C-10)，107.8(C-8)，106.8(C-2'，6')，104.8(Glc-C-1)，78.2(Glc-C-5)，77.9(Glc-C-3)，75.2(Glc-C-2)，71.6(C-3')，71.3(Glc-C-4)，66.1(C-2')，62.8(Glc-C-6)，60.1(OCH3-5)，56.8(OCH3-3'，5')，56.5(OCH3-3)，46.7(C-3)，42.8(C-4)，40.5(C-2)，33.9(C-1)。所得数据与文献［13］报道的南烛木树脂酚-9'-O-β-D-葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为南烛木树脂酚-9'-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物(7)无色粉末，ESI-MSm/z:415.1［M+HCOO］－.1H-NMR(400MHz，C5D5N)δ9.86(1H，d，J=7.7Hz，H-9)，7.49(1H，d，J=15.8Hz，H-7)，7.04(2H，s，H-2，6)，6.95(1H，dd，J=7.8，15.8Hz，H-8)，4.54～4.21(6H，m，葡萄糖2～6位质子信号)，4.02(1H，m，糖上OH)，3.81(6H，OCH3-2)，糖上的端基质子信号被吡啶溶剂峰覆盖。13C-NMR(100MHz，C5D5N)δ193.7(C-9)，153.9(C-7)，153.2(C-3，5)，138.5(C-4)，130.2(C-1)，128.4(C-8)，107.4(C-2，6)，104.2(C-1')，79.1(C-3')，78.5(C-5')，76.1(C-2')，71.6(C-4')，62.6(C-6')，56.6(OCH3-2)。所得数据与文献［14］报道的芥子醛葡萄糖苷波谱数据基本一致，故鉴定该化合物为芥子醛葡萄糖苷。

3讨论

通过对山栀茶镇痛有效组分进行了化学成分研究，从中分离鉴定得到7个化合物。其中，据Jung等［15］报道，以5、10mg/kg口服给药后，丁香脂素-4，4'-双-O-β-D-葡萄糖苷(1)在醋酸扭体法和热板法两个模型中均显示出较强的镇痛活性。故认为山栀茶镇痛有效组分的镇痛作用与丁香脂素-4，4'-双-O-β-D-葡萄糖苷(1)的存在有关。由于未见相关报道，其余化合物是否具有镇痛活性尚待进一步研究。本论文为寻找山栀茶的镇痛活性成分、确定山栀茶及其相关制剂的质量控制方法奠定了实验基础。

作者：乔里 单位：贵阳医学院