厄贝沙坦氢氯噻嗪片中厄贝沙坦的人体生物等效性研究

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摘要：目的 研究厄贝沙坦氢氯噻嗪片中厄贝沙坦的相对生物利用度并评价其人体生物等效性。方法 健康男性志愿者22例，随机双交叉单剂量口服受试制剂和参比制剂，剂间间隔为2w。采用高效液相色谱一质谱联用法侧定血药浓度并拟合药动学参数，评价其生物等效性。结果 参比制剂和受试制剂中厄贝沙坦的Cmax分别为2066.3±566.9 ng・mL-1和2001.0±452.0 ng・mL-1；Tmax分别为1.2±0.7 h和1.3±0.7 h；AUC0-24h分别为7787.9±1753.6ng・mL-1・h和8340.0±2397.0ng・mL-1・h；AUC0-∞分别为8477.0±2137.1ng・mL-1・h和8806.8±2546.3 ng・mL-1・h；t1/2分别为8.0±7.7h和7.1±5.5h。与参比制剂相比，受试制剂中厄贝沙坦的生物利用度为（107.4±19.9）%。结论 受试制剂与参比制剂中的厄贝沙坦具生物等效性。

关键词：厄贝沙坦；生物等效性；相对生物利用度；液质联用

厄贝沙坦氢氯噻嗪片是厄贝沙坦和氢氯噻嗪组成的复方制剂。厄贝沙坦氢氯噻嗪片联合应用，既可通过抑制肾素血管紧张素醛固酮系统改善血压又可降低血容量协同降压，两药的互补使得厄贝沙坦氢氯噻嗪片具有良好的降压效果，同时可逆转氢氯噻嗪引起的血清尿酸升高和血钾降低。故本文建立了LC-MS法测定22名健康男性志愿者口服厄贝沙坦氢氯噻嗪片后厄贝沙坦的血药浓度并拟合药动学参数，评价其生物等效性，为临床用药提供参考。

1 仪器、试药与试验对象

1.1仪器与试药 仿制制剂：厄贝沙坦氢氯噻嗪片（河北龙海药业有限公司提供）；参比制剂：厄贝沙坦氢氯噻嗪片（赛诺菲安万特（杭州）制药有限公司）；厄贝沙坦对照品、氢氯噻嗪、氯沙坦钾对照品（均由中国药品生物制品检定所提供）；甲醇、甲酸、乙腈均为色谱纯，实验用水为市售乐百氏纯净水。

Surveyor MS Pump Plus，Surveyor AS Plus，TSQ Quantum三级四极杆质谱仪（配有电喷雾离子源），BP211D型天平，TG16-WS台式高速离心机，固相萃取小柱OASIS HLB，XW-80A旋涡混合器。

1.2 一般资料 18～30岁中国健康志愿者，试验前，对健康受试者进行病史询问和常规体格检查，包括心电图、胸透、肝功、肾功、血常规、尿常规和乙肝表面抗原检查等，共入选22名男性受试者，年龄（24±2）岁，体重（65±5）kg，身高1.72±0.05m，体格检查情况均正常。

受试者在试验前3个月内未献血，未作为受试者参加新药试验；服药前2w及受试期间禁用其它药物、烟酒及其它含咖啡因、柯柯碱、茶碱的饮料；受试期间禁止剧烈运动。

2 方法与结果

2.1实验方案 采用两制剂双周期交叉试验设计。将受试者按体重随机分为两组，一组先服用参比制剂后服用受试制剂，另一组先服用受试制剂后服用参比制剂，清洗期为1w，药物剂量均为厄贝沙坦150mg，氢氯噻嗪12.5mg。

服药后2h定量饮水，4h、10h后统一进餐，于服药前及后0.25，0.5，0.75，

1，1.5，2，3，4，6，8，12，24，36及48 h由肘静脉采血4mL，置肝素抗凝试管中，3000r・min-1离心10min，分离血浆，置-70℃下冻存，备用。

血浆样品，经固相萃取小柱预处理得洗脱液，将洗脱溶液混匀取100 L装入自动进样器小瓶，取10 L进行 LC/MS/MS分析，记录色谱图。

2.2 测定条件

2.2.1色谱条件 分析柱为Agilent Zorbax SB-C18（1.8 m， 4.6×50mm），保护柱为Phenomenex C18（4 2.0 mm），美国Phenomenex公司；流动相：甲醇-乙腈-1.5；甲酸水溶液（40：25：35， v/v/v）；流速：300 L・min-1；进样量：10 L。柱温：25℃。

2.2.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子化（ESI）源；喷雾电压为3000 V；鞘气（Sheath Gas ）为45 psi；辅助气（Aux Gas）为5 Arb；碰撞气为1.5mTorr；检测方式为负离子多离子反应监测（SRM），用于定量分析的离子反应分别为m/z 427.2 m/z193.0（厄贝沙坦），m/z295.9 m/z204.9 和268.9（氢氯噻嗪），m/z 421.1 m/z179.1（内标，氯沙坦），碰撞诱导解离（CID）电压为29V（厄贝沙坦），25V（氢氯噻嗪204.9）和22 V（氢氯噻嗪268.9），29 V（内标，氯沙坦），扫描时间均为200 ms。

2.3标准曲线的制备 取空白血浆400 L置离心试管中，分别加入不同浓度的厄贝沙坦氢氯噻嗪标准系列溶液20 L，配制成含厄贝沙坦的终浓度分别为20、50、100、250、500、1000、2000、4000ng・mL-1的血浆样品，除不加内标溶液外，其余按"2.3"项下操作，进行LC-MS/MS分析， 获得相应峰面积。以待测物的浓度为横坐标，待测物与内标的峰面积比为纵坐标，用加权最小二乘法（W=1/C2）进行回归计算，求得直线回归方程，厄贝沙坦的线性范围为20～4000ng・mL-1，定量下限为标准曲线的最低浓度点20ng・mL-1，结果表明，厄贝沙坦的血浆浓度在20～4000ng・mL-1范围内线性关系良好，相关系数（R2）在0.9977～0.9985之间。

2.4分析方法的确证

2.4.1方法学考察 线性考察：厄贝沙坦的血浆浓度在20～4000ng・mL-1范围内线性关系良好，相关系数（R2）在0.9977～0.9985；专属性：血浆中内源性物质不干扰样品的测定；精密度准确度：厄贝沙坦在高、中浓度点的日内和日间相对标准偏差（RSD%）均不超过9.8%，低浓度点（定量限附近）的日内和日间相对标偏差（RSD%）不超过11.5%，准确度在100.4%～102.9%；提取回收率：在50、500和3200ngomL-1三个浓度的血浆样品提取回收率分别为（81.8±1.9），（82.0±0.7），（86.2±2.5）；稳定性实验显示：血浆样品在室温放置24h、冻融3次、处理后在室温放置24h以及-70℃冻存30d的条件下稳定性良好。

2.5血药浓度-时间曲线 22名健康受试者口服单剂量厄贝沙坦氢氯噻嗪片（厄贝沙坦150mg，氢氯噻嗪12.5mg）后，计算各时间点的血药浓度，22名健康受试者平均血药浓度-时间曲线见图1。

图1 22名受试者口服单剂量参比和受试制剂后厄贝沙坦的平均血药浓度-时间曲线

受试者采血时间到服药后48h，血样测定时厄贝沙坦36、48h点多数低于定量限，因此计算药代参数时厄贝沙坦计算到24h。

根据22名受试者口服单剂量厄贝沙坦氢氯噻嗪片后的药代动力学参数，以AUC0-t计算，受试制剂中厄贝沙坦的相对生物利用度为（107.4±19.9）%；

Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后做方差分析，受试制剂与参比制剂均无统计学显著差异（P>0.05），双向单侧t检验结果表明受试制剂Cmax的90%可信限落在参比制剂75%～133%范围，受试制剂AUC的90%可信限均落在参比制剂80%～125%范围内；Tmax经非参数秩和检验，受试制剂与参比制剂无统计学显著差异（P>0.05）。

22名健康受试者口服单剂量受试和参比制剂后对厄贝沙坦的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞经对数转换后进行群体等效性分析，PBE分析结论均合格。上述结果表明，受试制剂与参比制剂中厄贝沙坦在体内具生物等效性。

3讨论

文献报道有采用HPLC-UV[1]、CAP-HPLC[2]方法检测血浆厄贝沙坦和氢氯噻嗪浓度。本研究的血浆处理采用LC-MS的方法，获得了相对理想的色谱峰，且具有快捷、准确、稳定性好、专属性高的优点，可用于厄贝沙坦氢氯噻嗪片，人体生物等效性的血药浓度检测。

本研究显示，22名健康男性志愿者口服单剂量厄贝沙坦氢氯噻嗪片后，受试制剂与参比制剂的主要药动学参数之间无显著性差异，因此受试制剂与参比制剂中的厄贝沙坦具生物等效性。

参考文献：

[1]廉建伟，邓新秀，王志伟，等.复方厄贝沙坦分散片在健康志愿者体内的生物等效性[J].中国临床药学杂志.2008.105-108.

[2]丁一冰，樊夏雷，沈建平，等.Cap-HPLC测定人血浆中厄贝沙坦和氢氯噻嗪浓度及其复方制剂的生物等效性研究[J].中国药科大学学报.2005.551-555.编辑/许言